含肿瘤坏死因子聚碳酸酯磁性微球的制备及靶向治疗原发性肝癌的实验研究

目的 制备出一种新型的含TNF并具有强烈磁性反应的聚碳酸酯磁性微球 ,并进一步研究其体内对肝细胞癌的靶向治疗作用。方法 采用化学沉淀法制备Fe3 O4 超微磁粉 ,以聚 5 ,5 二甲基 三亚甲基碳酸酯 共 三亚甲基碳酸酯为膜材 ,在低温反应体系下 ,以人血清白蛋白为保护剂 ,采用改进的W /O/W复合溶剂挥发法制备含肿瘤坏死因子的聚碳酸酯磁性微球。研究了此微球制剂体外对肝癌细胞的细胞毒作用 ,并在外加磁场的作用下对人裸鼠肝癌模型进行了靶向治疗实验。结论 该磁性微球具有良好的磁响应性能 ,体外 40 0 0GS磁场下动作距离为 2 6cm/min ,体外对肝癌细胞Bel 740 2有较强的细胞毒作用 ,裸鼠人肝癌模型靶向治疗实验显示 ,在肿瘤部位 5 0 0 0GS条件下 ,静脉用药 3次即有明显抑制肿瘤生长作用 ,其 4周瘤重抑制率为 5 5 .46 % ,明显高于游离药物组 (2 6 .88% ,P <0 .0 0 1)和无磁药物微球组 (2 7.85 % ,P <0 .0 0 1)。结果 本实验为肝癌的生物靶向治疗提供了一种可能的新剂型 。

人端粒酶RNA的cDNA探针制备及其对胃粘膜细胞端粒酶RNA表达的检测

目的 建立人端粒酶RNA表达的检测方法。方法 制备人端粒酶RNA ,(humantelomeraseRNA ,hTR)的cDNA探针 ,分别应用RNA斑点杂交与端粒重复序列扩增法 (TRAP)分析检测不同胃粘膜的端粒酶RNA的表达与端粒酶活性。结果 人端粒酶RNA的cDNA探针制备成功。 18例活检胃癌组织及 4 5例手术胃癌组织RNA斑点杂交检测的阳性率均为 10 0 % ,相应TRAP分析的阳性率分别为 88 89%、 86 6 7% ,低于RNA斑点杂交 (P <0 0 5 )。同时RNA斑点杂交结果提示在非癌胃组织中随着肠化程度增高人端粒酶RNA表达也增强。结论 RNA斑点杂交检测人端粒酶RNA ,具有高度的敏感性和特异性 。

环氧合酶-2在大鼠酒精性肝炎中的表达及作用机制

目的 观察环氧合酶 2 (cyclooxygenase_2 ,COX_2 )在大鼠酒精性肝炎中的表达 ,探讨COX_2与酒精性肝炎的关系。方法 随机将 2 8只雄性SD大鼠分为正常组 7只 ,乙醇组 7只 ,以 10～ 12g·kg-1·d-1乙醇灌胃复制大鼠酒精性肝炎动物模型 ,实验组 2组 (每组 7只 ) ,以相同的方式复制动物模型后分别给予 0 4%和 0 8%的特异性COX 2抑制剂塞莱西布 (celecoxib)灌胃。测定肝组织中丙二醛 (malonaldehyde ,MDA)及血清ALT和AST水平 ,在光镜下观察肝脏的形态学改变 ,并应用RT_PCR技术检测COX 2mRNA在酒精性肝炎中的表达 ,其结果用凝胶分析系统测定相对表达量。结果 乙醇组大鼠肝组织中MDA含量较实验组大鼠和正常组大鼠明显增高 (P <0 .0 5 ) ;正常组和实验组大鼠血清ALT、AST浓度均明显低于乙醇组 (P <0 .0 5 )。HE染色光镜下见乙醇组大鼠肝细胞脂肪变性 ,炎性细胞浸润及细胞坏死。在正常组大鼠肝组织中COX 2mRNA无表达 ,乙醇组表达阳性 ,且显著高于两实验组COX_2mRNA的表达 (P <0 .0 5 )。结论 高表达的COX 2参与到酒精性肝炎的发生发展过程 ,应用特异性 (COX 2 )

