链霉菌HBERC-44441活性成分的分离鉴别及其抗菌活性测定

在筛选微生物源杀菌剂的过程中,从湖北省通山县九宫山采集的土样中分离到一株链霉菌,编号为HBERC-44441。经扫描电镜观察和16S rRNA基因序列比对,菌株被鉴定为利迪链霉菌Streptomyces lydicus。室内生物活性测定结果表明,该菌株发酵提取物对水稻纹枯病菌、小麦赤霉病菌、草莓灰霉病菌等具有强烈抑制活性。经分离制备,获得了其中几个活性组份,经波谱学分析,解析了其中4个化合物的化学结构,分别是吲哚-3-甲酸、pimprinine、另有两个pimprinine二聚体,鉴定为新的化合物。抗菌活性测试表明,吲哚-3-甲酸具有较好抗真菌活性,pimprinine及其二聚体抗真菌活性较弱,首次检测到pimprinine对植物重要病原细菌青枯劳尔氏菌有一定活性,其MIC值可达25μg/mL。

琼脂扩散法用于放线菌源生防菌剂筛选的活性影响因素

以灰霉病菌(Botrytis cinerea)、胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeobosporioides)、番茄枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、西瓜猝倒病菌(Pythium aphanidematum)为模式靶标,探讨了放线菌源生防杀菌剂筛选的活性特征、影响活性稳定性和敏感度的因素。采用琼脂扩散法,测试了模式靶标、化合物标准样品和放线菌标准菌株的发酵液样品对杀菌活性测试的影响。结果表明,靶标的处理过程、靶标菌的含量、样品的类型以及样品的加入量与活性反应有直接关联。不同模式靶标菌对破碎处理的耐受程度不同,必须针对不同模式靶标进行个性化处理,以保证模式靶标菌在测试中的稳定生长状态。在琼脂扩散法中,不仅可以检测样品的杀菌活性强度,而且活性成分与靶标菌的不同作用方式也可以呈现。保留活菌的放线菌发酵液样品在加入量较宽的范围内都显示活性,而经过滤除菌处理的放线菌发酵液样品和标准化合物都只在样品加入量比较大时才显示出活性。

582例小儿腹泻病因调查分析

目的分析小儿腹泻病因,为临床治疗和预防提供理论指导。方法回顾性分析2018年1月至2020年12月于海口市妇幼保健院住院的582例小儿腹泻患儿的临床资料。结果582例患儿中男354例,女228例;发病年龄:2个月~1岁293例,>1~2岁170例,>2~3岁85例,>3~4岁34例;发病时间:1~3月份205例,4~6月份97例,7~9月份96例,10~12月份184例;患儿来源地区:市区228例,农村354例。582例患儿中,感染性腹泻469例,其中病毒性肠炎289例,抗生素相关性腹泻98例,细菌性肠炎75例;非感染性腹泻113例,其中食饵性腹泻45例,症状性腹泻34例。感染性腹泻患儿男性、农村儿童占比高于非感染性腹泻患儿,差异有统计学意义(P<0.05);感染性和非感染性腹泻患儿年龄、月份分布比较差异无统计学意义。结论小儿腹泻病患儿以男性农村患儿居多,以感染性腹泻多见,主要为病毒性肠炎,发病年龄以2岁以下小儿为主,发病时期在10~12月和1~3月2个时间段。临床应以预防为主,做好2岁以下农村儿童的卫生保健工作。

气囊导尿管囊内注水、气量的比较与护理

目的探讨导尿管气囊内注水、气量对保留导尿效果的影响;方法观察组患者气囊内注生理盐水10～12ml后再注入5ml空气固定,对照组气囊内注入生理盐水5～8ml,再注入5ml空气后固定。结果将溢尿、尿道损伤、膀胱刺激症状,泌尿系统感染发生率进行比较,差异有显著性检验(P<0.05);结论气囊导尿管注入生理盐水10～12ml后再注入5ml空气,可有效地防止尿液外渗,导尿管脱出,减少膀胱刺激、泌尿系感染的发生率,对临床有指导意义。

