中国50个甘蓝代表品种EST-SSR指纹图谱的构建

【目的】研究甘蓝DNA指纹鉴定方法,并构建50份中国甘蓝代表品种DNA指纹数据库,为甘蓝品种特异性、真实性、纯度鉴定提供参考依据。【方法】首先,利用6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术和来源不同的甘蓝材料对已开发的甘蓝EST-SSR引物进行筛选,获得多态性引物;然后将可用于甘蓝DNA指纹鉴定的核心引物正义链5′末端分别标记TAMRA、HEX、ROX、6-FAM四种荧光,利用DNA分析仪检测不同等位变异的扩增片段大小,并确定每个等位变异的标准品种。利用核心引物扩增结合标准品种的片段大小,构建中国50个甘蓝代表品种的SSR指纹数据库。通过人工构建模拟群体对‘中甘21’品种真实性进行鉴定,进而对该指纹鉴定技术进行验证。【结果】利用6份来自中国不同生态条件、植物学性状差异较大的甘蓝品种对978对EST-SSR引物进行初步筛选,获得带型清晰、具有多态性的引物128对。进一步根据引物扩增带型清晰、多态性信息指数较高、不同等位变异的带型易于区分、在染色体上分布均匀原则,筛选出20对核心引物。该套引物可以检测甘蓝染色体20个位点的58个等位变异,平均每条染色体上被检测位点2.22个,平均每个位点包含2.9个等位变异,其中引物BoE607、BoE723等位变异数最多为5个,PIC值处于0.34—0.76之间。通过DNA分析仪检测显示等位变异扩增片段长度范围143—296 bp。利用20对核心引物构建50份中国甘蓝代表品种DNA指纹数据库,并阐述了甘蓝SSR-DNA指纹鉴定的应用和技术流程。本研究还对来自甘蓝主产区的31份‘中甘21’品种进行真实性鉴定,结果显示指纹鉴定与田间鉴结果完全一致。【结论】筛选获得20对核心引物,用于构建中国50个甘蓝代表品种DNA指纹数据库,通过构建人工模拟群体对‘中甘21’品种的真实性进行鉴定,准确率达100%。

灵芝多糖体外对小鼠脾细胞IL-2,IL-3 mRNA表达的影响

目的观察灵芝多糖体外对小鼠脾细胞ＩＬ－２、ＩＬ－３ｍＲＮＡ的表达水平是否有影响。方法逆转录多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ｍＲＮＡ表达，凝胶图象光密度分析系统进行相对定量。结果在原代小鼠脾细胞培养开始时加入不同浓度的灵芝多糖ＧＬＢ７（５，１０，２０，４０ｍｇ·Ｌ－１），培养１２ｈ及２１ｈ后观察ＧＬＢ７与ＩＬ－２及ＩＬ－３ｍＲＮＡ表达水平之间的量效关系。发现在一定范围内，随着ＧＬＢ７浓度的升高，ＩＬ－２及ＩＬ－３ｍＲＮＡ表达水平也相应提高，对ＩＬ－２ｍＲＮＡ的提高率分别为１０．４％，２１．９％，３７．８％，４６．６％；对ＩＬ－３ｍＲＮＡ的提高率分别为１５．４％，３５．２％，５２．４％，７４．５％。１９９８－０４－０８收稿，１９９８－０７－２６修回＊国家自然科学基金资助课题，Ｎｏ３９４００１６５作者简介：王庆彪，男，２６岁，硕士；雷林生，男，３８岁，医学博士，副教授培养１２ｈ和３０ｈ的上清液中ＩＬ－２样活性及ＩＬ－３样活性处理组与对照组相比亦有明显升高，且有一定的浓度依赖关系。

两类甘蓝雄性不育系种子产量构成因素分析

以结球甘蓝自交系02-12及其回交转育多代育成的显性核基因雄性不育系(DGMS)和细胞质雄性不育系(CMS)为试材,对其制种产量及种子产量构成因素进行分析。结果表明:显性核基因雄性不育系材料DGMS02-12与细胞质雄性不育系材料CMSR302-12在单株产量和小区产量方面存在显著差异,并且全株有效荚数和每荚种子粒数是两种类型甘蓝雄性不育系间制种产量存在差异的主要构成因素。其中,一级分枝种子产量占单株产量的80%以上,一级分枝有效荚数、每荚种子粒数与制种产量有显著的相关性和较高的通径系数。

