心脏瓣膜病瓣膜置换术中心肌保护的研究——Ⅳ.温血及温血加丹参连续逆灌对心肌糖原、线粒体及所含钙粒的动态定量比较观察

本研究证明,温血(A组)及温血丹参(B组)连续逆灌法均显示良好的心肌保护效果,而且B组优于A组。两组时相Ⅲ,再灌注损伤程度较轻,线粒体VvCa A组增大,但较冷钾稀释血顺灌或逆灌分别减少37%或42%,B组仍保持时相Ⅱ的水平,较之减少82%或84%,至时相Ⅳ,两组各项指标均有明显改善,而Vvms,B组却较A组多减少28%,VvGl较A组多增加25%,VvCa恢复到时相Ⅰ水平,而A组却较时相Ⅰ水平增高25%,两组对心肌细胞主要敏感成份的保护效果均已达到安全标准,可使心脏停搏的安全期限大大延长。

冷钾稀释血顺灌及逆灌对心肌毛细血管保护效果的动态定量观察

体外循环条件下（降温至３０℃，灌流液４℃），对应用顺灌（主动脉根部灌）和逆灌（冠状静脉窦灌）的２０例风湿性心脏瓣膜病患者左心房肌毛细血管作了动态形态定量观察。结果表明，二组分别观察１５７和１４４个毛细血管，断面变化一致，主要是内皮细胞肿胀，较正常平均增厚０．４０～０．４１μｍ。内皮细胞肿胀始于时相Ⅰ。与原病变和中断心跳有关。时相Ⅳ内皮持续肿胀，而狭窄管腔扩大，是由于复灌注压的作用，内皮肿胀有待复流后期恢复，未见复流障碍。二组差别是，逆灌组管腔扩大提前到时相Ⅲ，内皮肿胀发生率于时相Ⅳ明显降低，显示逆灌的保护效果优于顺灌法。

复方丹参滴丸对离体大鼠缺氧/复氧心肌的保护作用

目的和方法 :采用Langendorff大鼠离体心脏灌流技术 ,制备心肌缺氧 /复氧损伤模型 ,分别在缺氧前及缺氧后 ,用复方丹参滴丸及消心痛对心肌给予保护 ,利用高效液相色谱仪 (HPLC)测定离体大鼠心肌组织中的高能磷酸化合物的含量变化 ,利用H - 6 0 0透射电子显微镜对心肌细胞超微结构进行观察。本实验共分 6组 :正常对照组 ;单纯缺氧 /复氧组 ;复方丹参滴丸前、后保护组 ;消心痛前、后保护组。结果 :①单纯缺氧 /复氧组心肌组织中AMP、ADP、ATP及AN含量均明显低于正常对照组 (P <0 0 1)。②复方丹参滴丸前、后保护组大鼠心肌组织内的AMP、ADP、ATP、AN含量均高于单纯缺氧 /复氧组 (P <0 0 1) ,也相应高于消心痛前、后保护组 (P <0 0 1) ,两组的ATP、AN含量均接近正常水平 (P >0 0 5 )。③消心痛前、后保护组的AMP、ADP、ATP、AN含量均低于正常对照组 (P<0 0 1)。电镜结果也证明复方丹参滴丸对缺氧 /复氧心肌细胞超微结构具有明显的保护作用。结论 :复方丹参滴丸无论在缺氧前预灌注时及缺氧后再灌注时给予 ,均能通过提高心肌组织中高能磷酸化合物的含量 ,保护心肌细胞超微结构来保护心肌 ,其保护效果优于消心痛。

复方丹参滴丸对缺氧心肌细胞内钙离子平均荧光强度的影响

目的 :探讨复方中药丹参滴丸对缺氧 /复氧心肌细胞的保护作用。方法 :培养的乳鼠心肌细胞 ,用钙探针Fluo - 3/AM染色 ,利用激光扫描共聚焦显微镜观察心肌细胞缺氧 /复氧及在复方丹参滴丸保护作用下心肌细胞内钙离子荧光强度变化。结果 :缺氧加丹参保护组 ,细胞内钙离子荧光强度 (12 17 78± 312 0 7)明显低于单纯缺氧组 (15 0 9 43± 5 0 8 5 8) ;缺氧复氧加丹参组 ,细胞内钙离子荧光强度为 (15 6 7 91± 5 77 6 1) ,亦较缺氧再给氧组 (16 17 6± 477 5 3)低。结论 :复方丹参滴丸对缺氧心肌细胞有明显保护作用。

