2011～2013年杭州市手足口病病原谱流行特征及柯萨奇病毒A16型VP1区基因变异研究

目的了解杭州市手足口病病原谱流行特征及柯萨奇病毒A16型（CA16）分离株的VP1基因变迁规律。方法采集杭州市2011-2013年手足口病患者的2 197份临床标本,用通用引物进行肠道病毒实时荧光定量RT-PCR检测,对阳性标本进行分型,对部分CA16感染阳性重症患者标本测定VP1基因序列并进行同源性比对和系统进化树分析。结果杭州地区肠道病毒通用型核酸检出率为56.0%（1 317/2 197）,肠道病毒71（EV71）、CA16和其他肠道病毒的检出率分别为24.1%（530/2 197）、13.9%（306/2 197）和22.8%（501/2 197）。在咽拭子和粪便标本中EV71检出率均最高,分别为23.9%（301/1 258）和23.6%（148/627）,而在疱疹液标本中其他型肠道病毒检出率最高,为32.6%（76/233）,脑脊液标本中无CA16检出。咽拭子标本和粪便标本在发病初期的检出率较高,发病后第5天和第6天后检出率低于发病初期检出率,而脑脊液和疱疹液不同病程阶段的检出率无统计学意义。9株CA16分离株VP1基因的核苷酸同源性为90.8%-99.7%,分属于B1b亚型和B1a亚型。结论 2011-2013年杭州地区手足口病患者主要病原体以EV71和CA16为主,样本类型和采样时间是影响肠道病毒检出率的重要原因。杭州地区CA16毒株VP1区基因的变异程度较低,需进一步加强开展手足口病的监测。

细胞抑制性受体PD-1及LAG-3在慢性乙型肝炎患者CD4^+T细胞表面的表达及其意义

目的探讨慢性乙型肝炎患者(CHB)外周血CD4^+T淋巴细胞抑制性受体程序性死亡分子-1(PD-1)及淋巴细胞活化基因-3(LAG-3)的表达水平及其与疗效的关系。方法采用流式细胞术分别检测71例CHB初治患者和40例健康人外周血CD4^+T淋巴细胞PD-1及LAG-3的表达水平,同时在治疗前(T1)、治疗后24周(T2)及治疗后52周(T3)随访接受干扰素抗病毒治疗的CHB患者17例。采用实时荧光定量PCR技术检测血清HBV DNA水平,化学发光微粒子免疫分析技术定量测定血清HBV标志物,速率法检测ALT水平。结果与健康对照组相比,71例CHB患者CD4^+T细胞可检测到高水平PD-1及LAG-3表达,两组之间差异有统计学意义(P<0.01);HBeAg(^+)组PD-1及LAG-3表达水平明显高于HBeAg(-)组,两者间差异有统计学意义(P<0.05);有效抗病毒治疗患者PD-1及LAG-3水平随着DNA及ALT水平的下降而明显下降,与治疗前相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论有效的抗病毒治疗可促使CHB外周血CD4^+T淋巴细胞功能恢复,可能为CHB的治疗及疗效监测提供了依据。

2009-2014年浙江省哨点医院急性腹泻患者病原监测研究

目的：分析浙江省门急诊急性腹泻患者的病原构成特征。方法2009年1月至2014年12月，选择杭州、湖州、宁波、衢州以及绍兴市的7家医院作为监测哨点，以其中的内科、儿科和感染科肠道门诊以及急诊的急性腹泻患者为研究对象，调查并记录患者个人基本信息、主要症状与体征等资料，采集患者的粪便样本（5g）进行8种细菌检测（包括霍乱弧菌、志贺菌、非伤寒沙门菌、致泻性大肠埃希菌、副溶血弧菌、气单胞菌、小肠结肠炎耶尔森菌、类志贺邻单胞菌）和5种病毒（包括轮状病毒、诺如病毒、扎如病毒、星状病毒和肠道腺病毒）检测。结果2009—2014年，共采集并检测9364例急性腹泻患者的粪便标本，腹泻病原阳性率为37.38%（3500例）；单一细菌、单一病毒和多重感染总阳性率分别为13.14%（1230例）、20.75%（1943例）和3.49%（327例）。单一细菌感染者中，副溶血弧菌阳性率较高，为5.96%（558例），其次为致泻性大肠埃希菌，为3.86%（361例）；单一病毒感染者中，诺如病毒和轮状病毒阳性率均较高，分别为10.73%（1005例）和8.35%（782例）。〈15岁患者以单一病毒感染者为主，阳性率为32.69%（1014例），≥15岁患者以单一细菌感染者为主，阳性率为16.86%（1056例）。单一细菌感染者中以25～34岁者为主，阳性率为18.62%（302例）；单一病毒感染者中以1～4岁者为主，阳性率为41.12%（435例）；多重感染者中以1～4岁者为主，阳性率为7.37%（78例）。7—9月感染单一细菌者比例较高，12月至次年3月感染单一病毒者比例较高。2009—2014年，门急诊急性腹泻患者病原谱变化较小，均以轮状病毒[22.34%（782/3500）]、诺如病毒[28.71%（1005/3500）]、副溶血弧菌[15.92%（558/3500）]、致泻大肠埃希菌[10.31%（361/3500）]为主。结论浙江省2009—2014年门急诊急性腹泻患者常见病原均有检出，不同年龄患者病原谱构成存在较大差异，季节性流行规律明显，不同年份间主要病原构成差异较小。

浙江省腹泻患者致泻性大肠埃希菌血清型分布及其鉴定效率的评价

目的 了解浙江省致泻性大肠埃希菌（DEC）血清型分布并探讨其血清学鉴定分类方法的鉴定效率。方法 对2009年7月至2013年6月浙江省腹泻症候群病原谱监测网络菌株库中的696株DEC菌株（通过毒力基因鉴定）开展血清学凝集试验，比较毒力基因和血清学鉴定分类的结果。结果 696株DEC中288株（41.4%）能明确O抗原型别，分属于35种O血清群。171株（24.6%）H血清凝集，分属于21种H型。肠集聚性大肠埃希菌（EAEC）、产肠毒素性大肠埃希菌（ETEC）、肠致病性大肠埃希菌（EPEC）和肠出血性大肠埃希菌（EHEC）凝集率分别为31.9%（130/408）、70.6%（127/180）、31.5%（29/92）和14.3%（2/14），分属于30、18和15种O血清群，1株EHEC为O157∶H7。EAEC和EPEC血清群相对较多样化，而ETEC则相对集中，不同类型DEC可具有同一血清群/型。根据血清学结果可分类的75株DEC中，42株毒力基因和血清学分类结果一致，33株不一致。结论 浙江省DEC血清群/型种类多样，单纯采用血清学筛查可造成极大的漏检或误分，建议采用毒力基因鉴定分类。