Survivin,Caspase-3蛋白在原发性肝癌中的表达及意义

目的:研究原发性肝癌组织及癌旁组织中survivin、caspase3的表达及其与细胞凋亡的关系。方法:收集原发性肝癌组织及相应癌旁组织标本40例,免疫组织化学方法检测其survivin、caspase3蛋白表达,原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测凋亡指数。结果:85%(34/40)的肝癌组织表达survivin蛋白,而癌旁非肝癌组织内无1例呈阳性表达。survivin蛋白表达的阳性率在肝内转移者为93.5%,显著高于无肝内转移者(55.6%,P<0.05);在门静脉癌栓浸润者为92.8%,显著高于无门静脉癌栓浸润者(66.7%,P<0.05)。37.5%(15/40)的肝癌组织内可见到caspase3阳性表达,77.5%(31/40)癌旁组织可见不同程度caspase3阳性表达,两者比较差异有显著性意义(P<0.05)。所有肝癌组织标本中均可检测到凋亡细胞,但survivin表达阳性者的凋亡指数(1.152%±0.326%)显著低于survivin表达阴性者(4.502%±0.830%,P<0.05);而caspase3表达阴性者的凋亡指数(5.016%±0.370%)显著高于caspase3表达阴性者(1.927%±0.237%,P<0.05)。34例survivin表达阳性组织中有10例见caspase3表达阳性(29.4%),而6例survivin表达阴性组织中有5例见caspase3阳性表达(83.3%),两者比较差异有显著性意义(P<0.05)。结论:survivin在肝癌组织中选择性表达,与肿瘤转移、血管浸润等恶性生物学行为有关,survivin对凋亡的抑制可能是其参与肝癌发生的重要机制,其作用机制可能涉及到caspase3蛋白的抑制。

肝硬化患者的胃液体排空障碍

目的 :了解肝硬化与胃液体排空障碍的关系。方法 :采用实时超声胃窦面积法测定了 2 6例肝硬化患者和 14例健康人的胃液体排空 ,同时用放射免疫法检测了空腹血胃动素和胃泌素水平。结果 :肝硬化组胃液体半排空时间(GET1/ 2 )为 (34.5 3± 8.2 3) m in,较正常对照组 (2 8.0 6± 4.11) min明显延迟 (P<0 .0 1) ,表明肝硬化患者存在明显的胃液体排空障碍。肝硬化患者 GET1/ 2与上消化道症状积分呈正相关 (r=0 .42 6 ,P<0 .0 5 ) ,表明肝硬化患者的胃动力障碍是引起上消化道症状的重要原因 ;肝硬化患者 GET1/ 2与肝功能受损程度呈正相关 (r=0 .491,P<0 .0 5 ) ;肝硬化组血浆胃动素浓度为 (4 18.5 4± 5 4.6 3) ng/ L,血清胃泌素浓度为 (87.73± 2 4.37) ng/ L,均较正常对照组增高 (P均 <0 .0 1)。结论 :肝硬化患者胃液体排空障碍可能与肝功能受损、胃肠激素代谢异常有关。

美国急性胰腺炎临床指南

【简介】本指南由美国胃肠病学院及其实践委员会制定。所有英文文献通过MEDLINE和Cochrane图书馆检索并综述。指南所涉及的证据分级见表1。本指南仅适用于成年患者。主要诊断指南包括入院时评估重症危险因子和确认病情严重程度。主要治疗指南包括支持治疗、补液。

钙通道和Na^+/H^+交换在表皮生长因子促肝癌细胞生长中的作用

目的 许多生长因子如表皮生长因子 (EGF) ,与肿瘤的发生密切相关。EGF与表皮生长因子受体 (EGFR)结合 ,通过一系列的信息传导 ,导致肝癌细胞的增生。但受体后的信息传导机制尚不清楚。本实验探讨酪氨酸激酶、蛋白激酶C、Na+/H+交换、钙调蛋白和电压依赖性钙通道在EGF促肝癌细胞生长中的作用。方法 本研究于无血清RPMI164 0中培养肝癌细胞SMMC772 1,采用3 H Thymidine(3 H TdR)掺入的方法 ,检测肝癌细胞DNA合成速率 ,研究酪氨酸激酶、蛋白激酶C、Na+/H+交换、钙调蛋白和电压依赖性钙通道在EGF促肝癌细脆生长中的作用。结果 EGF 10 -9M对肝癌细脆的生长有极显著促进作用 ,与对照组比较差异有显著意义 (P <0 0 5 ) ,酪氮酸激酶阻滞剂Genistein对EGF的促肝癌细胞生长作用具有极显著抑制作用 (P <0 0 0 1)。钙调蛋白阻滞剂W 7、蛋白激酶C阻滞剂H 7和Na+/H+交换阻滞剂amiloride对EGF的促肝癌细胞生长作用具有显著抑制作用 (P <0 0 0 1,P <0 0 1,P <0 0 5 ) ,而对基础状态细胞的3 H TdR掺入值无显著影响 (P >0 0 5 )。电压依赖性钙通道阻滞剂Varapamil对BGF的促肝癌细胞生长作用无显著抑制作用 (P >0 0 5 ) ,对基础状态细胞的3 H TdR掺入值亦无显著影响 (P >0 0 5 )。结论 结果显示 ,酪氨酸激酶、?