苏云金芽孢杆菌cry1Ab13基因的克隆及表达研究

BtC0 0 5是我国自行分离的对多种害虫具有毒杀作用的苏云金芽孢杆菌 ,经PCR RFLP系统鉴定 ,它含有cry1Ab基因。Southernblot结果显示 :PstI酶切C0 0 5质粒所得的 8 5kb长的DNA片段为cry1Ab基因的阳性杂交带。以pUCP1 9为载体 ,克隆了该片段并证明其含有cry1Ab基因。对其进行亚克隆和测序 ,结果表明该基因编码区为 3 4 6 8bp ,其编码的蛋白含1 1 5 5个氨基酸 ,分子量为 1 3 0 6kD ,等电点为pH4 845。该基因已在GenBank基因库中注册 ,Accessionnumber为AF2 5 4 6 4 0 ,并为国际Bt杀虫晶体蛋白基因命名委员会正式命名为cry1Ab1 3。将cry1Ab1 3基因在Bt无晶体突变株cryB- 中表达 ,蛋白质电泳结果表明在 1 3 0kD处有表达带 ,并证明CryAb对小菜蛾有较高的杀虫活性。

几种枯草芽孢杆菌发酵液防治草莓病害的药效试验

4种枯草芽孢杆菌发酵液 ,对草莓白粉病、灰霉病均有一定的防效 ,Bacillusspp1对白粉病防效达5 4 6 % ,Bacillusspp3对草莓灰霉病的防效达 6 0 7%。

杀线虫剂产品研究进展

植物寄生线虫是植物的一类重要病原物,全世界每年因线虫造成的损失大约1500亿美元。本文就目前全球杀线剂的市场需求、国外杀线剂农药登记情况、我国杀线剂农药登记情况与生产企业分布情况及杀线剂开发过程中存在的主要问题等方面展开分析,能够为杀线剂产品的研究提供理论基础。

痰热清联合吸入用布地奈德对小儿支气管哮喘的治疗作用及对气道反应性和hs-CRP、降钙素原的影响

目的:研究雾化吸入布地奈德和痰热清对支气管哮喘急性发作患儿的临床疗效及对哮喘患儿气道反应性、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、降钙素原(PCT)的影响。方法:选取2015年1月~2016年10月在海口市妇幼保健院儿科就诊的112例支气管哮喘患儿随机分为观察组和对照组各56例,两组患儿均接受常规综合治疗,对照组患儿给予雾化吸入布地奈德治疗,对照组患儿给予雾化吸入布地奈德及静脉注射痰热清注射液,疗程为1周,比较两组患儿临床症状的持续时间及综合临床疗效,测定治疗前及治疗1周时两组患儿的气道反应性及血清hs-CRP和PCT水平。结果:(1)观察组显效率为91.07%,显著高于对照组(P<0.05);(2)观察组患儿各临床症状(咳嗽、憋喘、肺部哮鸣音和肺部湿啰音)持续时间均较对照组显著缩短(P<0.05);(3)治疗后观察组患儿Dmin、Cmin、SGrs及SGrs/Grs均较对照组显著升高(P<0.05);(4)治疗后观察组患儿hs-CRP和PCT均较对照组显著降低(P<0.05)。结论:雾化吸入布地奈德联合痰热清对急性发作期哮喘患儿具有较好的临床疗效,可迅速消除临床症状,降低患儿气道反应性,并降低血浆超敏C反应蛋白和降钙素原水平。

多粘类芽孢杆菌研究进展

多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)是重要的根际有益生物,也被用于生物医药、流程制造、生物修复等方面,具有较大利用价值。综述了多粘类芽孢杆菌的菌株新特性和基因组特点、诸多功能领域的研究和产业化应用、分子操作系统、菌株的选育以及发酵技术的优化。

PCT、CRP和WBC在儿童哮喘急性发作中的临床意义

目的探讨血清降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)及外周血白细胞(WBC)测定对哮喘急性发作患儿抗生素应用的临床意义。方法将342例支气管哮喘急性发作患儿全部进行PCT、CRP及外周血血常规三项检验,将阳性结果与最终确定存在细菌感染患儿之间的结果差异进行比较及分析。结果 PCR阳性113例,细菌总检出率88.9%,PCR阳性者存在细菌感染率达100%,可见检测细菌特异性极高;CRP组阳性共202例,最终确定存在细菌感染的患儿121例,细菌感染总检出率95.2%,但非细菌感染者中CRP阳性也有81例,误诊率37.7%;WBC组阳性共161例,确诊细菌感染89例,总检出率70.1%,非细菌感染者中WBC阳性也有72例,误诊率33.4%。三组患儿细菌检出率卡方检验差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 3个指标均可作为确定细菌感染的诊断指标,CRP的灵敏度较高,而PCT的特异性更高,WBC则是最便宜、快速的检验方法。

