从Hep-2细胞克隆hFGF-2 cDNA及序列分析

目的 从Hep 2细胞(人喉鳞癌细胞)克隆人的FGF 2cDNA,用于下一步构建携带hFGF 2cDNA的非复制型腺病毒载体。方法 设计和合成引物,提取Hep 2细胞的总mR NA,通过RT PCR扩增出目的cDNA,然后将其重组到pGEM TEasy载体中送测序分析。结果 经基因测序分析表明,从Hep 2细胞克隆的hFGF 2基因序列与已报告的序列,除在ATG后的第24位碱基发生无意突变外(由G→A),其他序列则完全一致。结论 从Hep 2细胞的总mRNA中成功克隆出hFGF 2的基因片段。

小阴唇皮瓣法治疗阴道闭锁

目的:探讨小阴唇皮瓣法在先天性阴道闭锁的临床应用。方法:选择适宜的13例先天性阴道闭锁患者,根据阴道缺损的量设计应用部分或完全小阴唇皮瓣进行部分或全阴道再造。结果:所有手术获得成功,再造阴道均通畅,湿润,光滑有弹性,有功能性子宫的病人月经正常,性生活满意,并有3例获正常妊娠分娩。结论:选择小阴唇发育良好的病例应用小阴唇皮瓣法再造阴道,其方法简便,损伤小,无外显瘢痕,费用少,值得在临床选择推广应用。

从Hep-2细胞克隆hVEGF165/VEGF121基因及序列分析

目的 从Hep 2 (喉鳞癌细胞 )克隆hVEGF16 5、hVEGF12 1cDNA并重组到克隆载体中 ,用于下一步构建表达VEGF 16 5、VEGF 12 1的腺病毒载体。方法 设计和合成引物 ,提取Hep 2细胞的总mRNA ,进行逆转录 -聚合酶链反应 (RT PCR) ,扩增出两个目的cDNA ,并将其重组到pGEM TEasy载体中送测序。 结果 从Hep 2细胞的总mRNA中反转录扩增得到 5 88bp和 4 5 6bp的片段 ,经重组送测序证实两基因分别与GenBank中的 [GI:1990 90 6 4 ]及[GI :6 6 310 2 8]提供序列完全一致。结论 从Hep 2细胞我们成功获得VEGF16 5、VEGF12 1的cDNA并构建其克隆载体可供进一步研究。

微粒皮腔内种植治疗阴茎段尿道狭窄

目的探讨微粒皮腔内种植治疗阴茎段尿道狭窄的临床应用效果。方法对阴茎段尿道狭窄在局麻下钝性扩张适度后，切取自体薄中厚皮片，制成微粒皮，策略性种植于腔内创面，修复尿道。结果全部6个病例均一次性获得良好的治疗效果。无再狭窄、尿瘘等并发症。随访24～36个月，排尿通畅。结论应用微粒皮腔内种植治疗阴茎段尿道狭窄，具有操作简便、创伤小、痛苦少、费用低、效果肯定、设备要求低、门诊即可操作等优点，且无需膀胱造瘘和多次尿道扩张等，也避免了开放性手术中的一些棘手问题以及术后发生率较高的并发症如感染、再狭窄、尿瘘等，故值得推广。

改良延迟小腿内侧逆行筋膜皮瓣交腿移植修复复杂创面

目的评估改良小腿内侧逆行筋膜皮瓣交叉移至在治疗复杂创面中的应用。方法 12例患者应用改良小腿内侧逆行筋膜皮瓣进行创面修复,其中7例为胫骨外露,3例为感染创面,2例为压力性溃疡。结果 17例皮瓣全部成活,伤口一期愈合。术后随访1～3年,皮瓣外形与功能均满意。结论复杂创面应用小腿内侧逆行筋膜皮瓣交叉移植是一种值得推荐的方法,具有操作简便、效果良好的优点。

