紫杉醇诱导人肺腺癌多药耐药细胞系的建立及DNA polβ、mdr1、mrp1、GST-πl、rp和topo Ⅱ基因的表达

目的体外建立人肺腺癌细胞多药耐药细胞系,观察其生物学特性并探讨其细胞内DNA polβ和多药耐药基因mdr1、mrp1、GST-πl、rp和topo Ⅱ的表达及意义。方法以紫杉醇为诱导药,采用间歇逐步增加剂量法建立人肺腺癌多药耐药细胞系A549/TXL20;MTT法检测A549/TXL20对紫杉醇、顺铂、长春新碱、5-氟尿嘧啶和丝裂霉素的耐药指数(RF);细胞克隆形成法测定A549/TXL20对紫杉醇的敏感性;高效液相色谱测定细胞内紫杉醇的浓度;RT-PCR法测定人肺腺癌多药耐药细胞系A549/TXL20中DNA polβ、mdr1、GST-π、mrp1l、rp和topo Ⅱ的基因表达。结果①A549/TXL20形态不规则,较亲本细胞略小,核/浆比增加,倍增时间没有明显变化;②A549/TXL20对紫杉醇的RF为19.3,对顺铂的RF为67.4,对长春新碱、5-氟尿嘧啶、丝裂霉素和顺铂等抗癌药物有不同程度的耐药性;③A549/TXL20对紫杉醇的敏感性降低,其紫杉醇的含量较亲本细胞下降;④A549/TXL20细胞中DNA polβ、mdr1、GST-π、mrp1l、rp的基因表达量分别较A549细胞中的表达量明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论建立了相对稳定的人肺腺癌多药耐药细胞系A549/TXL20,其耐药机制可能与mdr1、GST-π、mrp1l、rp和DNA polβ基因的高表达有关。

海嘧啶对肿瘤细胞膜钠泵活性的影响

目的 :观察海嘧啶对小白鼠实体型肿瘤 (S180 )和腹水型肿瘤 (EAC、H2 2 )细胞膜钠泵活性的影响。方法 :荷瘤小鼠分为治疗组和对照组 ,分别测定各组瘤细胞膜钠泵活性。结果 :海嘧啶对小鼠S180 、EAC及H2 2 肿瘤细胞膜钠泵活性有明显的抑制作用。结论 :海嘧啶抗肿瘤的药理机制与其能够抑制肿瘤细胞膜钠泵活性有关。

海嘧啶对小鼠S180和EAC肿瘤细胞P53蛋白表达的影响

目的 :观察海嘧啶对小白鼠S180肿瘤和EAC肿瘤细胞P5 3蛋白表达的影响。方法 :将含有传代后的小鼠S180肿瘤细胞和EAC肿瘤细胞的培养瓶各分为A ,B1,B2 ,B3 ,B45组 ,B1～B4组分别加入海嘧啶 ,使培养液中药物的终浓度分别为 5 0mg/L、10 0mg/L、2 0 0mg/L、4 0 0mg/L ,A组加入等体积的培养液 (对照组 )。用Westernblot法测定瘤细胞P5 3蛋白表达。结果 :S180肿瘤细胞和EAC肿瘤细胞P5 3蛋白表达率分别是 10 0 %和 90 % ;海嘧啶 10 0～4 0 0mg/L时能抑制肿瘤细胞P5 3蛋白的表达 ,与对照组比较 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。结论 :海嘧啶抗肿瘤的药理机制与其能够抑制肿瘤细胞突变型P5 3蛋白表达有关。

