黄学宽教授瘀血论治新解与临证经验

中医诊断学的基本特征之一是辨证治疗,在中医诊断的整个过程,是在整体观念指导下进行的,其辨别的内容除了辨病、辨证、辨症之外,还要考虑个体的差异、疾病发生发展的机制以及病、证的动态变化。缺血性脑卒中(又名缺血性脑中风)是最常见的临床危重疾病之一,属中医“中风”范畴,不同时代的医家对其病因和发病机制有不同的看法。经过梳理发现,大多数现代学者对脑卒中的致病因素概括为风、痰、虚、瘀、气、火,诊断标准也逐步趋于统一。基于缺血性脑卒中病,研究和理解中医诊断思维的规律性认识,对未来临床中诊断辨证非常有益。

肾舒复健汤对慢性肾衰竭大鼠PTEN/PI3K/AKT信号通路的影响

目的 基于网络药理学结合动物体内实验探讨肾舒复健汤(黄芪、白术、生地黄等)治疗慢性肾衰竭(CRF)的作用机制。方法 (1)通过TCMSP数据库检索并筛选肾舒复健汤的活性成分,通过Swiss数据库筛选其潜在作用靶点;通过DisGeNET、GeneCards数据库检索CRF疾病相关靶点;通过Venn平台对活性成分潜在作用靶点与CRF疾病相关靶点取交集,获得肾舒复健汤治疗CRF的关键靶点(共同靶点);采用Cytoscape3.7.2软件构建肾舒复健汤治疗CRF的“活性成分-关键靶点”网络,分析核心活性成分;将共同靶点导入STRING数据库,构建蛋白互作(PPI)网络,筛选核心靶点;将共同靶点导入DAVID数据库进行GO功能及KEGG通路富集分析。(2)将大鼠随机分为正常组、模型组、尿毒清组(5 g·kg^(-1))、肾舒复健汤组(11 g·kg^(-1)),每组8只;采用饲喂0.5%腺嘌呤饲料以建立CRF大鼠模型,连续造模21 d;模型复制成功后开始灌胃给药,每日1次,持续干预28 d。检测大鼠血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)及24 h尿蛋白(24 h U-pro)水平;采用HE染色法及MASSON染色法检测大鼠肾脏组织病理变化,计算胶原容积分数(CVF);免疫组化法检测肾脏组织中PTEN、PI3K、p-AKT蛋白表达。结果 (1)网络药理学预测得到肾舒复健汤治疗CRF的活性成分140个,关键靶点(共同靶点)199个,核心活性化合物包括金合欢素、木犀草素、槲皮素等;核心靶点包括蛋白激酶B(AKT1)、肿瘤蛋白53(TP53)、信号转导及转录激活因子3(STAT3)等;GO功能主要与缺氧反应、血管生成正向调节、蛋白质磷酸化正调节等生物过程相关;关键通路主要涉及癌症途径、PI3K/AKT信号通路、Ras信号通路等;调控PTEN/PI3K/AKT信号通路可能是肾舒复健汤治疗CRF的重要作用机制之一。(2)体内试验显示,与正常组比较,模型组大鼠的血清SCr、BUN及24 h U-pro水平显著升高(P<0.01);肾脏组织病理改变明显,可见大量蓝色胶原纤维沉积,CFV明显升高(P<0.01);大鼠肾组织中PTEN蛋白表达水平显著降低(P<0.01),PI3K、p-AKT蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠的血清SCr、BUN及24 h U-pro水平显著降低(P<0.05,P<0.01);肾脏组织病理损伤明显减轻,纤维沉积面积明显减少,CFV明显降低(P<0.05,P<0.01);大鼠肾组织中的PTEN蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),PI3K、p-AKT蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论 肾舒复健汤能够明显改善CRF大鼠的肾功能,有效改善肾脏组织病理损伤及纤维化,可能与其调节PTEN/PI3K/AKT信号通路密切相关。