改良延迟小腿内侧逆行筋膜皮瓣交腿移植修复下肢复杂创面

目的:探讨小腿内侧逆行筋膜皮瓣经改良延迟处理后交腿移植修复下肢复杂创面的临床应用效果,并总结改良方法。方法:针对不同的创面修复要求分别对拟转移的健侧小腿内侧逆行筋膜皮瓣进行针对性改良延迟处理,交腿移植修复骨、肌腱、关节、钢板外露创面12个病例17个创面。结果:全部病例移植的皮瓣均一期完全成活,随访4个月～2年,骨折愈合,外固定架、钢板均去除,外形和功能恢复良好。结论:小腿内侧逆行筋膜皮瓣在进行改良性延迟处理后,交腿移植修复创面可获得更好外形和功能恢复,且操作简便,安全可靠。

大鼠脂肪干细胞体外定向诱导分化为脂肪细胞和成骨细胞的研究

目的研究大鼠脂肪干细胞的基本生物学特性及其向脂肪细胞和成骨细胞诱导分化潜能。方法取6周龄SD大鼠腹股沟处脂肪组织,胶原酶消化法分离出脂肪干细胞,体外培养。取第3代细胞,免疫细胞化学测定其CD44、CD34抗原表达,分别用成脂和成骨诱导培养液诱导其向脂肪细胞及成骨细胞分化。油红染色、碱性磷酸酶染色和vonKossa染色鉴定其分化能力。结果大鼠脂肪干细胞生长能力旺盛,表达CD44,而不表达CD34;定向诱导后,油红染色、碱性磷酸酶染色和vonKossa染色阳性。结论大鼠脂肪组织可分离培养出脂肪干细胞,能向脂肪细胞和成骨细胞诱导分化,有可能成为组织工程理想的种子细胞来源之一。

壳聚糖介导真核双表达质粒pIRES-hVEGF_(︱2︱)cDNA/hBMP-4转染兔骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化

背景:发展一种安全有效的方法来促进骨缺损是修复重建外科面临的重要问题,自体骨移植仍是目前优先考虑的选择,但供区有限且不可避免地对供区造成新的损害;同种异体骨移植存在免疫排斥反应;非骨性材料移植物在临床实践中的并发症仍居高不下。目的:探讨壳聚糖介导真核双表达质粒pIRES-hVEGFl2lcDNA/hBMP-4转染兔骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的可行性。设计、时间及地点:细胞基因工程学体外实验,于2007-09/2008-04在安徽医科大学与中国医科大学完成。材料:清洁级新西兰大白兔8只,由安徽医科大学实验动物中心提供。壳聚糖介导的真核双表达质粒pIRES-hVEGFl2lcDNA/hBMP-4为课题组自行构建。方法:无菌条件下抽取兔骨髓,Percoll法体外分离培养骨髓间充质干细胞,通过换液和贴壁吹打法进行纯化扩增。第3代骨髓间充质干细胞80%融合后,按1×108L-1密度接种,实验组采用壳聚糖介导的真核双表达质粒pIRES-hVEGFl2lcDNA/hBMP-4进行转染,对照组不转染质粒,继续以含10%FBS的L-DMEM普通培养基进行培养21d。主要观察指标:碱性磷酸酶及茜素红染色检测细胞分化情况,扫描电镜观察细胞结构变化。结果:转染14d后实验组碱性磷酸酶染色呈强阳性表达,茜素红染色出现大量棕红色的钙结节,电镜观察细胞内含有大量碱性磷酸酶的小泡,细胞周围大量基质分泌;对照组碱性磷酸酶与茜素红染色均呈阴性,电镜下细胞内几乎没有含碱性磷酸酶的小泡。结论:兔骨髓间充质干细胞在体外经壳聚糖介导的真核双表达质粒pIRES-hVEGFl2lcDNA/hBMP-4转染后,可定向分化为成骨细胞。