川芎嗪对抗原诱发致敏豚鼠气管平滑肌环的舒张作用

目的:观察川芎嗪对过敏原诱发的哮喘豚鼠离体气管平滑肌环收缩的影响及其相关机制。方法:采用卵蛋白致敏法建立豚鼠哮喘动物模型,每只豚鼠制备5～7个气管平滑肌环,悬挂于恒温浴槽中,并将其与力位移换能器相连来纪录气管环张力的变化,所有标本分为正常KH液和无钙KH液2大组。正常KH液组又分为卵蛋白组、10mmol/L川芎嗪+卵蛋白组、30mmol/L川芎嗪+卵蛋白组、100mmol/L川芎嗪+卵蛋白组、300mmol/L川芎嗪+卵蛋白组、thapsigargin(TSG)+卵蛋白组、TSG+川芎嗪(100mmol/L)+卵蛋白组。无钙KH液组分为卵蛋白组和川芎嗪(100mmol/L)+卵蛋白组。结果:①卵蛋白组平滑肌环收缩产生的张力为(59.7±8.5)×10-6N,分别预先加入30mmol/L、100mmol/L、300mmol/L的川芎嗪20min后,再加入卵蛋白,平滑肌环产生的张力分别降低至(44.1±5.5)×10-6N、(20.7±20.4)×10-6N、(10.0±1.1)×10-6N(P均<0.05),10mmol/L的川芎嗪对卵蛋白的作用无明显影响(P>0.05);②去除溶液中的Ca2+后,再加入卵蛋白,平滑肌环收缩产生的张力为(10.5±1.9)×10-6N,预先加入100mmol/L的川芎嗪后,卵蛋白诱导产生的平滑肌环的收缩力无明显改变(P>0.05);③预先加入TSG(10mmol/L)40min后,再加入卵蛋白,平滑肌环收缩产生的张力为(27.3±3.4)×10-6N,分别预先加入TSG和100mmol/L的川芎嗪后,再加入卵蛋白诱导,平滑肌环的收缩力减少至(6.5±1.1)×10-6N(P<0.05)。结论:①川芎嗪可能通过抑制细胞膜上的钙通道来抑制抗原引起的哮喘豚鼠离体气管平滑肌的收缩作用。②抗原可能通过细胞外的Ca2+内流和细胞内肌浆网对Ca2+的释放来促进哮喘豚鼠离体气管平滑肌的收缩。

人肺腺癌紫杉醇耐药细胞系DNA polβ的表达

目的建立人肺腺癌紫杉醇多药耐药细胞系,测定耐药细胞系DNA聚合酶β(DNA polβ)基因和蛋白表达。方法以紫杉醇为诱导药,人肺腺癌细胞系(A 549)为诱导对象,逐步增加紫杉醇药物浓度进行诱导,建立耐紫杉醇的多药耐药细胞系A 549/TXL 20。采用M TT法检测A 549/TXL 20耐药指数,同时对顺铂、长春新碱、5氟脲嘧啶、丝裂霉素和羟基尿素五种药物进行交叉耐药检测。RC-PCR法和W estern b lotting法分别测定细胞内DNA polβ表达水平。结果A 549/TXL 20对紫杉醇及其他五种抗癌药物均有不同程度的耐药性。A 549/TXL 20细胞中DNA polβmRNA及蛋白的表达水平均高于A 549细胞(P<0.05)。结论A 549/TXL 20具有多药耐药表型,耐药性产生可能与细胞内DNA polβ表达增高有关。

海嘧啶对肺腺癌多药耐药细胞A549/T及其亲代细胞的作用观察和机制的初步研究

目的：探讨海嘧啶对肺腺癌多药耐药细胞A549／T及其亲代细胞的生长抑制作用及其抗肿瘤作用机制。方法：应用（mincrocuhuretetrazolium assay，MTT）比色法和光镜观察等方法，观察A549／T及其亲代细胞在海嘧啶作用后，细胞生长曲线、生长抑制率及形态学等方面的变化。结果：MTT比色结果表明，海嘧啶对A549／T细胞及其亲代细胞具有明显的生长抑制作用，并且在10～100μg／ml剂量范围内存在剂量及时间依赖关系。A549／T细胞在海嘧啶作用12～24h较亲代细胞敏感（P〈0．01），在48h开始表现出其药物耐受性（P〈0．01），在72h则与亲代细胞间无显著性差异（P〉0．05）；光镜观察结果发现，A549／T细胞及其亲代细胞的胞质内空泡均明显增多，出现细胞核固缩，或碎裂形成大小不等的核碎片，最后可见细胞死亡后的残骸。结论：海嘧啶对肺腺癌多药物耐药细胞及其亲代细胞均具有明显的生长抑制作用，并可能通过透导肿瘤细胞坏死，从而发挥其细胞毒作用。

海嘧啶对小鼠肝脏脂质过氧化反应的影响

目的观察海嘧啶对荷瘤小鼠肝脏脂质过氧化反应的影响。方法S180(骨肉瘤)及EAC(艾氏腹水癌)荷瘤小鼠随机分为三组:正常组、阴性对照组和海嘧啶治疗组。海嘧啶治疗组:小鼠接瘤后24h后腹腔注射药物,50mg/kg,连续给药7d。阴性对照组给相同体积的生理盐水。分别测定肝组织的LPO、GSH-PX和SOD的含量。结果荷瘤小鼠肝中LPO含量升高,而GSH-PX和SOD均含量降低;海嘧啶治疗组荷瘤小鼠肝中GSH-PX和SOD的活性升高,LPO的含量降低。结论海嘧啶的抗肿瘤机制可能与它能提高抗氧化酶的活性,清除过多自由基有一定关系。