利用SSR标记分析白萝卜自交系的遗传多样性

为探明萝卜亲本材料的遗传背景,提高萝卜育种材料的利用效率,本试验利用38对SSR核心引物对42份白萝卜自交系进行遗传多样性分析。结果表明,1~9号染色体包含的引物数量分别为2、3、4、6、9、2、3、6、3个。38对引物共检测到123个等位变异,平均每个位点的等位变异数为2.86个,变异范围为2~5个;多态信息含量(PIC)的变幅为0.21~0.70,平均为0.52;其中RSS2114在42份白萝卜自交系中等位变异数最多,为5个,PIC值为0.68,表现为较好的引物多态性和品种鉴别能力。系统聚类分析表明:42份白萝卜自交系间的遗传相似系数变异范围为0.58~1.00,在相似系数0.61处可将42份材料分为3组,其中第2组可分为5个亚组,第3组可分为2个亚组。对不同或同一组间配制的杂交后代进行农艺性状分析,发现组间配组的产量优势明显高于组内配组。另外,耐抽薹自交系的亲缘关系较近,需要引入新种质来拓展该类型亲本的遗传基础。

灵芝多糖对小鼠T细胞胞浆游离Ca^(2+)浓度和胞内pH的影响

目的通过考察灵芝多糖（ＧＬＰ）对免疫细胞信号转导过程的影响，探讨ＧＬＰ免疫调节作用机制。方法采用激光扫描共聚焦显微镜（ＬＳＣＭ）技术，动态监测ＧＬＰ均一体组分ＧＬＢ７对小鼠Ｔ细胞胞浆游离Ｃａ２＋浓度（［Ｃａ２＋）和胞内 ｐＨ（［ｐＨ］ｉ）的影响。结果 ＧＬＢ７（２０ｍｇ·Ｌ－１）引起小鼠 Ｔ细胞中［Ｃａ２＋］；和［ｐＨ］；明显升高，１ｍｉｎ即分别升高至３３４．７０％±１６，４％（ｎ＝３）、１７１．６％ ± １０．４％（ｎ＝３），之后一直分别维持在该平台期，至 １０ ｍｉｎ仍维持高峰水平。加入ＥＣＴＡ和 ｖｅｒａｐａｍｉｌ处理后， １０ ｍｉｎ ＧＬＢ７ 引起 Ｔ细胞［Ｃａ２＋］；和［ｐＨ］；分别升高为 ２０２．４％± １３．６％（ｎ＝３）。１４０．２％±７．８％（ｎ＝３），与正常对照组比较差异有显著性（Ｐ＜０．０1）。以 ＥＧＴＡ和 ｖｅｒａｐａｍｉｌ处理后，再分别以 ｈｅｐ－ｅｒｉｎ和 ｐrocaine处理细胞 １０ ｍｉｎ，之后以 ＧＬＢ７刺激Ｔ细胞，１０ｍｉｎ［Ｃａ２＋］ｉ值分别为１５１．５％±９．４％（ｎ＝３）、１４３．２％± ８．１ ％（ ｎ＝ ３），与 ＥＧＴＡ和 ｖｅｒａｐａｍｉｌ处理组相比差异有显著性（ Ｐ＜ ０．０１）。

灵芝多糖对小鼠T细胞蛋白激酶A和蛋激酶C活性的影响

:目的 :观察灵芝多糖体外对小鼠T细胞蛋白激酶A (PKA)和蛋白激酶C(PKC)活性是否有影响。方法 :采用反相离子对高效液相色谱法测定PKA和PKC活力。结果 :灵芝多糖GLB7 能引起T细胞中PKA和PKC活性明显增强并具有剂量依赖性 ,达峰时间分别为5min和20min ,于20min及1h分别恢复到基础水平 ;GLB7 还可引起T细胞中PKC发生质膜转位 ,并拮抗Stau rosporine对T细胞中PKC的抑制作用。结果