体表巨大神经纤维瘤的手术治疗

目的探讨体表巨大神经纤维瘤的手术方法及临床治疗效果。方法对15例体表的巨大神经纤维瘤,采用“S”形切口,直接大部分切除瘤体,术中采用肿胀麻醉技术、分段切除、边切开边缝合的方法,配合控制性降压技术,创面予以直接拉拢分层缝合。结果所有病例术中出血少,未予输血,术后2周拆线,11例切口一期愈合,4例有部分伤口裂开,经换药而愈。结论对体表巨大的神经纤维瘤行切除手术,术中采用肿胀麻醉技术、分段切除、边切开边缝扎的方法,配合控制性降压技术,可显著降低手术风险,最大限度地切除瘤体可取得较好的功能及外观恢复。

应用改良的额肌瓣转移矫正重度上睑下垂

目的:探讨应用改良的额肌瓣转移治疗重度上睑下垂的手术方法及临床价值。方法:沿重睑线切开皮肤,剪除部分眼轮匝肌,显露睑板;作皮下和额肌及额肌与骨膜间分离,于额肌与眼轮匝肌交界处提起并横行切断额肌,与其内侧斜向内上方弧形切开肌瓣达眉上1.5cm,外侧向外上方斜形剪开,注意不要超出眉毛平面0.5cm,形成不等边、扇形的额肌瓣,分别以内、中、外3点与睑板上缘作褥式缝合固定。结果:本组22例,切口均一期愈合,其中16例获得随访,上睑上提功能良好,重睑线自然、对称,“兔眼”征轻微,效果满意。结论:此法对额肌损伤小,不等边、呈扇形的额肌瓣使肌肉蒂部增宽,增加了额肌瓣的收缩力,适用于重度上睑下垂。

双基因rhBMP-4/VEGF_(121)在治疗兔桡骨缺损中的作用

目的研究双基因rhBMP-4/VEGF121混悬液在骨缺损修复中的作用。方法新西兰成年兔20只,制作40侧桡骨中段15mm骨缺损实验模型,随机分为A、B、C、D组。A组植入rhBMP-4+VEGF121+明胶海绵,B组植入rhBMP-4+明胶海绵,C组植入VEGF121+明胶海绵,D组只植入明胶海绵。并于术后4、8、12周对骨缺损区进行大体、X线片、组织形态学观察,图像分析新生骨小梁的面积。结果A组在12周内骨缺损完全修复,髓腔再通,且同时期内新生骨的数量和质量显著优于其他组;B、C组骨缺损为未完全成熟的板层骨修复,髓腔部分再通,B组骨愈合成熟度较C组佳;D组缺损主要由纤维结缔组织填充。结论双基因rhBMP-4/VEGF121治疗骨缺损比单基因具有更好的促进骨修复再生能力。

腺病毒载体介导VEGF cDNA和bFGF cDNA联合治疗缺血皮瓣的实验研究

目的探讨以腺病毒载体局部应用血管内皮生长因子(Ad-VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(Ad-bFGF)基因治疗对大鼠缺血皮瓣生存的影响。方法50只SD大鼠随机分成5组,每组10只。在其背部形成8cm×2cm的缺血皮瓣。于皮瓣远端皮下分别注射Ad-VEGF和Ad-bFGF(目的基因组),Ad-VEGF(基因对照组),Ad-bFGF(基因对照组)Ad-GFP(绿色荧光蛋白基因对照组),PBS(磷酸盐缓冲液空白对照组)。48h后按原设计掀起皮瓣并原位缝合,术后7d,测量皮瓣的成活面积及免疫组化,组织学检查等。结果目的基因组皮瓣成活面积比及单位面积微血管密度与其它4个对照组有显著性差异。免疫组化目的基因组毛细血管周围VEGF、bFGF沉积。结论以腺病毒为载体局部应用VEGF和bFGF基因能增加缺血皮瓣的成活面积。

