基于CRISPR/Cas9系统高通量筛选研究功能基因

利用功能缺失型(Loss-of-function)或者功能获得型(Gain-of-function)策略高通量筛选功能基因,是研究人员快速寻找调控特定表型的重要或关键基因的主要方法。RNA干扰(RNA interference,RNAi)的遗传筛选方法因操作简单、成本相对较低等优势,尽管已经得到了广泛的应用,然而其抑制效果不完全、脱靶效应明显等劣势依然存在。近年来兴起的CRISPR/Cas9(Clustered regularly interspaced short palindromic repeat sequences/CRISPR-associated protein 9)技术能快速、简便、准确地实现基因组敲除等编辑功能,因而成为一种强大的遗传筛选工具;在各种细胞系、人和小鼠及斑马鱼等多种模式动物中,大规模运用该方法筛选功能基因已经取得了巨大成功。本文总结了CRISPR/Cas9技术的特点,将其与传统基因工程方法进行了分析比较,回顾了近期相关的高通量功能基因筛选工作,最后探讨了该技术未来的发展趋势。

高通量siRNA筛选技术发展与展望

RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术被认为是20世纪生命科学领域最伟大的发现之一,是最具发展前景的生物医药技术和基因功能研究方法。因此,高通量siRNA筛选技术也成为生物学最强有力的研究工具之一。特别是在当今后基因组时代,高通量siRNA筛选技术已经成为揭示复杂信号网络调控、寻找新药物靶点分子等诸多问题的利器。将对这一技术的产生和发展进行回顾,总结描述我们的筛选经验,通过介绍若干典型筛选工作,来梳理高通量筛选技术的发展脉络,最后展望了高通量siRNA筛选技术的发展趋势。