三七总皂苷对慢性肾衰竭大鼠AngⅡ/AT1R/ERK1/2信号通路的影响

目的研究三七总皂苷(PNS)对腺嘌呤诱导的慢性肾衰竭(CRF)大鼠AngⅡ/AT1R/ERK1/2信号通路的影响,探讨其延缓慢性肾衰竭进展的作用机制。方法将65只雄性SD大鼠随机分为正常组10只、造模组55只,正常组常规饲养,造模组采用250 mg·kg^(-1)·d^(-1)腺嘌呤混悬液连续灌胃28 d复制CRF大鼠模型。将造模成功大鼠随机分为模型组、贝那普利组(10 mg·kg^(-1))及PNS低、中、高(40、80、160 mg·kg^(-1))剂量组,灌胃给药,每日1次,连续28 d。检测大鼠24 h尿蛋白(24 h U-pro)及血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)的含量;采用HE染色法观察肾组织病理形态,Masson染色法观察肾间质纤维化程度;采用ELISA法检测血清及肾组织匀浆中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血清中胱抑素C(Cys-C)的含量;采用Western Blot法分析肾组织中血管紧张素Ⅱ受体Ⅰ型(AT1R)、细胞外调节激酶(ERK1/2)、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白表达情况;Real-time PCR法检测肾组织中AngⅡ、AT1R、结缔组织生长因子(CTGF)mRNA的表达;免疫组化法检测肾组织中AT1R蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠的24 h U-pro、Scr、BUN、Cys-C水平显著升高(P<0.01),血清、肾组织匀浆中的AngⅡ含量明显增加(P<0.01),肾组织中的AngⅡ、AT1R、CTGF mRNA表达均明显上调(P<0.01),AT1R、p-ERK1/2蛋白表达均明显上调(P<0.01)。与模型组比较,给药组大鼠的Scr、BUN、24 h U-pro及Cys-C水平均明显降低(P<0.05,P<0.01),血清、肾组织中的AngⅡ含量均明显降低(P<0.05,P<0.01),肾组织中的AngⅡ、AT1R、CTGF mRNA表达均明显下调(P<0.05,P<0.01),AT1R、p-ERK1/2蛋白表达均明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论三七总皂苷可改善CRF模型大鼠的肾功能和肾脏的病理学改变,其机制可能与调控AngⅡ/AT1R/ERK1/2信号通路有关。

刘祖发教授运用柴胡加龙骨牡蛎汤的临床经验

柴胡加龙骨牡蛎汤出自《伤寒论》,老师遵其意、守其方,取得了良好的临床疗效。文章分别择其治疗重症肌无力、肠易激综合症、体位性低血压、帕金森病4例治验,阐述了老师应用柴胡加龙骨牡蛎汤的经验,并进行了理论探讨。

水蛭、三七及其配伍对慢性肾衰竭大鼠肾纤维化作用机制比较

目的:观察水蛭-三七单味药与药对改善慢性肾衰竭(CRF)大鼠肾脏病理形态及对蛋白磷酸酶2A(PP2A)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的影响。方法:将55只雄性SD大鼠随机分为正常组11只、造模组44只。正常组常规饲养,造模组进行0.25 g·kg^(-1)·d^(-1)腺嘌呤连续灌胃28 d复制CRF模型。将造模成功后的大鼠随机分为模型组、水蛭组(3 g·kg^(-1)·d^(-1))、三七组(3 g·kg^(-1)·d^(-1))与水蛭-三七组(3 g·kg^(-1)·d^(-1)),每组9只,正常组和模型组以等体积生理盐水灌胃,连续30 d。实验结束后,测定各组大鼠血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)含量;苏木素-伊红(HE)染色、马松(Masson)染色和电镜观察肾脏病理形态学改变;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肾组织PP2A、AMPK、mTOR mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾组织PP2A、AMPK、磷酸化(p)-AMPK、mTOR、p-mTOR蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠肾脏病理结构变化明显,血清SCr、BUN含量明显升高,肾组织PP2A mRNA表达增加,PP2A蛋白表达和p-mTOR/mTOR均明显升高,p-AMPK/AMPK明显降低(P<0.05);与模型组比较,药物干预治疗后各组大鼠肾脏病理形态学明显改善,血清中SCr、BUN含量均明显降低,肾组织PP2A mRNA表达下降,PP2A蛋白表达和p-mTOR/mTOR均明显降低,p-AMPK/AMPK明显升高(P<0.05),水蛭-三七组效果更为明显。正常组、模型组及治疗各组肾组织AMPK、mTOR mRNA表达差异未见统计学意义。结论:水蛭-三七对改善CRF大鼠肾纤维化的疗效明显优于单味药,其对CRF大鼠肾纤维化的改善可能与调节PP2A/AMPK/mTOR信号通路有关。