COX-2及VEGF蛋白在大鼠乳腺癌骨移植瘤中的表达及意义

背景与目的:随着对生物学预后因子研究的不断深入,乳腺癌预后指标的联合检测和应用,能更有效、准确地估计患者的预后,并有助于指导乳腺癌的个体化治疗。本研旨在探讨究环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白对大鼠乳腺癌骨转移发生、发展的意义。方法:建立大鼠乳腺癌骨移植模型,观察正常组织及建模后肿瘤组织影像学、组织学变化,并检测COX-2、VEGF蛋白表达。结果:随着建模时间的延长,胫骨X线摄片及组织学显示肿瘤细胞向外侵蚀破坏骨皮质逐渐加强,COX-2、VEGF蛋白在肿瘤组织中表达的程度也逐渐增强,在正常组织及建模后第7、14和21天光密度值反映的表达量分别为916±258、1694±497、4304±890和7111±1069;930±268、1944±396、3226±819和4746±1032,两两比较差别均有显著的统计学意义(P<0.01)。结论:乳腺癌局部高表达COX-2蛋白可促进肿瘤细胞增殖,并通过上调VEGF蛋白水平,促进大鼠乳腺骨转移癌的发生和发展。

塞来昔布在MRMT-1大鼠乳腺癌骨转移性癌痛模型的作用机制探讨

目的:应用MRMT-1大鼠乳腺癌骨转移性癌痛模型探讨环氧化酶-2选择性抑制剂塞来昔布的抗肿瘤及镇痛作用机制。方法:用MRMT-1大鼠乳腺癌细胞建立的49只大鼠癌痛模型。造模20天后将大鼠随机分为治疗组(25只)与对照组(24只),于塞来昔布干预后第21天取转移性骨肿瘤组织行COX-2、VEGF蛋白表达水平测定及机械性痛觉超敏测量。结果:治疗组转移性骨肿瘤组织中COX-2和VEGF的蛋白表达与对照组比较显著降低(4266.42±733.96 VS 7731.96±1361.41;6237.05±771.24 VS 7833.06±1053.66P<0.05)。机械性痛觉超敏反应全面减弱,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:塞来昔布可能通过下调COX-2、VEGF水平抑制肿瘤进展并具有良好的镇痛作用。

鹿茸多肽诱导自体骨髓间质干细胞移植修复兔膝关节软骨缺损

目的探讨经鹿茸多肽(PAP)诱导的兔自体骨髓间质干细胞(MSCs)复合胶原膜(MCMG)对兔膝关节局部全层软骨缺损的修复作用。方法新西兰大白兔随机分成A,B,C3组,A组以PAP诱导后的自体MSCs和MCMG修复软骨缺损;B组以经转化生长因子β1(TGF-β1)诱导后的自体MSCs和MCMG修复软骨缺损;C组以自体MSCs和MCMG修复软骨缺损。分别于术后2、4和8周取材进行大体、组织学及免疫组织化学染色观察,根据关节软骨组织学计分标准进行评分。结果对术后8周大体及各阶段组织学形态评分结果显示:A组与B组修复差别无统计学意义(P>0.05),而A、B组明显优于C组(P<0.05)。结论经PAP诱导的兔自体MSCs/MCMG支架复合物可促进软骨缺损的快速修复,恢复软骨组织的结构和功能。

褪黑素对人胃癌细胞生长的影响

目的分析褪黑素与人胃癌细胞生长指标的关系,探讨褪黑素对人胃癌细胞增殖、肿瘤生长的影响。方法选用人胃癌细胞株MGC-803、SGC-7901及AGS培养、传代,在氯化钴(CoCl_(2))模拟乏氧条件下及常氧条件下,采用0.01、0.1、1、3 mmol/L不同浓度的褪黑素干预,分别在不同时间点0.5、2、16、24 h给药,观察褪黑素对人胃癌细胞生物学行为的影响。结果常氧及乏氧条件下,低浓度褪黑素(0.01、0.1 mmol/L)对胃癌细胞无明显抑制作用;而高浓度褪黑素(1、3 mmol/L)能明显抑制人胃癌细胞株MGC-803、SGC7901及AGS增殖,呈时间和剂量依赖趋势。各组间癌细胞抑制率比较,差别有统计学意义(P<0.05)。3 mmol/L褪黑素在体外抑制人胃癌细胞增殖最为显著,并能明显抑制SGC-7901细胞分泌血管内皮生长因子-A(VEGF-A)。结论常氧及乏氧条件下,褪黑素体外能抑制人胃癌细胞株MGC-803、SGC-7901及AGS增殖,呈时间-剂量依赖性,高浓度褪黑素明显抑制SGC-7901细胞分泌VEGF-A。