海嘧啶对小白鼠S_(180)、EAC和H_(22)肿瘤细胞膜钠泵活性的影响

目的观察海嘧啶对小白鼠实体型肿瘤(S180)和腹水型肿瘤(EAC,H22)细胞膜钠泵活性的影响。方法荷瘤小鼠分为治疗组和对照组,分别测定各组瘤细胞膜钠泵活性。结果海嘧啶对小鼠S180、EAC及H22肿瘤细胞膜钠泵活性有明显的抑制作用。结论海嘧啶抗肿瘤的药理机制与其能够抑制肿瘤细胞膜钠泵活性有关。

西兰花中异硫氰酸盐诱导人肝癌细胞HepG-2凋亡作用及其机制的研究

目的:探讨西兰花中异硫氰酸盐(isothiocyanates,ITCS)诱导人肝癌细胞HepG-2凋亡过程中的作用及其可能机制。方法:不同浓度ITCS处理人肝癌细胞HepG-2,应用MTT法检测ITCS对HepG-2细胞增殖的影响;流式细胞仪检测活性氧、线粒体膜电位(Δψm)和细胞亚二倍体凋亡峰变化情况。结果:ITCS可明显抑制HepG-2细胞增殖;15,30,60,120,240μg.mL-1的ITCS作用于HepG-2细胞24 h后,细胞内活性氧分别为(23.1±1.8)%,(53.3±3.3)%,(57.9±2.0)%,(79.9±3.4)%,(93.4±2.6)%;Δψm分别为(94.8±5.5)%,(91.8±5.4)%,(66.0±5.6)%,(65.5±6.6)%,(44.3±2.7)%;60,120,240μg.mL-1的ITCS作用于HepG-2细胞48 h后可见细胞凋亡率分别为(16.6±2.8)%,(21.9±4.4)%,(70.2±5.3)%。结论:ITCS能够通过刺激HepG-2细胞内活性氧的产生,损伤线粒体,使其膜电位下降,引起HepG-2细胞凋亡。

西兰花中萝卜硫素提取、分离与抗癌活性研究

对萝卜硫素[1-异硫氰酸-4-甲磺酰基丁烷]从西兰花中的分离、提取及其他制备方法进行了详细地介绍,同时介绍了国内外对其抗癌活性的研究,显示了诱人的研究开发前景,为开发和利用西兰花奠定了基础.

西兰花中葡萄糖异硫氰酸盐诱导HepG2细胞凋亡

目的:研究西兰花中葡萄糖异硫氰酸盐(glucosinolates,GS)诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用及其机制。方法:不同浓度GS处理肝癌HepG2细胞,通过SRB法、细胞形态学观察、流式细胞仪和激光共聚焦显微镜观察GS对HepG2细胞的生长抑制作用及其对细胞凋亡的影响。结果:GS可抑制HepG2细胞的增殖,其GI50为318.4μg·mL-1;300μg·mL-1的GS作用HepG2细胞24h后,细胞出现早期凋亡的形态;300、600μg·mL-1的GS对HepG2细胞凋亡率分别为(17.22±3.45)%和(25.50±5.72)%;100、200、300μg·mL-1的GS作用于HepG2细胞24h后,细胞内的Ca2+浓度显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论:GS能够诱导人肝癌细胞系HepG2细胞凋亡,其机制与GS升高细胞内Ca2+浓度有关。

西兰花中ITCS诱导SGC-7901细胞凋亡作用机制

研究西兰花中异硫氰酸盐(isothiocyanates,ITCS)诱导人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡的作用及其机制.应用MTT法检测ITCS对SGC-7901细胞增殖的影响;流式细胞仪检测活性氧、线粒体膜电位(Δψm)和细胞凋亡率.实验证明ITCS可明显抑制SGC-7901细胞增殖;不同质量浓度的ITCS作用于SGC-7901细胞24 h后,细胞内活性氧含量随给药剂量的增加而升高、线粒体膜电位依次降低.60、120、240μg/mL的ITCS作用于SGC-7901细胞48 h后可见细胞凋亡率分别为9.1%、20.1%和55.4%.ITCS可通过刺激SGC-7901细胞内活性氧的产生,损伤肿瘤细胞线粒体,使其膜电位下降最终引起SGC-7901细胞凋亡.