复方丹参滴丸对培养的乳鼠心肌细胞缺氧及缺氧/复氧时Fas/FasL蛋白表达的影响

探讨复方丹参滴丸 (DanShenPill,DSP)对培养的乳鼠心肌细胞缺氧及缺氧 /复氧时凋亡相关基因Fas/FasL蛋白表达的影响。方法 :按常规培养新生 4d乳鼠心肌细胞 ,于培养 2 4h后进行缺氧及缺氧 /复氧实验 ,以免疫组织化学方法检测心肌细胞Fas/FasL蛋白表达的变化。结果 :缺氧 4 5h及 10 5h后 ,心肌细胞Fas/FasL蛋白的阳性表达指数 (positiveexpressionindex ,PEI %)均显著高于对照。 10 5h组与 4 5h组无明显差异。复方丹参滴丸组PEI明显低于缺氧组 (P <0 0 5 )。缺氧 30min后再给氧 4h与 10h ,心肌细胞Fas/FasL蛋白的PEI显著高于对照 ,复氧 10h组与 4h组无明显差异 ,复方丹参滴丸组PEI低于缺氧复氧组 (P <0 0 5 )。结论 :缺氧及缺氧 /复氧时均有凋亡相关基因Fas及其配体FasL蛋白表达的增强 ,复方丹参滴丸可通过下调Fas/FasL蛋白表达以减少凋亡从而减轻缺氧损伤及缺氧 /复氧损伤。

急性心肌缺血再灌注损伤及其保护的研究——丹参制剂的作用

本文实验材料为家兔心肌,用高效液相色谱法测定腺苷酸类,用分光光度法测定脂质过氧化物和用原子吸收光谱法测定钙的含量。研究表明缺血再灌组ATP、ADP、AMP、AN(腺苷酸总量)、ATP/ADP、ATP/AMP和能荷均比缺血组(Ⅰ)丹参保护组(D)的非缺血区与缺血区中上述指标水平明显降低(P<0.001或P<0.01),与Ⅰ组和D组的非缺血区与缺血区比较,缺血再灌组的缺血区脂质过氧化物水平明显增加(P<0.001)。而该组缺血区心肌钙亦明显增加(P<0.001)。本文研究结果进一步证明丹参可以保护缺血再灌损伤的心肌。

冬虫夏草醇提取物对大鼠缺血再灌注过程心肌保护作用研究

目的和方法：观察冬虫夏草对缺血再灌注过程心肌保护作用。采用Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆ非循环式离体心脏灌流方法，与正常对照组、缺血再灌组、刺五加注射液用药组相对比，研究了冬虫夏草醇提取物对大鼠心肌缺血－再灌注过程脂质过氧化产物（ＭＤＡ）和腺嘌呤核苷酸含量的影响。结果：冬虫夏草醇提取物显著降低了再灌注心肌的ＭＤＡ水平（Ｐ＜０．０１）及显著提高了心肌中腺嘌呤核苷酸含量（Ｐ＜００１）。结论：冬虫夏草可通过改善心肌的能量代谢减少缺血再灌注损伤。

丹参酮Ⅱ-A对豚鼠单个心室肌细胞跨膜电位及L-型钙电流的影响

本实验采用膜片钳全细胞式记录方法，观察了丹参酮Ⅱ－Ａ（ＤＳＴ）对豚鼠单个心室肌细胞跨膜电位及Ｌ－型钙电流的影响。用蛋白酶（０．２ｍｇ／ｍｌ）循环消化的方法获取了７８－８０％耐钙心肌嵪赴Ｊ笛楸砻鳎模樱阅芟灾醵屉嗍笮募〉ハ赴亩鞯缥皇背蹋ǎ粒校模始亮恳览倒叵担ǎ颍剑埃梗梗欢跃蚕⒌缥唬ǎ遥校┪藓斡跋欤唬模樱裕保唉蹋恚铮臁ぃ蹋倍猿洌ǎ希樱┖投鞯缥环龋ǎ粒校粒┪尴灾跋欤模樱裕玻唉蹋恚铮臁ぃ蹋焙停矗唉蹋恚铮臁ぃ蹋痹蚰苁梗希雍停粒校撩飨约跎伲毙募∠赴谋３值缪刮矗埃恚郑剑埃恚郑碳さ缪故背涛玻担埃恚螅德饰埃担龋保保埃玻昂停矗唉蹋恚铮臁ぃ蹋保模樱钥墒梗蹋透颇谙蚍宓缌鞣直鸺跎伲常担玻ァⅲ担罚罚ズ停罚矗罚ィǎ校迹埃埃担圆煌缪棺畲蠹せ罡频缌鞯牡缪挂览登呒拔榷せ钋呶抻跋臁Ｏ匀唬げ瓮颍辆哂欣嗨埔觳Ｑ蹋透仆ǖ雷瓒霞磷饔谩？

