克百威预处理对毒死蜱神经细胞毒性的影响

研究了氨基甲酸酯农药克百威预处理对有机磷农药毒死蜱神经细胞毒性的影响.采用噻唑蓝（MTT）法测定克百威对原代培养皮层神经细胞存活率的影响,找出无细胞毒性浓度;采用无细胞毒性浓度的克百威对培养细胞进行不同时间的预处理后,加入毒死蜱（克百威仍存在）染毒48 h测定细胞毒性的变化;采用Western blot方法测定克百威不同时间预处理对毒死蜱激活ERK1/2作用的影响.结果表明：10μmol/L的克百威处理72 h显示无细胞毒性,10μmol/L的克百威预处理（2-24 h）可减轻毒死蜱的毒性,其中预处理8 h时作用最强;克百威预处理降低了毒死蜱对ERK1/2的激活作用,抑制ERK1/2激活作用与细胞毒性减轻相关.克百威预处理时间过短（0-2 h）,对毒死蜱的细胞毒性及ERK1/2激活影响很小.克百威预处理一段时间后可拮抗毒死蜱的细胞毒性,该作用机制与抑制ERK1/2激活有关;但克百威预处理时间过短,则不产生拮抗作用.提示氨基甲酸酯农药与有机磷农药之间的联合作用模式受二者染毒时间间隔的影响.

有机磷及氨基甲酸酯类农药单独和联合作用对PC_(12)细胞DNA损伤的影响

研究有机磷类农药毒死蜱和对硫磷、氨基甲酸酯类农药克百威和残杀威单独及联合染毒大鼠嗜铬细胞瘤株(PC12细胞)所致的DNA损伤情况及联合作用模式。分别以0μmol·L^(-1)、50μmol·L^(-1)、100μmol·L^(-1)、200μmol·L^(-1)、400μmol·L^(-1)的有机磷农药毒死蜱、对硫磷与0μmol·L^(-1)、25μmol·L^(-1)、50μmol·L^(-1)、100μmol·L^(-1)、200μmol·L^(-1)的氨基甲酸酯类农药克百威、残杀威单独及两两联合染毒PC12细胞12 h后进行彗星实验,采用彗尾长度、尾部DNA百分含量、尾矩3个指标来衡量DNA损伤程度。结果表明:毒死蜱、克百威、对硫磷、残杀威染毒PC12细胞12 h后,细胞出现拖尾,呈现典型的彗星图像。染毒后PC12细胞彗尾长度、尾部DNA百分含量、尾矩较对照组显著增加,差异有统计学意义(P<0.01)。析因分析表明,无论低剂量联合还是高剂量联合,毒死蜱与克百威、对硫磷与残杀威均有交互作用(P<0.01),作用模式为协同作用。以上结果提示,有机磷及氨基甲酸酯类农药单独及联合作用均可引起PC12细胞DNA损伤,联合作用后损伤程度要高于单独作用,且低剂量和高剂量联合时均存在交互作用,作用模式为协同作用。

大鼠氯霉素4周经口连续染毒毒性的研究

[目的]研究氯霉素大鼠4周(28 d)经口染毒毒性,为其安全性评价提供毒理学相关参数。[方法]80只健康Wistar大鼠雌雄各半,随机分为1个对照组(5 g/L羧甲基纤维素钠溶液)和3个染毒组(高、中、低剂量组,氯霉素染毒剂量分别为60.0、30.0、7.5 mg/kg),每组20只,经口染毒,连续28 d。观察氯霉素对大鼠体重、血液指标及脏器系数的影响,并进行骨髓涂片及组织病理学检查。[结果]与对照组相比,高剂量组雄性大鼠第2周起体重增长受到抑制(P<0.05),雌、雄大鼠平均红细胞容积、总蛋白、白蛋白降低(P<0.05),雄性大鼠脑脏器系数与雌、雄大鼠肾脏脏器系数升高(P<0.05);中剂量组雌、雄大鼠平均红细胞容积、总蛋白、白蛋白降低(P<0.05),雄性大鼠肾脏脏器系数升高(P<0.05);低剂量组大鼠各指标均未见明显改变。本试验条件下,大鼠氯霉素连续28 d经口染毒未观察到损害作用剂量为7.5 mg/kg,基准剂量为1.284 mg/kg,基准剂量下限为0.804 mg/kg,人类每日容许摄入量为8.04μg/kg。[结论]氯霉素对雄性大鼠的毒性大于雌性大鼠。本研究为氯霉素每日摄入量安全限值的制定及风险评估提供了重要的数据参考。

第1批尿促卵泡素国家标准品的标定

目的:制备第1批人尿促卵泡素(urofollitropin)国家标准品。方法:以WHO第1批人尿促卵泡素国际标准品92/512作为标准,选择4个实验室,采用《中华人民共和国药典》2015版四部1216卵泡刺激素生物测定法对人尿促卵泡素待标品进行生物效价标定;采用HPLC法对待标品的纯度进行测定。结果:人尿促卵泡素待标品经协作标定,确定其生物效价为每安瓿213 IU,其含量为100%。结论:本批待标品可作为第1批人尿促卵泡素国家标准品,以供尿促卵泡素及相关制剂的生物效价测定用。