对植物寄生线虫具有活性的苏云金芽胞杆菌研究进展

植物寄生线虫是重要的植物病原物之一,给农业生产带来了巨大的经济损失。长期以来,一直缺乏有效防治植物寄生线虫的手段。苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)是重要的昆虫病原细菌,广泛应用于鳞翅目、双翅目、鞘翅目害虫等农林及卫生害虫的防治;部分Bt菌株对植物寄生线虫具有很高的活性。本文总结了杀植物寄生线虫Bt菌株筛选的模型与方法的建立、Bt菌株杀植物寄生线虫的作用机理及其相关应用、以及杀植物寄生线虫的伴胞晶体蛋白与相关基因等,可望为杀植物寄生线虫Bt制剂的研究与开发提供借鉴。

苏云金杆菌GC-91发酵上清液的增效作用

利用生物测定，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ方法对苏云金杆菌ＧＣ－９１发酵液的上清液进行了研究。研究表明，上清液中含有增效物质，离心丢弃上清液是导致毒力收率大幅度下降的根本原因。上清液对粉剂增效明显，本实验中最高增效倍数为２３．５倍，且上清液对不同菌种粉剂增效力不同，对ＧＣ－９１菌粉增效极为显著，对ＨＤ－１菌粉增效较为缓慢。上清液中含有的增效物质是一种热稳定物质，能耐１５分钟沸水浴，在ｐＨ２～１０范围内稳定。

海南省儿科医务人员心理健康状况调查

目的:了解海南省儿科医务人员心理健康状况,并对发现的心理健康问题提出相应的对策。方法:2011年3月至2011年6月采用整群抽样方法对海南省14家医院正常在岗、无精神疾病的405名儿科医务人员进行问卷调查,问卷调查表包括一般状况调查表和症状自评量表(SCL-90)。结果:海南省儿科医务人员SCL-90的评分在总分、总均分、阴性项目数、阳性项目数、躯体化、强迫、人际关系、抑郁、焦虑、恐怖及精神病性与中国常模比较差异有统计学意义(P<0.05)。405名儿科医务人员有119人(29.38%)有不同程度心理健康问题。在各因子分≥2分中,检出率最高为强迫,112人(27.65%);其次是抑郁,84人(20.74%);第三位为躯体化,81人(20.00%);第四位为焦虑,79人(19.51%)。在职称比较中,各级职称在各因子比较中差异都有统计学意义(P<0.05);在夜班每月≥6 d与每月≤5 d和常白班的比较中,在躯体化、人际关系、焦虑方面比较差异有统计学意义(P<0.05);在工龄的比较中,15～20年组与其他工龄组之间在躯体化、强迫、抑郁、恐怖、偏执方面差异有统计学意义(P<0.05);不同级别工作单位比较中,三级医院与一、二级医院各因子比较差异有统计学意义(P<0.05);在工作表现及身体健康自评上,表现良好、身体健康的与差或很差的各因子比较差异都有统计学意义(P<0.05)。结论:海南省儿科医务人员各因子分普遍高于中国常模,心理健康状况不容乐观,尤其是在强迫、抑郁、躯体化和焦虑等方面较为突出,有必要给予适当的心理训练和辅导。

表没食子儿茶素没食子酸酯体外抗柯萨奇病毒的实验研究

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)体外抗柯萨奇病毒B3型(CVB3)的活性及作用机制。方法利用HEp-2细胞体外培养系统,通过观察细胞病变效应(CPE)、噻唑兰(MTT)比色法检测细胞活性,从药物抗病毒吸附、药物直接灭活病毒以及抑制病毒在细胞内的生物合成3个方面检测EGCG抗CVB3的作用方式,以治疗指数(TI)作为评价指标。结果 高浓度EGCG能阻止CVB3的吸附,EGCG具有较好的直接灭活病毒和抗CVB3生物合成的作用,TI分别为8.7和15.3,且随着药物浓度的增加,病毒所致CPE效应逐渐减弱而病毒抑制率则明显升高。结论 EGCG具有很好的体外抗CVB3的作用,其抗病毒方式是多途径的。