缺血/再灌注对大鼠心肌线粒体电子传递与质子泵出偶联的影响

本实验采用Langendorff灌流装置造成大鼠心肌缺血/再灌模型,用差速离心法分离线粒体,用Clark氧电极测定RCR、ADP/O,用铁氰化钾脉冲法测定了呼吸链电子传递及质子泵出初速度。结果表明,H^+/2e在缺血时与对照比无显著差异,而再灌组显著低于对照,H^+/2e下降早于ADP/O下降。RCR、ADP/O在缺血早期及再灌时显著高于对照。

快速等浓度洗脱高效液相色谱法测定心肌组织中的能量物质

本文利用快速等浓度洗脱高效液相色谱技术,测定心肌组织中肌酸(Cr)、磷酸肌酸(PCr)、次黄嘌呤(Hypo)、尼克酰胺腺嘌呤二核营酸(NAD),腺苷一磷酸(AMP)、腺苷二磷酸(ADP)、腺苷三磷酸(ATP)和环一磷酸腺苷(cAMP),同时检测与能量代谢有关的标准物质色谱。检测结果表明,等浓度洗脱高效液相色谱技术,可测定与能量代谢有关的18种物质,其中八种物质可同时测定,此八种标准物质的重复性(CV%在0.97-3.78%)和回收率(88.1-117.6%),均符合方法学要求。因此,该技术是测定心肌等生物组织中能量物质的较理想方法。

复方丹参滴丸对人血管内皮细胞功能及形态保护作用的研究

目的:观察复方丹参滴丸对细菌内毒素(LPS)所致人血管内皮细胞功能及形态结构损伤的作用。方法:人脐静脉内皮细胞培养,建立脂多糖损伤模型(以10 mg/L的LPS培养液培养细胞12 h),按分组分别把不同浓度的丹参滴丸(1 g/L、0.5 g/L、0.25 g/L、0.1 g/L)于损伤前、损伤后加入,分别进行细胞活力、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、内皮素(ET-1)、细胞内钙浓度的测定及倒置显微镜、倒置相差显微镜、激光共聚焦显微镜、透射电镜等形态学指标观察。结果:损伤后给不同浓度丹参滴丸对LPS所致人血管内皮细胞损伤均有明显减轻(P<0.05)。其中0.5 g/L作用最为突出(P<0.01)。损伤前给药只有浓度0.5 g/L、0.25 g/L对LPS所致内皮细胞损伤有明显减轻(P<0.05),而高浓度(1 g/L)、低浓度(0.1 g/L)虽亦有减轻,但无统计学意义(P>0.05)。损伤前、后分别给予不同浓度滴丸后,LPS所致血管内皮细胞形态结构损伤均有明显减轻。结论:丹参滴丸对血管内皮细胞具明显保护作用。

丹参素对大鼠心肌缺血/再灌注致线粒体变化的影响及其作用机理的探讨

本实验分别以ESR自旋标记法、TBA比色法测定大鼠离体心脏缺血,再灌注时线粒体膜流动性及脂质过氧化物含量。发现心肌线粒体膜深层的流动性在缺血40分钟后有氧再灌注20分钟时(S=0.112±0.006、τ_e=7.13±0.09×10^(-10)sec)明显低于富氧灌注组(S=0.103±0.007、τ_e=6.86±0.20×10^(-10)sec),P<0.05;而脂质过氧化物含量再灌注组(3.02±0.68nmol/mgpr.)则极明显高于富氧灌注组(1.94±0.35nmol/mgpr.),P<0.01。预先给予丹参素,对以上变化有明显的改善作用,上述两项指标与富氧灌注组相比,无明显差别,P>0.05。另外,采用ESR自旋捕集技术发现丹参素对外源性O_2^-·有清除作用。因而推测,丹参素可能作为一种O_2^-·的清除剂保护心肌线粒体免受氧自由基引发的脂质过氧化损害。