应用碱性成纤维细胞生长因子基因治疗促进大鼠早期断蒂皮瓣的成活

目的探讨腺病毒介导的碱性成纤维细胞生长因子基因(Ad-bFGF)对大鼠随意皮瓣早期断蒂的影响。方法SD♂大鼠,普通级,随机分成3组:Ad-bFGF目的组、Ad-GFP对照组、PBS对照组,每组10只。于大鼠背部设计2cm×6cm随意皮瓣,蒂位于髂脊水平。术后4d断蒂,断蒂后7d观测皮瓣成活面积,检测bFGF表达情况,计算血管密度。结果目的组皮瓣的成活率、血管密度和染色深度均较两对照组有显著差异(P<0.05)。结论应用Ad-bFGF基因治疗能够促进大鼠随意皮瓣早期断蒂。

重组共表达质粒pIRES-hVEGF_(121)cDNA/hBMP-4在大鼠骨髓间充质干细胞中的共表达

目的观察重组共表达质粒pIRES-hVEGF121cDNA/hBMP-4转染大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)后的共表达情况,为骨缺损的联合基因治疗奠定基础。方法使用全骨髓培养法分离、培养大鼠MSCs;重组共表达质粒pIRES-hVEGF121cDNA/hBMP-4经酶切鉴定后,在脂质体介导下将其转入大鼠MSCs,提取总RNA和总蛋白,进行RT-PCR和Western blot检测。结果重组共表达质粒pIRES-hVEGF121cDNA/hBMP-4成功转染至大鼠MSCs中,并获得有效表达。结论hVEGF121和hBMP-4在大鼠MSCs中获有效表达,为骨缺损的联合基因治疗奠定了基础。

腺病毒载体介导的VEGF_(165)基因治疗大鼠缺血皮瓣的实验研究

目的 探讨局部应用以腺病毒为载体的血管内皮生长因子（Ad-VEGF165）基因治疗对大鼠缺血皮瓣生存的影响.方法 选用SD大鼠30只,体重350～400 g,随机分成3组,每组10只,在其背部形成8 cm×2 cm的全厚随意型皮瓣.于皮瓣远端皮下分别注射携带血管内皮生长因子基因的腺病毒（Ad-VEGF165目的基因组,简称VEGF165组）,携带绿色荧光蛋白基因的腺病毒（Ad-GFP基因组对照,简称GFP组）,磷酸盐缓冲液（PBS空白对照组,简称PBS组）,48 h后按原设计掀起皮瓣并原位缝合,术后7天,测量皮瓣的成活面积,计算成活面积百分比,并采集成活皮瓣组织行免疫组化、组织学检查等.结果 皮瓣成活面积百分比：VEGF165组为（69.4±1.3）%,GFP组为（52.2±1.7）%,PBS组为（52.9±2.9）%,VEGF165组皮瓣成活面积百分比明显高于GFP组和PBS组（P＜0.01）.免疫组化显示VEGF165组毛细血管周围VEGF沉积,组织切片微血管密度明显高于GFP组和PBS组（P＜0.01）.结论 局部皮下注射Ad-VEGF165可诱导局部VEGF蛋白表达,促进新生血管的形成,提高缺血皮瓣的成活面积,是一种简单有效的基因治疗方法.

改良Mckissock法巨乳缩小术

目的:探讨重度乳房肥大下垂的理想术式。方法:应用改进的Mckissock术式行乳房缩小术。结果:17例(32只)重度乳房肥大下垂术后外观挺拔,无乳头乳晕坏死发生和其他并发症。结论:改进的Mckissock法乳房缩小整形术手术方法简便,术后乳房外观良好,并发症少,值得推广。