全反式维甲酸及香龙散含药血清对胃癌细胞端粒酶活性的影响

目的 分析全反式维甲酸及中药香龙散含药血清对胃癌细胞端粒酶活性的影响 ,并探讨端粒酶活性和细胞凋亡的关系。方法 用纯种新西兰家兔制备中药香龙散含药血清 ,应用TRAP分析全反式维甲酸及中药香龙散含药血清对培养的胃癌细胞端粒酶活性的影响 ,应用DNALadder分析及流式细胞仪观察全反式维甲酸及中药香龙散含药血清对培养的胃癌细胞凋亡的影响。结果 首先全反式维甲酸和中药香龙散含药血清对培养的胃癌细胞生长的抑制有协同作用。其次 ,全反式维甲酸处理胃癌细胞 2 4小时 ,即可见端粒酶活性下调 ,中药香龙散含药血清无此作用 ,也不能加强全反式维甲酸对端粒酶活性下调的作用。最后 ,在全反式维甲酸处理的胃癌细胞中 ,第 3天出现了细胞凋亡 ,并且中药香龙散含药血清对全反式维甲酸诱导的细胞凋亡有加强作用。结论 全反式维甲酸或 /和中药香龙散含药血清对培养的胃癌细胞生长有抑制作用 ,其中全反式维甲酸可能通过抑制端粒酶活性表达而诱导了胃癌细胞凋亡 ,中药香龙散含药血清有加强全反式维甲酸诱导细胞凋亡的作用 。

survivin反义寡核苷酸转染肝癌细胞可诱导caspase-3活化

目的:观察survivin反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,AS ODN)诱导肝癌细胞凋亡的可能途径。方法:培养survivin表达阳性的肝癌细胞株SMMC-7721。设计合成特异性靶向survivin的反义寡核苷酸。将SMMC-7721细胞接种于6孔培养板内,分为6组:①空白对照组;②脂质体转染对照组;③正义链转染对照组;④200nmol/L AS ODN转染组;⑤400nmol/L AS ODN转染组;⑥600nmol/L AS ODN转染组。作用20小时后收获各组细胞,并进行后续实验:①倒置显微镜下观察细胞形态变化;②western blot法检测各组细胞survivin蛋白的表达情况;③流式细胞术检测细胞增殖和凋亡指数;④比色法检测各组细胞caspase-3的活性变化。结果:①AS ODN转染组细胞survivin表达减弱,以600nmol/L转染组最为明显,各对照组survivin蛋白表达无明显改变;②AS ODN转染组细胞形态出现变圆、折光增强、漂浮、细胞碎片形成等变化,而各对照组细胞生长良好;③各AS ODN转染组细胞凋亡指数明显高于各对照组(P<0.05),以600nmol/L转染组最为明显,而各对照组间差异无显著性意义(P>0.05);④各AS ODN转染组细胞增殖指数明显低于各对照组(P<0.05),以600nmol/L转染组最为明显,而各对照组间差异无显著性意义;⑤在各AS ODN转染组中,可见到不同程度的caspase-3的活化,而对照组细胞内无明显的变化。结论:survivin AS ODN转染能下调survivin蛋白表达,诱导肝癌细胞凋亡,抑制细胞增殖,其作用途径可能涉及抑制survivin表达,诱导caspase-3活化,启动凋亡信号传导。

