纯化的抗乙酰胆碱酯酶单克隆抗体对乙酰胆碱酯酶活性的影响(英文)

本文研究了Balb/c小鼠杂交瘤细胞分泌的抗乙酰胆碱酯酶单克隆抗体对电鳐电器官乙酰胆碱酯酶催化反应的影响及其机理。小鼠腹水抗体经蛋白A琼脂糖亲和层析分离纯化,达到聚丙烯酰胺凝胶电泳纯。酶联免疫吸附试验检测了11株单克隆抗体,滴度在1:5000～1:300 000范围内。在以乙酰胆碱为底物的催化反应中,3F3、2G8及1H11三株杂交瘤分泌的单克隆抗体对乙酰胆碱酯酶活性有明显的抑制作用,抑制作用随单克隆抗体用量的加大而增强。但在以乙酰靛酚为底物的催化反应中,仅3F3显示抑制作用。因而推论,3F3作用在乙酰胆碱酯酶的活力中心,而2G8及1H11可能作用在活力中心的邻近部位.乙酰胆碱酯酶的活力中心不仅是酶的催化部位,而且也是酶分子上的一个抗原决定簇.乙酰胆碱酯酶活力中心具有催化及诱导抗体产生的双重功能.

抗乙酰胆碱酯酶单克隆抗体的产生

将SP 2/O-Ag 14/小鼠骨髓瘤细胞和用乙酰胆碱脂酶免疫的Balb/c小鼠脾细胞在PEG-1000作用下进行融合,获14株分泌抗乙酰胆碱酯酶单克隆抗体的杂交瘤细胞系。用酶联免疫吸附试验(ELISA)对其分泌的抗体滴度进行了检测,其免疫鼠腹水滴度最高可达1:2 560 000。对其中5株杂交瘤分泌的滴度很高的抗体做了特异性交叉免疫试验,仅与乙酰胆碱脂酶发生特异反应,与其它4种酶(胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、链霉蛋白酶及胰蛋白酶)无交叉反应;对其中12株杂交瘤分泌的抗体还进行了免疫球蛋白类型鉴定及染色体检查。上述杂交瘤细胞经3～6个月稳定传代后冻存于液氮中1年多后复苏,其抗体水平未见下降。

三联组氨酸核苷酸结合蛋白1与人类疾病

三联组氨酸核苷酸结合蛋白1(HINT1)是三联组氨酸蛋白超家族成员之一,三联组氨酸因为具有保守的核苷酸结合基序组氨酸-x-组氨酸-x-组氨酸-xx(x代表1个疏水氨基酸)而得名,HINT1广泛参与肿瘤、神经精神疾病等人类疾病的病理生理过程。本文主要综述HINT1的结构、分布、酶活性基本功能,以及与人类疾病的关联。

三联组氨酸核苷结合蛋白1及其在神经精神疾病中的功能

三联组氨酸核苷结合蛋白1(HINT1)是三联组氨酸(HIT)酶家族成员,作为核苷水解酶或转移酶起作用,其生物学功能尚不清楚。HINT1蛋白可在多种组织中表达,在转录和信号转导中发挥重要作用。早期研究已经明确HINT1是单倍剂量不足的肿瘤抑制因子;也有研究表明HINT1广泛参与一系列生理过程,且部分功能与其基本的酶活性无关;新近研究表明这一蛋白与诸多外周、中枢神经系统疾病存在密切关系,在遗传性周围神经病、精神分裂症、心境障碍、药物成瘾、唐氏综合征等神经精神疾病中起作用。本文针对HINT1蛋白在以上不同神经精神疾病中的作用做了详细综述,分析归纳了HINT1在上述每一种疾病中的研究发现,以期对今后该蛋白的深入研究起到一定的指导作用。

微量乙酰靛酚比色法测量胆碱酯酶活性

微量乙酰靛酚比色法是采用脂溶性底物乙酰靛酚测量胆碱酯酶活性的方法,适用于膜结合胆碱酶、抗原抗体复合物中的胆碱酯酶等必需用脂溶性底物测定胆碱酯酶活性的实验.