复方丹参滴丸对过氧化氢损伤的人脐静脉血管内皮细胞的保护作用

目的:观察复方丹参滴丸对过氧化氢(H2O2)损伤人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的保护作用,探讨其在心脑血管疾病治疗中的机制。方法:用0.1 mmol/L H2O2制造HUVEC损伤模型;按分组把不同浓度的丹参滴丸(0.5g/L0、.25 g/L、0.1 g/L)分别于损伤前、损伤后加入,分别测定细胞活力(MTT法)观察滴丸对H2O2损伤内皮细胞活性的影响;硫代巴比妥酸法测定细胞内脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量;硝酸酶还原法测定细胞培养液中一氧化氮含量;免疫细胞化学法观察滴丸对H2O2损伤的内皮细胞NOS2、NOS3(一氧化氮合酶2、3)、NF-κB(核因子кB)表达的影响;同时进行形态学观察。结果:0.1 mmol/L H2O2对HUVEC有损伤作用。H2O2损伤后,滴丸能显著增加细胞活性;显著抑制H2O2诱导HUVEC MDA的产生;双向调节NO产生;影响H2O2损伤后细胞NOS3、NF-κB的表达。结论:损伤前给滴丸浓度0.5 g/L、0.25 g/L、0.1 g/L对H2O2所致内皮细胞损伤有明显拮抗作用。损伤后给药滴丸浓度0.5g/L0、.25 g/L、0.1 g/L对H2O2所致人血管内皮细胞损伤有明显拮抗作用,其作用机制与抗氧化作用及调节NOS2、NOS3、NF-κB的表达有关。

大鼠心肌缺血再灌线粒体跨膜电位及ATPase合成活性的变化

用Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ无做功非循环式离休心脏灌注模型，琥珀酸为呼吸链底物，分别以Ｒｈ１２３荧光染料流动透析法和荧光素一荧光素酶系统发光法来检测缺血／再灌注对心肌线粒体和内膜体跨膜电位及ＡＴＰａｓｅ合成活力的影响，并观察了丹参素的保护作用。结果发现：缺血２０ｍｉｎ，心肌线粒体能化前跨膜电位升高，能化态跨膜电位不变，再灌注２０ｍｉｎ后，线粒体能化前跨膜电位不变，能化态跨膜电位降低。去除线粒体外膜的内膜体，缺血时能化前跨膜电位升高的现象消失，其它各多数变化趋势与线粒体相同，说明缺血／再灌早期线粒体跨膜电位的变化与其外膜有关。内膜体ＡＴＰａｓｅ合成活力缺血时无变化，再灌时降低，与内膜体能化态跨膜电位变化相同。缺血组能化前内膜体体积缩小；丹参素对线粒体跨膜电位、内膜体跨膜电位和ＡＴＰ合成反应活性有明显的保护与恢复作用。

血管紧张素Ⅱ对离体心肌线粒体呼吸功能和膜电位的影响

本实验用血管紧张素Ⅱ灌流离体大鼠心脏，观察其对离体心肌线粒体能量转换功能诸参数，如Ｓｔａｔｅ３、Ｓｔａｔｅ４耗氧量、ＲＣＲ、ＡＴＰａｓｅ合成活性和水解活性，跨膜电位的变化，探讨血管紧张素Ⅱ对心肌线粒体能量代谢的影响及其作用机制。结果表明，血管紧张素Ⅱ对心肌线粒体的作用具有明显的时相性。在第一相线粒体呼吸功能明显抑制。ＡＴＰａｓｅ合成活性降低，这势必造成ＡＴＰ的严重不足或耗竭。己糖激酶（ＨＫ）和ＡＴＰａｓｅ水解活性也相应降低，在第二相中线粒体呼吸功能，ＨＫ和ＡＴＰａｓｅ合成活性表现出恢复趋势。ＡＴＰａｓｅ水解活性和Ｓｔａｔｅ４在灌流６０ｍｉｎ内未见明显的第二相出现，它们的功能恢复可能较晚或血管紧张素Ⅱ对其具有不同的调解机制。

大鼠心肌缺血再灌注线粒体内膜体电子质子偶联和氧化磷酸化变化及丹参素的作用

非循环式Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ模型灌注大鼠心脏，测定线粒体内膜体的呼吸功能、质子电子传递速度及膜流动性变化，并观察了丹参素的保护作用。结果表明：缺血时态Ⅳ呼吸不变，态Ⅲ呼吸、ＡＤＰ／Ｏ、ＲＣＲ（呼吸控制率）均降低，Ｈ￣＋传递速度、ｅ￣－传递速度、Ｈ￣＋／ｅ￣－亦降低，但膜流动性不变。再灌注时除ＡＤＰ／ｏ进一步降低外，其余各参数均部分恢复，但未达到对照组水平，且膜流动性降低。用丹参素保护的缺血组和再灌组Ｈ￣＋／ｅ￣－显著高于对照组，其它各参数与对照组间无显著差异。结果提示：缺血早期线粒体内膜体呼吸链功能处于抑制状态，氧化磷酸化部分解偶联，但无膜脂结构损伤。再灌解除了这种抑制，呼吸链功能有部分恢复，但达不到对照水平。丹参素对线粒体呼吸链功能有明显保护作用。

