建立ICR小鼠骨髓间充质干细胞的体外分离培养及鉴定方法

目的:建立一种简单的高效分离、培养、纯化和鉴定ICR小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs)的方法,初步研究其相关生物学特性。方法:全骨髓贴壁法分离培养BMSCs,用倒置显微镜观察细胞的形态和生长情况;用流式细胞仪鉴定细胞表面标记物;诱导细胞定向分化为成脂细胞、成骨细胞,以检测细胞多向诱导分化能力。结果:利用该方法纯化的BMSCs形态均一,多为梭形。第3代BMSCs进行流式检测CD29、CD44均呈阳性表达,表达率分别为97%、90%;CD34、CD45呈阴性表达;且能够成功诱导分化成成骨细胞、成脂细胞。结论:利用全骨髓贴壁法可以高效分离、纯化ICR小鼠的BMSCs,生物学特性稳定。

前列腺癌相关长链非编码RNA在前列腺癌中的表达及生物学功能

目的探讨前列腺癌相关长链非编码RNA(prostate cancer related long non-coding RNA,PCRL)在前列腺癌中的表达情况及其潜在的生物学功能。方法采用qRT-PCR检测PCRL在前列腺癌组织、癌旁组织及其他组织中的表达,同法检测并比较PCRL在雄激素依赖(LNCaP-AD)与雄激素非依赖(LNCaP-AI)前列腺癌细胞和正常前列腺上皮细胞(RWPE-1)中的表达差异。以siRNA干扰PCRL后,采用qRT-PCR方法检测LNCaP-AI细胞和LNCaP-AD细胞中雄激素受体的表达变化。结果 PCRL在前列腺及前列腺癌组织中特异高表达,LNCaP-AI细胞中PCRL水平高于LNCaP-AD细胞和RWPE-1细胞。干扰PCRL后LNCaP-AI细胞和LNCaP-AD细胞中雄激素受体的表达量上升(前者P<0.000 1)。结论在前列腺癌中特异高表达的PCRL与前列腺癌的进展有关,PCRL和雄激素受体之间可能存在一定的调控关系。

胆囊肉瘤样癌的临床病理分析及治疗方法探索

胆囊肉瘤样癌(GBSC)是一种非常少见的胆囊癌病理类型,由Landsteiner于1907年首次报道[1]。迄今为止,国内外文献多为散在个案,未见大宗病例报道,其临床病理特点、治疗方法仍处于探索阶段。本研究对同济大学附属东方医院确诊的1例GBSC进行临床、病理分析及分子检测,同时复习文献,旨在提高对GBSC的认识水平,并为其治疗提供新思路。

骨形态发生蛋白-2促进人肺癌细胞上皮-间质样转化及机制的研究

目的 :研究骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)对肺癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响,并探讨其可能的分子作用机制。方法 :用不同质量浓度的BMP-2(10、50和100μg/mL)处理人肺腺癌A549细胞24 h,采用免疫组织化学法检测A549细胞中上皮细胞标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)表达水平的变化,蛋白质印迹法检测A549细胞中E-cad、间质细胞标志物波形蛋白(vimentin)及基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)表达的变化;分别采用划痕实验和Matrigel基质胶小室法检测对A549细胞迁移及侵袭能力的影响;FCM法检测细胞凋亡的变化。随后,通过p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路抑制剂SB203580联合BMP-2(100μg/mL)作用于A549细胞,检测p38 MAPK信号通路阻断后对上述A549细胞EMT、迁移和侵袭能力及凋亡的影响。结果 :BMP-2呈浓度依赖性降低A549细胞中E-cad蛋白的表达,并促进间质标志物vimentin蛋白及MMP-2蛋白表达的增加;A549细胞在BMP-2(100μg/mL)刺激下划痕愈合率明显高于空白对照组(P<0.05),穿过小室膜的细胞数显著增多(P<0.05),细胞的早期凋亡率降低(P<0.05)。SB203580能部分抑制BMP-2诱导的A549细胞中E-cad表达的降低(P=0.039),以及vimentin和MMP-2蛋白表达的增高(P=0.023和P=0.040);BMP-2联合SB203580作用下A549细胞划痕愈合率较BMP-2单药组降低(P=0.029),穿过小室滤膜的细胞数较BMP-2单药组明显减少(P=0.009),细胞的早期凋亡率较BMP-2单药组增加(P=0.046)。结论 :BMP-2能够在体外促进肺腺癌A549细胞发生EMT,抑制细胞的早期凋亡,并促进细胞的迁移和侵袭,这一过程与p38MAPK信号通路的激活有关。

改良组织块法培养C57BL／6小鼠胰腺星状细胞

目的通过改良传统组织块法培养C57BL／6小鼠胰腺星状细胞（PSCs），建立一种简便易行、快速获得大量小鼠PSCs的培养方法。方法分离C57BL／6小鼠胰腺组织，经胎牛血清清洗后剪切成0．5—1mm’组织块，经贴壁培养4d取原代PSCs，并传代。采用油红0染色观察细胞内脂滴变化，采用细胞免疫法及蛋白质印迹法检测细胞α—SMA、Desmin表达。结果贴壁4d的原代PSCs多呈椭圆形或星形，胞质内大量脂滴，表达α-SMA及Desmin蛋白的细胞少；传代后细胞变大、伪足丰富，脂滴减少或消失，原代、传代PSCs的d—SMA蛋白相对表达量分别为0．653±0．071、2．290±0．055，传代细胞的表达显著高于原代细胞（P〈0．05），表达Desmin蛋白的细胞数量显著增加。结论改良组织块法可高产和高纯度地获得小鼠静息态和激活态两种状态的PSCs，可以满足体外研究的需要。

肺癌EGFR和EML4-ALK基因突变与临床病理特征的关系

目的探讨肺癌患者标本表皮生长因子受体(EGFR)和棘皮动物微管结合蛋白样4与间变性淋巴激酶融合基因(EML4-ALK)突变与临床病理特征的相关性。方法选取2016年8月至2018年7月间上海市同济大学附属东方医院收治的212例肺癌患者标本,包括腺癌165例和其他组织学类型47例,均采用荧光PCR法检测EGFR和EML4-ALK突变,对EML4-ALK突变阳性的标本行FISH融合基因检测及AB-PAS特殊染色,分析基因突变的特点及与临床病理特征的相关性。结果EGFR总突变率36. 8%(78例),女性高于男性,年龄<60岁者高于≥60岁者,腺癌高于非腺癌患者,与低分化腺癌相比,中、高分化腺癌EGFR突变率更高,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。EML4-ALK突变7例,总突变率为3. 3%(7例),年龄<60岁患者阳性率高于≥60岁患者,腺癌高于非腺癌(P <0. 05)。突变主要见于含有细胞内或细胞外黏液成分的腺癌患者。212例标本中,手术标本突变率41. 0%,活检小标本突变率29. 6%,细胞学样本突变率33. 3%,但三者之间差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论肺癌EGFR突变率高于EML4-ALK突变率,但两者在临床和病理特征上有一定相似性,女性、年龄较小和腺癌患者更常见。与低分化腺癌相比,中、高分化腺癌EGFR突变率更高,EML4-ALK突变患者一般含小灶细胞内或细胞外黏液成分,但送检标本类型对基因突变无较大影响。