灵芝多糖对小鼠T细胞三磷酸肌醇和二酰基甘油体外作用的研究

目的 研究灵芝多糖 (GLB7)对小鼠T细胞三磷酸肌醇 (IP3 )和二酰基甘油 (DAG)的作用 ,确定其对T细胞信号转导途径。方法 采用细胞培养、放射免疫分析、离子交换层析和薄层色谱法测定小鼠脾脏T细胞中IP3 和DAG的变化。结果 GLB7引起小鼠T细胞中IP3和DAG浓度升高。IP3 的达峰时间为 30s ,百日咳毒素 (PTX)对此现象有抑制作用 ;DAG的合成出现两个峰 ,第一个峰迅速短暂 ,峰值位于 30s,第二个峰是持续时间较长的迟发峰。GLB7对活化的T细胞中IP3 和DAG未产生明显影响。结论 IP3 /Ca2 +

灵芝多糖对小鼠巨噬细胞内三磷酸肌醇和二酰基甘油的作用研究

为研究灵芝多糖（ＧＬＢ７） 对小鼠腹腔巨噬细胞（ ＭΦ） 三磷酸肌醇（ＩＰ３） 和二酰基甘油（ＤＡＧ） 的作用，确定其对ＭΦ信号转导途径，采用细胞培养、放射免疫分析及离子交换层析和薄层层析法测定了小鼠腹腔ＭΦ中ＩＰ３ 和ＤＡＧ 的变化。结果显示ＧＬＢ７ 能引起小鼠ＭΦ中ＩＰ３ 和ＤＡＧ 浓度升高。ＩＰ３ 的达峰时间为３０ｓ，百日咳毒素（ＰＴＸ） 对此现象有抑制作用；ＤＡＧ 的合成出现两个峰，第一个峰迅速短暂，峰值位于３０ｓ，第二个峰是持续近２ｍｉｎ 的迟发峰。表明ＩＰ３／Ｃａ２ ＋ 和ＤＡＧ／ＰＫＣ

国产富马酸比索洛尔胶囊的人体相对生物利用度研究

摘要 为了考察富马酸比索洛尔胶囊新剂型的人体生物利用度，本文取１０名男性健康志愿受试者单剂量交叉口服 １０ ｍｇ富马酸比索洛尔胶囊和富马酸比索洛尔片，用高效液相色谱荧光检测法测定血浆富马酸比索洛尔浓度，进行富马酸比索洛尔胶囊的药代动力学和相对生物利用度研究。结果表明：富马酸比索洛尔胶囊和片剂的血药浓度时间曲线图均符合口服吸收二室模型，主要药代动力学参数Ｔｍａｘ分别为２．０５±１．８９ ｈ和２．２０±１．７５ｈ，Ｃｍａｘ分别为６３．２７±１６．０５ μ ｇ·Ｌ－１和５７．４９±１０．４９ μｇ· Ｌ－１， Ｔ１／２β分别为 １２．７９± ２．８６ ｈ和 １３．１１± ３．９３ ｈ， ＡＵＣ０～∞分别为 １３９０．９５±１３９．２２ μｇ·ｈ·Ｌ－１和１３８１．０４± １５１．５６ μｇ·ｈ·Ｌ－１。两种剂型的药代动力学参数经统计学分析无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。富马酸比索洛尔胶囊的相对生物利用度为１００．１％±１８．７％，结果提示受试的胶囊剂和对照的片剂生物等效。

灵芝多糖对小鼠脾细胞白细胞介素1、肿瘤坏死因子的产生及其mRNA表达的影响

小鼠脾细胞体外培养３ｈ即可检测到ＩＬ１αｍＲＮＡ的表达，４ｈ达到高峰，５ｈ后降至不能检出的水平。ＴＮＦαｍＲＮＡ在４ｈ开始出现，４．５ｈ时达到高峰，５．５ｈ后逐渐消失。在培养开始时分别加入灵芝多糖ＧＬＢ７５、１０、２０、４０μｇ／ｍｌ，４ｈ及４．５ｈ分别检测ＩＬ１α及ＩＬ１αｍＲＮＡ的表达情况。结果ＧＬＢ７能促进ＩＬ１α及ＩＬ１αｍＲＮＡ的表达，对ＩＬ１αｍＲＮＡ的表达提高率分别为７．６％、６７．３％、１０５．０％、１４３．１％；对ＴＮＦαｍＲＮＡ的表达提高率分别为９．９％、３３．９％、４５．９％、７５．８％。８ｈ后ＧＬＢ７对培养上清中ＩＬ１活性的提高率分别为１．４％、３．０％、６．７％、８．１％；１２ｈ后对培养上清中ＴＮＦα活性的提高率分别为３．０％、１４．１％、２８．２％、３５．７％。结果说明灵芝多糖ＧＬＢ７能通过促进小鼠脾细胞原代培养时ＩＬ１α及ＴＮＦαｍＲＮＡ的表达从而促进ＩＬ１及ＴＮＦα的合成与分泌。