大鼠心肌缺血再灌注时能量代谢及脂质过氧化变化及复方丹参滴丸的保护作用(英文)

目的 探讨大鼠心肌缺血 再灌注时能量代谢及脂质过氧化变化及复方丹参滴丸的保护作用。方法 采用Langendorff离体心脏灌流技术 ,制备心肌缺血再灌注损伤模型 ,分别在缺血前预灌时及缺血后再灌注时用复方丹参滴丸对心肌给予保护 ,观察心肌能量代谢及脂质过氧化 (LPO)变化。本实验共分 4组 ,正常对照组 ,单纯缺血再灌注组 ,复方丹参滴丸前保护组 ,复方丹参滴丸后保护组。结果 ①心肌缺血 4 0min再灌注 2 0min ,心肌组织内高能磷酸化合物明显减少 ,脂质过氧化物含量明显增多 ,与正常对照组比P <0 .0 1。②在缺血前预灌注时及缺血后再灌注时加入复方丹参滴丸 ,心肌组织中的高能磷酸化合物均高于单纯缺血再灌注组 (P <0 .0 1) ,两组ATP、TAN均接近正常水平 (P >0 .0 5 )。两组的LPO低于单纯缺血再灌注组 ,复方丹参滴丸前保护组的LPO与对照组比无明显差别 (P >0 .0 5 )。结论 心肌缺血 4 0min再灌注 2 0min ,心肌能量代谢障碍 ,脂质过氧化反应增强 ,大鼠心肌发生缺血再灌注损伤。复方丹参滴丸在缺血前预灌注时与缺血后再灌注时给予均可通过增加心肌能量储备 ,抑制脂质过氧化物的生成而保护心肌。

局部肾素血管紧张素系统在心肌细胞氧反常中的作用

利用成年大鼠分离的心肌细胞氧反常模型,用新一代钙荧光探针(Fluo-3)检测细胞内游离钙浓度。对比观察了血管紧张素Ⅱ及转换酶抑制剂(巯甲丙脯酸)对钙超载的影响。结果表明前者促成钙超载的形成,而后者可以防止钙超载。从而证明心肌细胞的肾素血管紧张素系统在氧反常时细胞钙超载中具有重要作用。

丹参对心肌缺血和再灌注损伤的保护作用

采用在家兔全麻、开胸、自主呼吸和自主心律的条件下,结扎冠脉左室支造成急性心肌缺血模型,进而松开结扎结形成再灌注损伤模型。对心肌缺血和再灌注损伤的组织脂质过氧化物含量和局部血流量变化进行测定,同时辅以心电图监护;以丹参注射液为保护剂观察其作用效果。结果表明,随着缺血时间的延续,心肌脂质过氧化物含量逐渐增加;当缺血60分钟后再灌注30分钟,脂质过氧化物含量仍继续上升,明显高于缺血60分钟组,但与缺血90分钟组比较则无显著差异;其缺血区局部组织血流量再灌注后仅恢复53.2%。给予丹参保护的再灌注组,其缺血区组织脂质过氧化物含量较再灌注损伤组下降56.0%(P<0.005),而局部组织血流量恢复则提高32.0%(P<0.001)。

阿霉素性心肌损伤大鼠心肌中高能磷酸化合物分析及硒的保护作用

采用大鼠阿霉素性心肌损伤动物模型，以亚硒酸钠作保护因素，用高效液相色谱测定大鼠心肌组织中高能磷酸化合物含量。结果表明：与正常对照组相比，阿霉素损伤组ＡＴＰ和ＮＡＤ水平明显下降，而Ｓｅ保护组ＡＴＰ、ＡＤＰ、ＡＭＰ和ＮＡＤ水平改变不明显。提示：阿霉素可导致心肌细胞氧化磷酸化障碍，ＡＴＰ合成能力下降，心肌线粒体功能受损。Ｓｅ对阿霉素性心肌损伤有明显的保护作用。认为ＡＴＰ和ＮＡＤ水平的降低，可能是阿霉素导致的心肌细胞损伤的一个重要环节。