西兰花中葡萄糖异硫氰酸盐对S_(180)小鼠抗氧化功能的影响

目的:研究西兰花中葡萄糖异硫氰酸盐(glucosinolates,GS)对S180小鼠抗氧化功能的影响。方法:以S180实体瘤小鼠为模型,考察GS对S180小鼠的抑瘤率、免疫脏器指数的影响;运用试剂盒测定S180小鼠红细胞中SOD和CAT,血清中GSH及全血中红细胞MDA含量。结果:GS可显著抑制S180实体瘤的生长(P<0.01),显著升高S180小鼠胸腺指数和脾指数(P<0.05,P<0.01);可显著提高荷瘤小鼠红细胞中SOD、CAT活力(P<0.05,P<0.01),显著地提高血清中GSH的活力(P<0.01),同时显著降低全血中红细胞MDA含量(P<0.05,P<0.01)。结论:GS对S180小鼠实体瘤的生长具有显著的抑制作用,其作用机制可能与提高荷瘤机体的抗氧化功能有关。

人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP的建立及其生物学特征

目的:建立人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP,探讨其生物学特征.方法:采用顺铂(cDDP)中等浓度、间歇作用方法历时9mo建立耐药细胞系Ec9706/cDDP,采用MTT法测定其对cDDP的耐药指数,观察冻存、撤药对耐药性的影响,比较耐药与亲本细胞生长曲线、群体倍增时间及贴壁率的不同,流式细胞仪测细胞周期,软琼脂实验测细胞的恶性增殖能力,罗丹明实验测其对药物的摄入、排出能力.结果:人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP的耐药指数为15.7,冻存对耐药性影响不大,撤药培养可使耐药性降低,耐药细胞群体倍增时间延长(29.79±0.48hvs25.79±0.45h,P<0.05),生长缓慢,G0/G1、S期细胞比例增加(63.18%±5.21%vs52.81%±4.36%,P<0.05;36.49%±3.93%vs26.70%±2.62%,P<0.05),G2期细胞减少(0.33%±0.02%vs20.49%±3.71%,P<0.05),克隆形成率明显高于亲本细胞(69%vs24%,P<0.05),对罗丹明的摄入减少,排出增多.结论:成功建立了人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP,且耐药性较稳定.

人食管癌顺铂耐药细胞系的建立及耐药相关基因的筛选

目的:建立人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP,并初步探讨其耐药机制。方法:采用顺铂(cDDP)中等浓度、间歇冲击作用方法历时9mon诱导人食管癌细胞系Ec9706,建立相应耐药细胞系,采用MTT法测定耐药细胞系对cD-DP的耐药指数,用RT-PCR半定量方法测定亲本细胞及耐药细胞耐药相关基因如DNA聚合酶(polβ)、多药耐药相关基因(MRP)、谷胱甘肽转移酶(GST)、二氢叶酸还原酶(DHFR)、拓扑异构酶(TPO)和多药耐药基因(mdr1)等基因的mRNA表达水平。结果:人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP的耐药指数为15.7,该细胞系中polβ、DHFR、GST基因mRNA的表达比亲本细胞显著增加,TPO的表达降低,而mdr1、MRP表达的增加无显著统计学意义。结论:成功建立了人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP,其耐药性的产生与polβ、GST、DHFR、TPO等基因的异常表达有关,而与mdr1、MRP表达的关系不密切。

卵巢癌组织中DNA聚合酶β检测

目的观察不同演进过程卵巢组织中DNA聚合酶β(po1β)mRNA的表达。方法采用含有内对照的半定量RT-PCR方法,检测41例卵巢癌患者(其中浆液性囊腺癌21例,黏液性囊腺癌13例,子宫内膜样癌7例)及正常卵巢组织31例pol βmRNA的表达。结果浆液性囊腺癌、黏液性囊腺癌、子宫内膜样癌pol βmRNA含量差异无显著性,但均高于正常卵巢组织中的表达水平(均P<0.05)。组织学分级中2级、3级DNApol βmRNA的相对表达量明显高于1级(均P<0.05),临床分期FIGOⅢ期、Ⅳ期DNA pol βmRNA的相对表达量明显高于Ⅰ期、Ⅱ期(均P<0.05)。结论在卵巢癌组织中存在着po1β的高表达,肿瘤分化程度越低以及临床分期越高其表达量越高。

