独活寄生汤抑制NLRP3炎性小体活化治疗痛风性关节炎

背景:研究发现NLRP3炎症小体的激活是痛风性关节炎发病的重要因素,通过调控PTEN诱导激酶1(PTEN-induced kinas 1,PINK1)/Parkin信号通路能有效抑制NLPR3炎性小体的活化。目的:探究独活寄生汤对PINK1/Parkin/NLRP3信号通路的影响。方法:①动物实验:将雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、阳性对照组(秋水仙片0.3 mg/kg)和独活寄生汤低、中、高剂量组(分别给予6.9,13.8,27.6 g/kg),除对照组外其余各组大鼠通过右后踝关节腔注射尿酸单钠盐晶体混悬液构建大鼠痛风性关节炎模型。②细胞实验:将人单核细胞(THP-1)分为空白对照组、模型组、独活寄生汤含药血清组、PINK1 siRNA+独活寄生汤含药血清组,除空白对照组外其余各组细胞采用尿酸钠刺激建立体外痛风性关节炎模型。③观察大鼠踝关节肿胀度、关节周径、步态评分、关节炎症指数和病理分级程度;酶联免疫吸附法检测尿酸、C-反应蛋白、NLRP3和白细胞介素1β水平;免疫印迹法检测PINK1/Parkin/NLRP3通路相关蛋白表达水平;四甲基偶氮唑蓝法检测细胞活性;免疫荧光双染检测线粒体自噬水平;免疫荧光检测NLRP3和白细胞介素1β表达。结果与结论:①与对照组比较,模型组大鼠在6-48 h的踝关节肿胀度、踝关节周径升高(P<0.05),在24和48 h时的步态评分与关节炎症指数升高(P<0.05),血清尿酸和C-反应蛋白水平、病理分级程度、滑膜组织中PINK1、Parkin和NLRP3蛋白表达及白细胞介素1β水平均升高(P<0.05);与模型组比较,独活寄生汤各剂量组大鼠上述指标中除PINK1和Parkin蛋白表达升高(P<0.05)外,其他指标均降低(P<0.05)。②与模型组比较,独活寄生汤含药血清组细胞NLRP3活性、白细胞介素1β水平和线粒体外膜转位蛋白20(TOM20)蛋白水平降低(P<0.05),而增殖抑制率、PINK1、Parkin和LC3B蛋白水平增加(P<0.05);细胞线粒体自噬水平升高(P<0.05),而NLRP3和白细胞介素1β蛋白水平降低(P<0.05)。③与独活寄生汤含药血清组相比,PINK1 siRNA+独活寄生汤含药血清组细胞线粒体自噬水平降低(P<0.05),NLRP3和白细胞介素1β表达水平升高(P<0.05)。④结果表明,独活寄生汤通过调控PINK1/Parkin信号通路抑制NLRP3炎性小体活化,进而对痛风性关节炎起到治疗作用。

黄芪桂枝五物汤减弱椎间盘终板软骨细胞线粒体损伤和氧化应激

背景:黄芪桂枝五物汤对椎间盘退行性疾病有一定的保护作用。线粒体自噬在调控细胞线粒体损伤和氧化应激中发挥着重要的作用,但黄芪桂枝五物汤对椎间盘终板软骨细胞线粒体自噬的影响仍不明确。目的:探讨黄芪桂枝五物汤对过氧化氢诱导椎间盘终板软骨细胞损伤的影响及其可能的分子作用机制。方法:提取大鼠椎间盘终板软骨细胞,将细胞分为5组,其中黄芪桂枝五物汤低、中、高剂量组分别用6.25,12.5,25 mg/mL黄芪桂枝五物汤培养液培养细胞24 h,而正常组和模型组不添加药物。之后除正常组外,模型组和黄芪桂枝五物汤各剂量组中添加400μmol/L的H2O2继续处理细胞2 h。采用CCK-8法检测细胞增殖情况;比色法检测乳酸脱氢酶、ATP、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、丙二醛水平;免疫荧光法检测细胞线粒体膜电位变化;流式细胞术检测活性氧和细胞凋亡率;细胞免疫荧光双染检测细胞线粒体自噬的情况;采用siRNA进行细胞转染,蛋白免疫印迹法检测帕金森病相关基因(Parkinson-related genes,Parkin)、LC3Ⅱ和p62蛋白表达的情况;细胞转染Parkin腺病毒过表达载体,检测细胞存活率。结果与结论:①与模型组比较,黄芪桂枝五物汤处理显著提高了软骨细胞存活率,升高软骨细胞内ATP、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和线粒体膜电位水平,有效降低细胞的凋亡率(P<0.05,P<0.01);②黄芪桂枝五物汤处理后,软骨细胞中乳酸脱氢酶活性、活性氧和丙二醛水平较模型组显著降低(P<0.01);③Parkin siRNA显著降低了过氧化氢诱导的细胞线粒体自噬(P<0.01),细胞存活率和ATP水平明显升高(P<0.01),细胞中的活性氧水平、丙二醛含量和凋亡率均明显降低(P<0.01);④与模型组相比,黄芪五物桂枝汤处理能够减弱过氧化氢引起的Parkin和LC3Ⅱ蛋白水平升高(P<0.05,P<0.01);而黄芪桂枝五物汤处理组中的p62蛋白水平显著高于模型组(P<0.01);⑤过表达Parkin减弱了高剂量黄芪桂枝五物汤对H2O2处理细胞存活率的保护作用;⑥提示黄芪桂枝五物汤能有效抑制过氧化氢诱导的椎间盘终板软骨细胞线粒体损伤和氧化应激,其保护机制可能与减弱Parkin调节的线粒体自噬有关。