自体骨髓间充质干细胞复合胶原膜修复兔膝关节全层软骨缺损的实验研究

目的 研究自体骨髓间充质干细胞（mesenehymal stem cells，MSCs）复合胶原膜（medical collagen membrane of guided tissue regeneration，MCMG）对兔膝关节局部全层软骨缺损的修复作用。方法 实验动物选用健康的新西兰大白兔27只，3～4月龄，体重2．1～3．4kg，每只抽取自体骨髓3～4ml，体外分离培养后以5．5×10^4／ml密度种植于MCMG支架上体外培养48h，制成MSCs／MCMG复合物，将以上27只实验动物手术制成双膝关节、股骨内髁负重区及滑车全层软骨缺损模型后，随机分成A、B、C3组，每组各9只。A组双侧股骨内髁负重区、滑车软骨缺损处植入MCMG／MSCs复合物；B组植入单纯MCMG；C组不作任何植入，为空白组，分别于术后4、8和12周各处死3只，取材进行大体、组织学及免疫组织化学染色观察，根据关节软骨组织学半定量评分标准进行评分。结果 A组术后4周即可重建关节骨软骨缺损；修复软骨在观察期内逐渐变厚，在12周内始终保持关节面及软骨下骨结构完整，为透明软骨样修复，表面光整，与周围软骨色泽相近；而B组和C组12周时仍为纤维软骨样修复，色泽浅黄，呈虫蚀样改变，仍有空洞。A组糖胺多糖及Ⅱ型胶原表达呈阳性，B、C组则明显减少。术后4、8和12周各组组织学半定量评分及术后12周大体结果显示：股骨内髁负重区与滑车修复对比差异无统计学意义（P〉0．05），A组明显优于B组和C组（P〈0．05）；B组优于C组（P〈O．05）。结论 自体MSCs复合MCMG在体内环境下可形成透明软骨修复兔膝关节全层软骨缺损。MCMG符合组织工程软骨基质材料的基本要求，有望成为一种理想的用于关节全层软骨缺损修复的软骨组织工程载体材料。

鹿茸多肽对兔骨髓间质干细胞体外软骨表型诱导分化的影响

目的:通过对体外培养的兔骨髓间质干细胞(MSCs)在特定培养液作用下向软骨细胞表型分化的研究,探讨鹿茸多肽对其软骨分化的影响。方法:将第3代兔MSCs随机分为A组(空白对照组)、B组(诱导组)、C组(鹿茸多肽组),并取兔的关节软骨作为D组(关节软骨组)。A、B、C 3组分别采用普通培养液、诱导培养液、含10 ug/m l鹿茸多肽的诱导培养液于离心管内进行培养,分别于1、2、3周后取材,通过组织学、生物化学和RT-PCR技术,对离心管内构建的软骨组织进行形态学和细胞功能状态的观察。结果:A组培养2周后,细胞团块逐渐崩解,无法进行HE染色。B、C组细胞团块除有轻度收缩外,呈白色半透明状,HE染色发现细胞为圆形或卵圆形,表层细胞密度大。B、C组糖胺多糖(GAG)含量及Ⅱ型胶原mRNA表达随培养时间延长而增多,并以C组为著;各时间点B、C组与A组相比明显增多,且差异有显著性统计学意义(P<0.01),C组与B组相比较多,差异有显著性统计学意义(P<0.01),C组与D组相比较少,差异有显著性统计学意义(P<0.01)。结论:MSCs在特定培养条件下能向软骨细胞表型分化,且鹿茸多肽对其定向软骨分化有明显促进作用。虽然在体外可以构建出软骨组织,但其与关节软骨质量相比仍有很大差距。

