MicroRNA-340在肝细胞肝癌中抑制细胞增殖并促进凋亡

目的探讨微RNA-340(miR-340)在肝细胞肝癌中的表达特点及其对细胞生物学行为的影响。方法收集重庆医科大学附属第一医院肝胆外科2015年3月至2016年9月收治的40例肝细胞肝癌患者手术后切除的癌组织和癌旁组织标本。通过qPCR检测组织标本中miR-340的表达,并分析miR-340表达与临床病理学指标的关系。分别培养肝癌细胞株Hep3B、Bel-7402、HepG2和SMMC-7721以及正常肝细胞株HL-7702,48h后使用qPCR检测5种细胞中miR-340的表达水平。通过转染增加或抑制SMMC-7721细胞中miR-340的表达,然后分别于细胞培养24、48、72h后采用CCK-8法检测SMMC-7721细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。通过生物信息学软件预测miR-340的靶基因,并使用qPCR和蛋白质印迹法进一步验证miR-340对靶基因的作用。结果癌组织中miR-340的表达低于癌旁组织(P<0.01),并且miR-340的表达与乙肝表面抗原、HBV DNA载量、肿瘤大小以及临床TNM分期有关(P<0.01)。正常肝细胞HL-7702内miR-340的表达高于4种肝癌细胞Hep3B、Bel-7402、HepG2和SMMC-7721(P<0.05,P<0.01)。增加miR-340表达可抑制SMMC-7721细胞的增殖(P<0.05,P<0.01),而抑制miR-340的表达则促进SMMC-7721细胞的增殖(P<0.05,P<0.01);增加miR-340的表达可促进SMMC-7721细胞的凋亡(P<0.01),而抑制miR-340则减少凋亡(P<0.01)。生物信息学分析显示S期激酶相关蛋白2(SKP2)基因是miR-340下游的一个靶基因。qPCR和蛋白质印迹分析结果显示增加SMMC-7721细胞中miR-340的表达可抑制SKP2的mRNA和蛋白表达,抑制miR-340表达则增加SKP2的mRNA和蛋白表达。结论 miR-340的异常表达可能与乙肝病毒的感染有关,其异常表达有助于评价病情以及预后。在肝癌细胞系SMMC-7721细胞中,miR-340能够抑制细胞增殖并促进凋亡,这一作用结果可能是通过miR-340对SKP2的抑制而实现的。

循环miR-338-5p、miR-15b-5p和miR-21-5p作为肝细胞癌的潜在肿瘤标记物

目的筛查血浆中能作为肝细胞癌肿瘤标记物的miRNA。方法分为4个阶段：1miRNA芯片筛查肝细胞癌组织中异常表达的miRNA,并根据文献和miRNA芯片结果确定候选miRNA。213对术前和术后7~10 d肝细胞癌患者血浆用定量逆转录-聚合酶链反应（quantitative reverse transcriptionpolymerase chain reaction,qRT-PCR）检测候选miRNA的表达水平,术后表达水平下降的miRNA定为目的miRNA。339例肝细胞癌患者、32例肝硬化患者、25例健康人员血浆进行qRT-PCR,验证目的miRNA在3组人群中的表达差异。4分析目的 miRNA作为肝细胞癌肿瘤标记物的诊断价值,绘制受试者工作曲线并分析其与临床参数的相关性。结果癌组织中40种miRNA表达量增加（〉2倍）,52种miRNA表达量明显下降（〈0.5倍）。结合文献,选取miR-15b-5p、miR-21-5p、miR-338-5p作为候选miRNA。术后3种miRNA表达水平下降,定为目的 miRNA。3组人群测量结果显示miR-15b-5p、miR-21-5p、miR-338-5p在肝细胞癌患者血浆中表达水平明显高于肝硬化患者和健康对照人群。其中miR-338-5p在肝细胞癌与肝硬化、健康人群鉴别时,曲线下面积（area under the curve,AUC）分别为0.762 4（灵敏度：64.10%,特异度：87.50%）和0.906 4（灵敏度：89.74%,特异度：84.00%）。miR-21-5p和miR-338-5p进行联合诊断,特异度可达92.98%。即使在甲胎蛋白（α-fetoprotein,AFP）判定为阴性的肝细胞癌患者,3种miRNA判定为肝细胞癌的灵敏度都比较高。相关性分析结果显示,血浆miR-338-5p水平与AFP水平呈负相关（r=-0.344,P=0.032）。结论循环miR-338-5p、miR-15b-5p、miR-21-5p具有作为肝细胞癌的肿瘤标记物的潜力。

微RNA-186在人肝细胞肝癌中的表达及作用

目的:检测微RNA-186(miRNA-186,miR-186)在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织和细胞中的表达水平,以及其对肝癌SMMC-772细胞生物学特性的影响。方法:采用实时荧光定量PCR法检测34对HCC组织及其对应癌旁组织中miR-186的表达情况,同时检测4株HCC细胞(Hep G2、Hep3B、SMMC-7721和BEL-7402)以及正常肝细胞株HL-7702中miR-186的表达情况。将携带有miR-186-模拟物(mimics)和miR-186-抑制物(inhibitor)的真核表达载体转染至SMMC-7721细胞后,分别采用CCK-8法、FCM法以及Transwell小室迁移和侵袭实验检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的变化。分别采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法进一步检测miR-186对靶基因ROCK1的作用。结果:miR-186在HCC组织中的表达量为0.034±0.033,明显低于其在癌旁组织中的表达量0.077±0.056(P<0.001)。临床病理学特征分析结果显示,HCC组织中miR-186的表达量与肿瘤大小和TNM分期有关(P值均<0.05)。miR-186在HCC细胞中的表达量均明显低于正常肝细胞(P值均<0.05),其中以在SMMC-7721细胞中的表达水平最低。与对照组相比,miR-186-mimics组细胞在各时间点的增殖活性均明显降低,而miR-186-inhibitor组细胞在各时间点的增殖活性均明显升高(P值均<0.05);miR-186-mimics组细胞的凋亡率明显升高,而miR-186-inhibitor组细胞凋亡率明显降低(P值均<0.05);miR-186-mimics组细胞的迁移和侵袭能力明显降低,而miR-186-inhibitor组细胞的迁移和侵袭能力明显增强(P值均<0.05)。过表达miR-186能够降低ROCK1 m RNA及蛋白的表达水平,抑制miR-186表达则会上调ROCK1 m RNA及蛋白的表达水平(P值均<0.05)。结论:miR-186在HCC组织和细胞中均低表达,并能够通过下调ROCK1的表达来抑制HCC细胞的增殖、迁移和侵袭,同时促进细胞凋亡。

腹腔镜下十二指肠乳头肿瘤的局部切除

目的总结腹腔镜下十二指肠乳头肿瘤局部切除的治疗过程,探讨其安全性和可行性。方法回顾性分析四川大学华西医院于2021年6月收治的1例十二指肠乳头神经内分泌肿瘤患者的临床病理资料及手术过程。结果该患者行腹腔镜下十二指肠乳头肿瘤局部切除+原位胆肠及胰肠吻合术。手术持续时间约3 h,出血量约20 mL,术后第3天患者排气。于术后第7天拔出胃管后开始经口进食,于第8天拔出血浆引流管,顺利出院。术后无十二指肠瘘、出血、切口感染等并发症发生。术后随访半年,患者一般情况良好,未见肿瘤复发、转移征象。结论腹腔镜下十二指肠肿瘤局部切除对于累及乳头的良性或低度恶性肿瘤不失为一种合适的选择。