乌拉坦致C57BL/6J小鼠肺腺瘤动物模型方法研究

目的采用3种不同的造模方法,比较并优化乌拉坦致C57BL/6J小鼠肺腺瘤动物模型建立的方法。方法取雌性C57BL/6J小鼠,分成4组,阴性对照组和模型Ⅰ组,模型Ⅱ组,模型Ⅲ组。模型Ⅰ组腹腔注射800 mg·kg-1乌拉坦,2次·周-1,连续5周;模型Ⅱ组腹腔注射1 000 mg·kg-1乌拉坦,2次·周-1,连续5周;模型Ⅲ组腹腔注射1 000 mg·kg-1乌拉坦,5 d·次-1,连续8次。阴性对照组给予等体积氯化钠注射液,给药方式与模型Ⅱ组相同。每周称量动物体重。所有组分别于第28周取主要脏器心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺,计算脏器指数,同时另取肺组织观察,计腺瘤数,量取肺腺瘤直径,并对肺、胸腺进行组织病理学检查。收集阴性对照组和模型组小鼠支气管肺泡灌洗液,对细胞进行分类计数分析。结果与阴性对照组相比,3种造模方法均100%诱导出肺腺瘤,模型Ⅰ组和模型Ⅲ组肿瘤数目均为6左右,模型Ⅱ组肿瘤数目大约为2。3组造模小鼠肺指数均增大,脑、脾、胸腺指数均减小,支气管肺泡灌洗液分析表明模型组淋巴细胞和多型核白细胞多于阴性对照组。结论 3种造模方法均100%诱导出肺腺瘤,综合检测各指标,模型Ⅰ组和Ⅲ组相对于模型Ⅱ组诱导肺肿瘤的数目相对较多,模型较稳定均一。

第5批人绝经尿促性腺素国家标准品的制备与标定

目的:制备和标定第5批人绝经尿促性腺素(HMG)国家标准品。方法:以WHO第5批国际标准品10/286作为标准,选择6个实验室,采用《中华人民共和国药典》2015年版四部1216卵泡刺激素(FSH)测定法和1217黄体生成素(LH)测定法对第5批HMG国家标准品待标品的生物效价进行标定;按照2015年版药典四部通则1431生物统计法中的量反应平行线测定法,采用BS 2000软件计算生物效价,并进行合并计算。结果:第5批HMG国家标准品待标品经协作标定,确定其生物效价FSH为220 IU·安瓿^(-1),LH为203 IU·安瓿^(-1)。结论:本批待标品可作为第5批HMG国家标准品供HMG及相关制剂的生物效价测定用。

重组人促红素在2种品系小鼠体内的生物学活性的比较

目的:对中国药典2010年版三部附录ⅩB重组人促红素(rHuEPO)体内生物学活性测定方法中规定的动物品系进行探讨研究。方法:选用ICR小鼠、BALB/C小鼠作为实验动物,测定19批进口重组人促红素的体内生物学活性,从动物品系、性别的角度进行比较。结果:19批重组人促红素在雌性或雄性ICR小鼠、BALB/C小鼠体内生物学活性之间的差异无统计学意义;每组ICR小鼠的性别为雌雄各半时,体内生物学活性合标示量符合药典规定,但可信限率(FL)超过45%,结果不可靠。结论:ICR小鼠与BALB/C小鼠均可用于重组人促红素体内生物学活性测定,采用单一性别的动物进行试验结果更为可靠。

第10批绒促性素国家标准品的标定

目的:研制第10批绒促性素(HCG)国家标准品。方法:依据《中华人民共和国药典》2015年版四部1209"绒促性素生物测定法",以第5批国际标准品07/364作为参考,联合6个实验室对HCG国家待标品的生物效价进行协作标定。结果:本批HCG待标品经协作标定和合并计算,生物效价为55 IU·安瓿^(-1)。结论:本品可作为第10批HCG国家标准品,供HCG原料药及制剂的效价测定使用。

毒死蜱和克百威体外联合染毒的细胞毒性机制

目的研究毒死蜱(chlorpyrifos,CPF)与克百威(carbofuran,CF)单独及联合染毒对体外培养细胞株的毒性,并阐明联合作用模式。方法应用不同浓度的CPF(0、50、100、200和400μmol/L)和CF(0、25、50、100和200μmol/L)分别单独染毒大鼠嗜铬细胞瘤株PC12细胞12 h,联合效应研究分别在低剂量(CPF 50μmol/L,CF 25μmol/L)和高剂量(CPF 200μmol/L,CF 100μmol/L)水平下混合染毒。染毒结束后,采用丁酰硫代胆碱法检测乙酰胆碱酯酶(ACh E)活性,二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针法测定细胞内活性氧(ROS)的生成,硫代巴比妥酸(TBA)法测定细胞中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测定细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性,5,5'-二硫代双硝基苯甲酸(DTNB)显色法测定细胞中谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性。结果毒死蜱、克百威单独染毒时,对ACh E活性的抑制作用、PC12细胞内ROS的生成量、SOD及GPx的活性均显著高于对照组(P<0.01),MDA含量无明显变化。2×2析因设计分析联合效应结果表明,较低剂量水平下,CPF与CF之间无交互作用,较高剂量水平,CPF、CF之间存在交互作用(P<0.01),作用模式主要为协同作用。结论毒死蜱、克百威单独及联合染毒都具有细胞毒性,联合作用模式主要为协同作用,氧化应激可能是其产生细胞毒性的机制之一。