针刀联合中药治疗颈性眩晕疗效的Meta分析

目的:系统评价针刀联合各种中药内服治疗颈性眩晕的临床疗效,为治疗颈性眩晕的临床决策提供循证参考。方法:计算机检索PubMed、Embase、The Cochrane Library、中国知网、维普中文期刊服务平台、万方数据、中国生物医学文献服务系统等国内外中英文数据库,搜索针刀联合中药治疗颈性眩晕相关的随机对照试验文献,检索时限均从建库至2021年9月30日。逐层筛选纳入文献,按纳入文献提取数据后进行质量评价,采用Review Manager 5.3软件进行Meta分析。结果:共有16篇文献符合纳入标准,共1367例患者。Meta分析结果显示,试验组的总有效率优于对照组(P<0.00001);试验组的椎-基底动脉血流速度改善度优于对照组(均P<0.00001)。与对照组比较,试验组在改善颈性眩晕症状与功能评分方面比较有优势(P=0.0009)。结论:证据表明,针刀联合中药治疗颈性眩晕有一定的优势,但由于纳入文献质量均偏低,未来需要更多高质量的临床研究进一步验证以获得更充分的证据。

基于AMPK/Sirt1信号通路探讨身痛逐瘀汤含药血清对膝骨性关节炎大鼠软骨细胞的保护作用

目的:研究身痛逐瘀汤含药血清对膝骨关节炎(KOA)大鼠软骨细胞氧化应激及凋亡的保护作用。方法:50只雄性大鼠分别灌胃给予生理盐水、身痛逐瘀汤低、中、高剂量(1.73、3.46、6.92 g·kg^(-1))和硫酸氨基葡萄糖(0.3 g·kg^(-1)),连续给药2周后收集血清。构建KOA模型,分离软骨细胞,随机分为正常组、模型组、身痛逐瘀汤含药血清低、中、高剂量组及硫酸氨基葡萄糖组。软骨细胞培养过程中添加磷酸腺苷(AMP)依赖的蛋白激酶(AMPK)抑制剂Compound C(10μmol·L^(-1)),分为正常组、模型组、身痛逐瘀汤含药血清组、Compound C+身痛逐瘀汤含药血清组。5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)染色检测细胞增殖;原位末端标记法(TUNEL)测定凋亡;DCFH-DA探针检测活性氧(ROS)水平;比色法测定谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、MMP-13、胶原酶Ⅱ型(ColⅡ)和聚集蛋白聚糖(Aggrecan)mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Weatern blot)检测磷酸化(p)-AMPK及沉默信息调节因子1(Sirt1)蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组软骨细胞增殖率、GSH活性、ColⅡ与Aggrecan mRNA表达、p-AMPK和Sirt1蛋白水平显著降低(P<0.01),而ROS水平、MDA含量、TUNEL阳性细胞率、MMP-3与MMP-13 mRNA表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,身痛逐瘀汤含药血清能提高KOA大鼠软骨细胞中EdU阳性细胞数、GSH活性、ColⅡ和Aggrecan mRNA表达水平、p-AMPK和Sirt1蛋白水平(P<0.05,P<0.01),而TUNEL阳性细胞率、ROS水平、MDA含量、MMP-3和MMP-13 mRNA表达水平则明显降低(P<0.05,P<0.01)。与身痛逐瘀汤含药血清组比较,Compound C+身痛逐瘀汤含药血清组细胞p-AMPK和Sirt1蛋白表达、GSH活性、ColⅡ和Aggrecan mRNA水平明显降低(P<0.01),TUNEL阳性细胞率、ROS水平、MDA含量、MMP-3和MMP-13 mRNA水平显著升高(P<0.01)。结论:身痛逐瘀汤含药血清能减弱KOA大鼠软骨细胞氧化损伤,降低细胞凋亡,其保护作用可能与激活AMPK/Sirt1信号通路有关。