蚕豆锈病的离体叶片人工接种技术研究及微生物源先导化合物筛选

蚕豆锈病由蚕豆单孢锈菌(Uromyces fabae de Bary)引起,是一种常见专性寄生的真菌病害,其侵染和传播方式与大豆锈病(Phakopsora pachyrhiri Syd.)相同,主要以夏孢子传播。因此常作为大豆锈病研究的模式靶标。又因其无法在人工培养基上生长繁殖,而基于植株的筛选方式难以适应先导化合物筛选。该文针对蚕豆锈病离体叶片人工接种技术进行了探索,对影响蚕豆锈病侵染的主要因素进行了研究,建立了基于离体叶片法筛选的先导化合物筛选方法。采用离体叶片孢子悬浮液喷雾法对1522份真菌固体发酵提取物和放线菌液体摇瓶发酵提取物进行了初筛,筛选出具有杀菌活性的提取物90份。对经过HPLC纯化后的540个组分进行复筛,获得具较高杀菌活性的化合物3个。筛选结果表明该筛选方法能稳定、高效地进行先导化合物筛选。

除草剂组合靶标筛选的研究

主要研究了几种单、双子叶植物种子在人工环境条件下的发芽率及对几种常用溶剂的反应,并选用了几种合适的种子以及小球藻(Chlorella vulgaris)、浮萍(Lemnaceae)对9种除草剂进行了除草活性试验。结果表明,不同备选靶标在室内人工环境适应性及对除草剂活性反应均不同;综合比较各备选靶标的发芽率、培养温度、对常用溶剂及除草剂的敏感性等因素,确定了几个可用于除草剂组合筛选的靶标。以组合靶标方式建立的除草剂筛选流程提供的是一个多重筛选模型,可减少对低活性先导化合物的漏筛。近3年来对30 000多个微生物源提取物的筛选结果表明,运用组合靶标是一种稳定、高效的除草活性筛选模式。

微生物源杀菌剂先导化合物筛选研究

以番茄早疫病菌(Alternaria solani)作为产孢病原菌的代表,进行了孢子浓度和培养时间对其敏感性影响的筛选试验;以小麦颖枯病菌(Septoria nodorum Berk)作为不产孢病原菌的代表,进行了菌丝碎片计数,同时比较了接菌浓度和培养时间对其敏感性影响的筛选试验;用两个杀菌剂标准样品进行了筛选稳定性比较试验,同时对576个微生物源提取物进行了筛选试验。结果表明,杀菌剂筛选必须控制接菌浓度和培养时间,从而保持适当的活性敏感度,才能得到稳定的筛选结果。适当降低接菌浓度和缩短培养时间可以提高活性样品的敏感度,有效的减少低活性样品的漏筛。

苍耳子提取物作为生物农药的潜力研究

考察了苍耳子的水提取物及乙醇提取物在抗真菌、除草、杀虫方面的作用,研究结果表明:在抗真菌实验中,苍耳子乙醇提取物终浓度为20 mg/L时选择性地对小麦颖枯菌和小麦赤霉菌有抑制作用,抑制率分别为70%和100%;在杀虫实验中,苍耳子乙醇提取物具有选择性杀虫作用,在终浓度为60μg/cm^2时对棉铃虫毒杀率达100%;在除草实验中,在终浓度为60μg/cm2时,苍耳子水提取物选择性地对小白菜有100%的抑制作用。

常压室温等离子体(ARTP)诱变快速选育对亚洲玉米螟高毒的苏云金芽孢杆菌突变株

采用常压室温等离子体(Atmospheric and room temperature plasma,ARTP)诱变苏云金芽孢杆菌Bt-NBIC-380菌株,选育对亚洲玉米螟高毒力突变株。经过4轮的ARTP诱变、镜检及摇瓶发酵筛选得到的突变株Bt-NBIC-380-18-407,其摇瓶发酵液对玉米螟二龄幼虫效价达到6 835 IU/μL,杀虫晶体蛋白含量6.3 mg/mL。该突变株的效价较初始菌株提高了25.7%,杀虫晶体蛋白含量提高了18.9%。经过5次传代,证实该突变株具有良好的遗传稳定性。

新型新杀虫剂的高通量筛选方法研究

试验针对化学合成的新化合物筛选及活性评价方法进行了探索,对几类杀虫剂活性进行了对比试验,建立了基于人工叶片表面涂布及使用挥发性有机溶剂的高通量筛选和活性评价方法。并采用该方法对4个系列的化学合成化合物和微生物源先导化合物及其化学合成衍生物样品共773个进行了筛选。结果表明,该筛选方法能稳定、高效地对化学合成的新化合物进行杀虫活性筛选和活性评价。