不同毒力水貂阿留申病毒在猫肾细胞中的增殖特性及凋亡特性的比较研究

试验旨在对不同毒力水貂阿留申病毒(Aleutian mink disease virus,AMDV)在猫肾细胞(feline kidney cell,CRFK)中的增殖规律及其诱导细胞凋亡情况进行比较研究。将标准毒株AMDV-G及分离到的野毒株AMDVDL124、AMDV-DL125、AMDV-QD2、AMDV-QD3、AMDV-ZJ3接种CRFK细胞,应用间接免疫荧光、实时荧光定量PCR、TCID50测定技术研究病毒在细胞中的复制及表达情况,同时检测病毒诱导的细胞凋亡情况。间接免疫荧光结果显示,5株野毒株荧光着色趋势差异不大,均在感染后12h出现荧光,随感染时间延长荧光增多,AMDV-G荧光出现时间比野毒株晚,但病毒感染后72h几乎所有细胞均出现荧光;实时荧光定量PCR结果显示,基因组复制趋势大致相同,AMDV-DL125感染后3h复制开始,AMDV-G感染后24h复制才开始并呈快速增长趋势,但感染后72h均达到峰值。TCID_(50)检测结果表明,0~12h为病毒感染潜伏期,AMDV-G感染后60h达到峰值,野毒株均在感染后72h达到峰值,但是6株病毒均能在感染后48~72h维持较高的感染滴度,其后随细胞崩解而降低。SPSS 23.0统计软件分析凋亡检测结果显示,与对照组相比,野毒株感染细胞后2~12h诱导细胞凋亡差异显著(P<0.05),AMDV-G诱导细胞凋亡差异明显低于野毒株,但是诱导细胞凋亡时间较野毒株长,在感染后24h仍对细胞凋亡有较明显的诱导作用,但是各病毒诱导的细胞凋亡主要集中在2~12h。该结果为AMDV的培养、鉴定及致病机理研究提供一定参考。

细小病毒衣壳蛋白功能研究进展

细小病毒是目前为止发现的最小的单股DNA病毒,在自然界分布极广并与多种疾病相关。该病毒衣壳中主要包含三种蛋白:VP1、VP2、VP3,这些衣壳蛋白参与了病毒感染的整个过程。VP1通过核定位信号(NLS)介导病毒感染性,协助病毒完成核内定位。VP2经"反受体"与细胞受体相互作用促进病毒进一步内化,与此同时VP1与VP2 N’末端共同作用完成核转运。裂解蛋白VP3仅存在于细小病毒科少数成员中,其功能未被完全确定,猜测可能是衣壳蛋白骨架。该病毒对外界理化因素有极强的抵抗力,如酸或热处理,甚至能逃避模式识别受体(PRRS)识别。通过对细小病毒感染过程中衣壳蛋白的作用及其在疾病治疗中的应用进行系统的总结及讨论,以期为相关科研工作者提供参考。

拮抗金黄色葡萄球菌的细菌分离及其作用机制

细菌耐药性问题越来越严重,迫切需要研发新型抗菌药物。而拮抗性细菌可以产生抗菌活性物质,在对抗耐药性细菌方面具有潜力。本研究以耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌USA300为指示菌,从污水中分离并纯化得到1株拮抗性菌株H223,通过16S rRNA测序结果显示属于芽孢杆菌属,H223对指示菌USA300表现出较高的抑菌活性,并对葡萄球菌属均表现出不同程度的抑菌效果。对H223发挥抑菌活性物质进行研究,确认其存在于培养上清中。在液体培养基中静置培养36 h抑菌活性最强,最后结合超滤管和蛋白酶K处理判断H223培养上清中的抑菌活性物质为非蛋白类小分子。综上所述,该研究获得的拮抗性菌株H223培养物具有显著拮抗耐药性金黄色葡萄球菌作用,为新型抑菌成分的进一步研究和应用奠定基础。

浅绿色气球菌噬菌体vB_AviM_AVP编码蛋白的表达纯化和功能分析

根据已报道的全球首个浅绿色气球菌噬菌体vB_AviM_AVP的基因组,通过比对分析对各个开放阅读框功能的预测,从中选取以下除裂解酶AVPL外可能具有裂解活性的蛋白基因ORF86、ORF90、ORF94、ORF98进行原核表达与纯化。试验表明,LysORF86、LysORF94和LysORF90可成功表达,但是仅在酶谱试验中对不同细菌表现出了活性;直接平板涂布滴板试验、利用高碘酸以及蛋白酶K处理菌体试验及混合蛋白活性检测试验中,均未表现出活性。本研究为全球首个浅绿色气球菌噬菌体vB_AviM_AVP的进一步研究奠定基础。