一个支持芥蓝起源于中国的分子证据

有关芥蓝的起源存在地中海沿岸起源说和中国南方起源说,本试验利用EST-SSR分子标记技术对包括8份芥蓝在内的38份甘蓝类材料进行遗传多样性分析。通过引物筛选,选取61对EST-SSR引物扩增38份材料,共获得174条多态性好、稳定、清晰的条带,应用NTSYSpc2.11软件计算材料间的遗传相似性系数和UPGMA聚类分析。在相似系数为0.62处,所有甘蓝类材料分为三大类群:欧洲西北部沿海地区类群、地中海沿岸类群、中国华南地区类群,支持芥蓝起源于中国南方的观点,并且本试验选用的芥蓝按照叶形和叶面分为两类。

两种甘蓝Ogura细胞质雄性不育源的分子鉴别

【目的】比较两种可实用的甘蓝Ogura细胞质雄性不育源(CMSHY和CMSR3)在细胞质DNA水平上的区别,以快速、准确鉴别两种不育源。【方法】利用开发的叶绿体SSR(cpSSR)和线粒体SSR(mtSSR)引物,结合聚丙烯酰胺凝胶电泳和测序技术,获得在两种不育源间的分子差异,并对其中有限制性内切酶的位点转化成CAPS标记。【结果】无法在聚丙烯酰胺凝胶电泳上发现32对cpSSR扩增产物的差异,经测序仅发现ACP9引物上SSR重复数的差异。在21对mtSSR引物中,仅mtSSR2引物可以在聚丙烯酰胺凝胶电泳上区分这两种不育源。经测序发现其余5对mtSSR引物上存在9个多态性差异,其中3个为SSR位点的差异。对其中2个可被限制性内切酶MseⅠ酶切的多态性位点转化成CAPS标记,分别命名为m92-143 MseⅠ、m1-346 MseⅠ。这些标记均可以用于这两种Ogura细胞质雄性不育源的区分。【结论】利用获得的cpSSR和mtSSR标记,成功区分甘蓝Ogura细胞质雄性不育源CMSHY和CMSR3。CAPS标记可快速、简便、准确地区分两种不育源。

高效液相色谱法测定人血浆中异烟肼和吡嗪酰胺的含量

建立了同时测定人血浆中异烟肼和吡嗪酰胺的反相高效液相色谱法。色谱柱 Lichrospher1 0 0 RP-C8( 5μm) ,流动相为乙腈 ( A)∶ 0 .0 5mol/L磷酸二氢钾 ( B) (每 50 0 ml中加入三乙胺约 2 0 0μl调 p H 5.6) ,检测波长 2 70 nm。线性范围分别为 0 .1～ 1 0μg/ml和 1～ 4 0μg/ml,方法回收率分别为大于 90 %和 82 % ,日内、日间差皆小于 1 0 %

气相色谱法检测葡萄糖、麦芽糖、果糖和蔗糖

本文建立了气相色谱法定量测定葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和果糖的三甲基硅醚衍生物。色谱条件：色谱柱HP-1(30m×0.32mm)毛细管柱，程序升温：180℃至250℃，升温速度8℃/min，250℃延长8min；进样口240℃，FID检测器280℃，进样体积0.4 μl。结果表明该方法简便、速度快、结果满意。

萝卜雄性不育细胞质的鉴定与分类

通过对不同萝卜雄性不育细胞质进行鉴定与分类,确定不育细胞质的类型,为更好地利用这些不育细胞质提供科学依据。利用5个来源不同的萝卜细胞质雄性不育材料和8个可育的白萝卜品种,从恢保关系、花粉败育方式及线粒体DNA的分子标记等3个方面对其进行了研究。结果发现,根据5个细胞质雄性不育的恢保关系,可将其分为2种细胞质类型。进一步对其花器官形态及花粉败育方式研究发现,类型1花丝短缩,花药瘦小,败育从四分体时期开始,表现为绒毡层细胞液泡化,最终药室的基本结构消失,内无花粉粒;类型2花药大小与可育相似,雄蕊稍低于柱头,败育从单核小孢子时期开始,能够保持药室的基本结构,药室内存在没有活力的花粉粒外壳。PCR检测结果表明:类型1为Ogura不育细胞质类型,类型2为NWB不育细胞质类型。