翻转课堂在中职汽车运用与维修教学中的应用分析

翻转课堂属于一种全新的教学模式,使用优质网络资源推动教学任务的落地,可以促进学生在学习过程中自主完成知识学习任务。教师使用视频和有关设备为学生讲解知识,可以帮助学生解决学习时遇到的专业性疑惑问题,大幅度提高课堂教学效果。本文以中职汽车运用与维修专业课程为例,结合翻转课堂探究了在专业课程教学中的应用优势,结合应用现状提出了几点有效的应用策略,希望能助力中职教育人员提高汽车运用与维修教学效果,使得本专业学生掌握更多汽车运用与维修技能。

复制缺陷型腺病毒载体介导的VEGF基因治疗大鼠缺血皮瓣的实验研究

目的探讨局部应用以复制缺陷型腺病毒为载体的血管内皮生长因子(Ad-VEGF165cDNA)基因治疗对大鼠随意缺血皮瓣生存的影响.方法选用30只SD大鼠,体重350～400 g,随机分成三组,在其背部形成8 cm×2 cm的全厚随意型皮瓣.于皮瓣远端真皮下分别注射Ad-VEGF165cDNA(10只目的基因组)、Ad-GFP(10只绿色荧光蛋白基因对照组)、PBS(10只磷酸盐缓冲液空白对照组).48 h后按原设计掀起皮瓣并原位缝合,术后7d,测量皮瓣的成活面积,并采集组织行免疫组化、组织学检查等.结果皮瓣成活率: Ad-VEGF165cDNA组为(74.382±1.338)%,Ad-GFP组为(52.246±1.663)%, PBS组为(52.871±2.890)%,Ad-VEGF165cDNA组与其他两组间差异有显著性(P<0.01),免疫组化显示基因转染组毛细血管周围VEGF沉积,其微血管密度明显高于对照组.结论局部皮下注射Ad-VEGF165cDNA,可诱导局部VEGF蛋白表达,促进新生血管的形成,提高缺血皮瓣的成活面积,是一种简单有效的基因治疗方法.

输卵管显微复通术中较大面积浆膜缺损的整形修复

目的探讨整形外科技术修复输卵管显微复通术中较大面积浆膜缺损的方法及临床效果。方法在绝育术后要求行输卵管显微复通术的患者中,对其中因采用Pom eroy改良法绝育术式而造成输卵管浆膜有较大面积缺损的56例患者,根据浆膜缺损面积的大小分别采用Z成形、旋转浆膜瓣及腹膜游离移植3种不同的修复方法进行修复。结果经随访,56例患者行输卵管显微复通术后,复通率100%(56例),其中宫内受孕率85.7%(48例),异位妊娠率1.8%(1例),至今未受孕患者共7例,行输卵管造影检查显示管腔形态完整、通畅。结论根据整形外科修复原理,应用Z成形、旋转浆膜瓣及腹膜游离移植3种方法可修复输卵管浆膜较大面积的缺损,使输卵管解剖形态和生理功能得到最大限度的恢复,避免复通术后粘连,有效提高复孕率。

巯基烷基化壳聚糖介导pIRES-hVEGFl2lcDNA/hBMP-4真核双表达质粒修复兔桡骨缺损的初步研究

目的研究以巯基烷基化壳聚糖(TACS)介导的双核共表达质粒(pIRES-hVEGFl2lcDNA/hBMP-4)修复骨缺损的作用。方法以新西兰兔15只(30侧)为实验动物,制作桡骨中段15mm长的骨缺损实验模型,分实验组(左侧桡骨)和对照组(右侧桡骨),实验组植入明胶海绵+双基因混悬液,对照组植入明胶海绵+等量生理盐水,并于术后6周、8周、12周对骨缺损区进行大体观察、X线观察、X线阻射密度测定及组织形态学观察,图像分析骨小梁的生成数量。结果实验组在12周内骨缺损完全修复,且同时期内新生骨的数量和质量显著优于对照组;对照组骨缺损主要由纤维结缔组织填充。结论TACS介导的pIRES-hVEGFl2lcDNA/hBMP-4真核双表达基因具有良好的促进骨缺损修复的能力。