靶向阻断LRP提高肺腺癌细胞对紫杉醇的敏感性

目的利用小干扰RNA(siRNA)技术沉默肺腺癌细胞肺耐药相关蛋白基因(LRP),探讨其对肺腺癌紫杉醇耐药株(A549/TXL20)紫杉醇(TXL)敏感性的影响。方法逐步增加药物浓度法建立A549紫杉醇耐药细胞株(A549/TXL20),用小干扰RNA技术沉默LRP在A549/TXL20细胞中的表达,以MTT法检测紫杉醇对A549/TXL20细胞的半数抑制浓度(IC50);以q PCR检测细胞中LRP mRNA的表达,Western blot检测细胞中LRP蛋白的水平,裸鼠腋窝皮下注射转染后的A549/TXL20细胞,建立裸鼠移植瘤模型,观察LRP靶向siRNA对人肺腺癌耐药细胞株A549/TXL20移植瘤耐药的影响。结果肺腺癌紫杉醇耐药株(A549/TXL20)对紫杉醇的敏感性明显增强(P<0.01),A549/TXL20细胞中LRP mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.01);siRNA沉默A549/TXL20细胞LRP基因后,与空白组和空质粒组比较,LRP mRNA及蛋白表达均被抑制(P<0.01);小干扰RNA可提高荷瘤裸鼠对紫杉醇的敏感性。结论 siRNA可有效沉默A549/TXL20肺腺癌耐药细胞株LRP基因的表达,提高耐药的肺腺癌细胞对紫杉醇的敏感性。

二种模拟人类抑郁症大鼠模型的睡眠特征比较

目的:比较2种模拟人类抑郁症动物模型的行为改变和睡眠特征。方法:成年雄性SD大鼠34只,随机分为正常对照组(n＝6),重复弱束缚应激(RMRS)＋生理盐水(NS)注射组(n＝7),RMRS＋氯丙咪嗪(CLI)注射组(n＝7),双侧嗅球切除(OB)＋NS注射组(n＝7)和 OB＋CLI注射组(n＝7)。分别进行行为和睡眠特征的观察。结果;①RMRS的大鼠单个快动眼睡眠(REMS)平均持续时间比正常对照组明显延长(P＜0．05)。其总睡眠量、REMS时间总量、慢波睡眠等与对照组比较差异无显著性,但在行为上有激惹、摄食少、体重下降、活动减少等改变;②OB大鼠的REMS时间总量及发生次数、单个REMS的平均持续时间比对照组均显著增加(P＜0．05),同时大鼠表现出易怒、超敏等行为异常;③2种大鼠模型连续肌内注射抗抑郁剂氯丙咪嗪,可有效地抑制动物的某些行为异常和睡眠改变。结论:RMRS模型在行为及睡眠特征方面较好地模拟了人类抑郁症。

HBV相关性肾炎患者临床与病理特点分析

目的:分析HBV相关性肾炎(肾组织内可检测到HBV抗原沉积)的临床和病理特点,为其诊断、治疗提供依据。方法:53例血清HBV标记均阳性的肾小球肾炎患者,对肾组织HBV标记物阳性和阴性患者的临床、病理和实验室检查资料进行对照分析。结果:53例血清HBV标记物阳性患者中HBV相关性肾炎的发生率为43.4%(23/53);HBV相关性肾炎临床上主要表现为肾病综合征(14/23,60.87%),主要病理类型为膜性肾病(11/23,47.80%)和膜增生性肾小球肾炎(5/23,21.7%);和非HBV相关性肾炎组相比:肌酐清除率降低((128.64±32.32)μmol/Lvs(88.57±12.25)μmol/L,P<0.05),24h尿蛋白排泄率升高((3.02±0.95)g/24hvs(1.84±0.68)g/24h,P<0.05),肾小管上皮细胞中HBcAg的阳性率较高。结论:HBV相关性肾炎患者和非HBV相关性肾炎患者在临床表现、病理类型和实验室检查方面有不同;对血清HBV标记物阳性的肾炎患者治疗前须行肾穿刺病理检查,必要时进行抗病毒治疗。

大鼠杏仁中央核内微量注射催乳素释放肽抑制摄食

目的 :观察在 2 4h禁食大鼠杏仁中央核 (centralnucleusofamygdala ,CeA)内注射催乳素释放肽 (Pro lactin releasingPeptide ,PrRP)所导致的摄食、体重以及摄食相关行为的改变。方法 :大鼠CeA内注射PrRP或生理盐水后 ,用行为学实验的方法 ,观察大鼠摄食、体重以及摄食相关行为的变化。结果 :与生理盐水组相比 ,给 2 4h禁食大鼠CeA内注射PrRP后可减少摄食。结论 :CeA是PrRP发挥摄食调节作用的一个部位。