利用离体小孢子培养技术培育心里美萝卜新品系

以北京心里美和山东心里美为供体材料进行离体小孢子培养,2个基因型均成功获得胚状体,每105个小孢子的成胚率分别为15.6%和21.3%。选取子叶形胚进行胚状体再生,北京心里美与山东心里美的成苗率分别为78.9%和64.5%。利用流式细胞仪对再生株倍性进行鉴定,44.8%为二倍体(双单倍体,DH系),17.2%为单倍体,38.1%为多倍体。选择正常的二倍体植株进行自交留种,并对自交后代进行田间性状鉴定,与供体植株相比,DH系出现较大的性状变异。对来源于北京心里美的肉质根圆形、绿皮血红肉和椭圆形、绿皮血红肉DH系进行扩繁,后代性状整齐一致,血红肉率100%,没有出现浅绿肉变异株。利用离体小孢子培养技术获得了肉色整齐一致的心里美萝卜新品系,有效解决了常规自交易出现浅绿肉变异株的问题。

萝卜新品种京红5号的选育

京红5号是以雄性不育系RA17为母本,以自交系R17-2为父本配制而成的萝卜一代杂种。属中型秋红萝卜新品种。生长期80~85 d(天),平展株型,花叶,叶色浅绿,叶片短小,叶数少,适合密植。根形圆正,皮色鲜红,表皮光滑,横纹少;小顶小根,商品性状优良。根长12 cm,直径13 cm,平均单根质量1.3 kg左右。平均每667 m2产量5 000 kg左右。田间抗病毒病和软腐病能力强于对照小顶红,适合在东北、华北地区秋季栽培。

分子标记辅助选育萝卜雄性不育系

利用Ogura CMS不育基因orf138特异标记及细胞核育性恢复基因Rfo的KASP标记,在苗期对6个可育的中国水果萝卜育性基因型进行鉴定。结果表明:6个水果萝卜的细胞质均为正常可育胞质。细胞核育性恢复基因Rfo的基因型在不同单株间存在差异,所鉴定的60个单株中,基因型rfrf、Rfrf、RfRf分别占40.0%、33.3%和26.7%。以日本白萝卜品种献夏37为不育源,选择具有rfrf基因型的单株与不育源进行杂交与回交,经过5代的回交及父本自交,获得4个不育率100%、遗传稳定、整齐度高的绿皮绿肉水果萝卜雄性不育系及保持系。利用这些雄性不育系配制杂交组合,获得7个优良的杂交组合。分子标记辅助选育萝卜雄性不育系,避免配制大量杂交组合及田间育性鉴定,提高了选择效率与精准度。

樱桃萝卜新品种京研红樱桃的选育

利用来源于我国及法国的优异资源转育出的樱桃萝卜雄性不育系CA12-18及纯合的自交系C34-1,并利用三系配套技术选育出樱桃萝卜新品种京研红樱桃。该品种皮色暗红,肉质白,圆形,整齐度好,商品性状优良。单株质量20 g左右,单根质量16 g。平均每667 m2产量为1 600 kg。从播种到收获需要25~30 d(天),低温条件下生长期延长。抗芜菁花叶病毒。适合我国北方地区春、秋露地及冬春棚室栽培。

高效液相色谱法测定参芍胶囊芍药苷的含量

目的 建立反相高效液相色谱法测定参芍胶囊中芍药苷的含量。方法 本品以甲醇 -水 (1∶ 1)超声振荡提取 ,提取物滤过、离心后 ,进行高效液相色谱分析。色谱柱 Extend-C1 8(5 μm.4.6× 2 5 0 mm) ;流动相为甲醇 -水 -乙腈 (10∶ 75∶ 15 ) ;流速 :1.0 ml·min- 1 ;柱温 :3 0℃ ;检测波长 :2 3 0 mm。结果 平均加样回收率为 99.0 3～ 99.5 4% ,RSD为 1.5～ 2 .1% (n=6)。 结论 实验结果表明 ,该法操作简便、重现性好 。