人呼吸道合胞病毒纳米抗体的构建及活性

目的 通过免疫羊驼和噬菌体建库筛选出人呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)纳米抗体(nanobodies,Nbs),并评价其结合活性和中和活性。方法 使用RSV重组F蛋白免疫2只羊驼,构建噬菌体文库,筛选得到纳米抗体的骨架区(framework region,FR)和抗原互补决定区(complementarity determining region,CDR)序列,将序列重组构建出3株RSV纳米抗体,使用Ni-NTA亲和层析纯化后,ELISA法检测纳米抗体的结合活性,RSV A2株评价纳米抗体的中和活性。结果 3株纳米抗体BF-42、BF-46、Fh-24相对分子质量约为17 000,纯化后抗体纯度约为95%;BF-42、BF-46浓度为0.16μg/mL,Fh-24浓度为32 ng/mL时仍有结合活性,三者结合能力存在剂量依赖性;3株纳米抗体浓度为450μg/mL时,均可保护50%Hep2细胞免受病毒感染,出现50%致细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),能够有效中和病毒。结论 构建的3株纳米抗体具有较高的结合活性和一定的中和能力,为RSV纳米抗体的应用奠定了基础。

干扰素受体1沉默的人二倍体MRC-5细胞系对水痘-带状疱疹病毒复制的影响

目的通过优化人二倍体细胞系MRC-5降低其干扰素(interferon,IFN)相关基因表达水平,以提高水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)在该细胞系中的复制水平,并提高VZV疫苗产量。方法通过CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建IFN受体1(interferon receptor 1,IFNAR1)沉默的MRC-5细胞系(MRC-5^(IFNAR1-))。采用qRT-PCR法检测MRC-5^(IFNAR1-)细胞系IFNAR1 mRNA相对表达量,同时检测VZV感染后IFN相关基因IFNβ和OAS1 mRNA相对表达量,评价基因沉默效果。通过沉默位点的基因测序进一步鉴定基因突变序列。采用qRT-PCR法和空斑形成单位(plaque formation unit,PFU)试验,对比VZV感染后168 h病毒在MRC-5和MRC-5^(IFNAR1-)细胞系中的复制情况,评价MRC-5^(IFNAR1-)细胞系对VZV复制的影响。结果MRC-5^(IFNAR1-)细胞系生长状态与MRC-5细胞一致,IFNAR1 mRNA相对表达量降低73%;VZV感染后MRC-5^(IFNAR1-)细胞系中IFN相关基因IFNβ和OAS1 mRNA相对表达量比MRC-5细胞分别降低了61%和90%;VZV感染后168 h,病毒DNA复制水平增加5.7倍,病毒滴度增加4倍。结论成功建立了MRC-5^(IFNAR1-)细胞系,可作为增加基于人二倍体细胞疫苗产量的潜在方案,为扩大VZV疫苗生产提供了参考。