固相CD_3MCAb+IL_2诱导T杀伤细胞的实验研究

用人外周血单个核细胞(PBMC)与固相CD_3单克隆抗体(CD_3 McAb)和不同浓度的IL_2短期体外共同制备T杀伤细胞(T—activated killer,T-AK)。另以 PBMC与IL_2制备LAK细胞。经直接计数法MTT法及间接免疫荧光法检测比较此二种细胞的增殖、细胞毒活性及Tac受体的表达水平。结果表明,T-AK细胞优于LAK细胞在于增殖能力的增加而非细胞毒作用的增强,增殖的机理与IL_2/IL-2R途径有关,并提示T-AK较IL_2/LAK疗法更具有临床应用价值。

血管内皮生长因子受体信号转导通路与肿瘤血管生成

血管内皮生长因子是促进血管生成的重要调节因子 .它能促进内皮细胞增殖、迁移 ,阻止内皮细胞凋亡、管腔网状结构退化 ,增加血管渗透性 .所有这些作用都是通过血管内皮生长因子受体信号转导通路实现的 .它们在肿瘤血管生成、肿瘤生长中起着重要的作用 .

乙胺嗪对大鼠急性肝损伤的保护作用

实验观察乙胺嗪对大鼠急性肝损伤模型的影响,结果表明:乙胺嗪组血清天门冬氨酸氨基转移酶 AST(936.8±428.3 nmol·s^(-1)/L)明显低于模型组(2 104.9±546.8 nmol·s/L,P<0.05),乙胺嗪组血清丙氨酸氨基转移酶 ALT(4 349.2±1 178.6 nmol·s^(-1)/L)显著低于模型组(9 768.6±2 760.6 nmol·s^(-1)/L,P<0.01),反映肝脂质过氧化物水平的丙二醛MDA(1.89±0.62nmol/mg 蛋白)显著低于模型组(3.87±1.70 umol/mg 蛋白,P<0.05),同时肝病理损伤也有明显减轻。认为乙胺嗪通过抑制白三烯合成、减少白细胞数量和抑制多核白细胞炎性浸润,降低氧自由基水平而有护肝作用。

血小板活化因子与胃肠粘膜损害

血小板活化因子是迄今为止所发现的内源性促溃疡形成介质中最强的一种。本文介绍其生物特性与代谢,与胃肠粘膜损害的关系及其引起粘膜损害的机理。血小板活化因子拮抗剂可望成为临床上一种新的抗粘膜损害药。

一氧化氮合酶抑制剂对酒精性脂肪肝大鼠肝组织氧化抗氧化系统的影响

研究不同一氧化氮合酶(NOS)抑制剂对大鼠肝组织酒精性脂肪变及氧化抗氧化系统的影响,探讨不同来源一氧化氮(NO)在肝酒精性脂肪变中的作用.

生存素反义寡核苷酸诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的 生存素 (survivin)是近年来发现的凋亡抑制蛋白家族新成员 ,在多数恶性肿瘤组织中丰富表达。因此 ,观察生存素反义寡核苷酸转染对肝癌细胞凋亡、增殖、细胞对化疗药物敏感性的影响。方法 设计合成特异性靶向生存素的反义寡核苷酸 (ASODN)。肝癌细胞株hepG2 分为 6组 :空白对照组、脂质体转染对照组、正义链转染对照组、2 0 0、40 0和 6 0 0nmol/LASODN转染组。作用 2 0h后收获各组细胞。倒置显微镜观察细胞形态变化 ,Westernblot法检测各组细胞生存素表达情况 ,流式细胞术检测各组细胞增殖和凋亡指数 ,MTT法检测 5 氟尿嘧啶 (5 FU)和顺铂 (DDP)对各组细胞的生长抑制率。结果 各ASODN转染组细胞生存素表达有不同程度减弱 ,细胞变圆、折光增强、漂浮、细胞碎片形成等 ,而各对照组细胞生长良好 ;各ASODN转染组细胞凋亡指数明显高于各对照组 (P <0 .0 5 ) ,以 6 0 0nmol/L转染组最为明显 (P <0 .0 5 ) ,而各对照组间差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;各ASODN转染组细胞增殖指数明显低于各对照组 (P <0 .0 5 ) ,以 6 0 0nmol/L转染组最为明显 (P <0 .0 5 ) ,而各对照组间差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;等浓度化疗药物 5 FU和DDP对各ASODN转染组细胞的抑制率明显高于各对照组(P <0 .0 5 ) ,以 6 0