鹿茸多肽对软骨表型化骨髓间充质干细胞凋亡的影响

目的通过观察鹿茸多肽对白细胞介素1β(interleukin1β,IL-1β)诱导软骨表型化骨髓间充质干细胞(marrowmesenchymalstemcells,MSCs)凋亡的影响,以优化软骨组织工程的种子细胞。方法新西兰大白兔2只,抽取其骨髓;经密度梯度离心得到单核细胞,经体外分离、培养获得兔MSCs。用转化生长因子β1(transforminggrowthfactorβ1,TGF-β1)和碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)将其诱导分化软骨表型。将软骨表型化MSCs随机分成A组(空白对照组)5%胎牛血清的α-MEM培养液;B组(IL-1β组)5%胎牛血清的α-MEM培养液加入100ngIL-1β;C组(鹿茸多肽组)5%胎牛血清的α-MEM培养液加入10μg/ml鹿茸多肽作用3d后再加入100ngIL-1β;D组(TGF-β1组)5%胎牛血清的α-MEM培养液加入10ng/mlTGF-β1作用3d后再加入100ngIL-1β。分别于培养24、48和72h后取样,采用透射电镜观察细胞形态,AnnexinV法检测细胞凋亡率,RT-PCR技术分析Caspase-3mRNA表达水平,ELISA法检测Caspase-3蛋白酶活性。结果透射电镜观察B组24h后细胞核内染色质开始呈块状凝集,分布于核膜下,核膜不规则;48h后细胞核内染色质凝集加剧;72h后部分细胞内的核碎片凝集成凋亡小体。各时间点C、D组细胞结构改变相对滞后,且数量较少;A组细胞结构几乎无明显改变。各时间点B组MSCs凋亡率、Caspase-3mRNA表达及蛋白酶活性逐渐增高,与A组比较差异有统计学意义(P<0.01);C、D组与B组比较则逐渐下降,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论Caspase-3参与MSCs凋亡,鹿茸多肽通过减少Caspase-3mRNA表达,并抑制其蛋白酶活性,阻止或逆转软骨表型化MSCs凋亡。

鹿茸多肽诱导骨髓间充质干细胞体外向软骨表型的分化(英文)

背景:实验证实鹿茸多肽可以促进体外培养软骨细胞的增殖和细胞外基质糖胺多糖、Ⅱ型胶原、Aggrecan蛋白的表达。目的:通过对体外培养的兔骨髓间充质干细胞在特定培养液作用下向软骨细胞表型分化的研究,探讨鹿茸多肽对其软骨分化的影响。方法:将第3代兔骨髓间充质干细胞随机分为空白对照组、诱导组、鹿茸多肽组,分别采用普通培养液、诱导培养液、含10mg/L鹿茸多肽的诱导培养液于离心管内进行培养;并取兔的关节软骨细胞作为关节软骨组。分别于1,2,3周后取材,通过组织学、生物化学和RT-PCR技术,对离心管内构建的软骨组织进行形态学和细胞功能状态的观察。结果与结论:空白对照组培养2周后,细胞团块逐渐崩解,无法进行苏木精-伊红染色。诱导组、鹿茸多肽组细胞团块除有轻度收缩外,呈白色半透明状;苏木精-伊红染色发现部分细胞为圆形或卵圆形,表层细胞密度大;诱导组、鹿茸多肽组糖胺多糖含量及Ⅱ型胶原mRNA表达随培养时间延长而增多,各时间点诱导组、鹿茸多肽组含量均高于空白对照组(P<0.05);各时间点鹿茸多肽组糖胺多糖含量及Ⅱ型胶原mRNA表达均高于诱导组,但低于关节软骨组(P<0.05)。提示骨髓间充质干细胞在特定培养条件下能向软骨细胞表型分化,且鹿茸多肽对其定向软骨分化有明显促进作用。虽然在体外可以构建出软骨组织,但其与关节软骨质量相比仍有很大差距。

光动力联合紫杉醇对食管癌细胞株Eca-109增殖的影响

目的探讨血卟啉衍生物联合紫杉醇注射液对人食管癌细胞Eca-109体外光动力疗法效应的影响。方法将食管癌细胞株Eca-109分为8组:对照组、化疗组、化疗+高剂量光敏剂治疗组、化疗+中剂量光敏剂治疗组、化疗+低剂量光敏剂治疗组、高剂量光敏剂治疗组、中剂量光敏剂治疗组和低剂量光敏剂治疗组。种板孵育24 h,检测肿瘤细胞的存活率;于化疗方案组加入紫杉醇作用12 h,再往含光敏剂实验组分别加入血卟啉衍生物高、中、低剂量,4 h后行光动力照射,照光前后荧光显微镜下观察细胞凋亡形态,照光后继续培育24 h,开始行MTT法检测食管癌细胞增殖的抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果血卟啉衍生物浓度越高食管癌细胞显示的荧光强度越强,荧光强弱与细胞的活性成正比,与紫杉醇联合组则可见到更多凋亡细胞。在肿瘤细胞的生长抑制率、细胞凋亡率方面,化疗+高剂量光敏剂光动力治疗组与空白对照组、单纯化疗组及低剂量光敏剂光动力治疗组相比,差异均有显著意义(P<0.01);含光敏剂大剂量组与小剂量组相比,差异有显著意义(P<0.05);化疗组及光动力组与空白对照组相比,差异有显著意义(P<0.05)。结论光动力联合紫杉醇化疗对人食管癌细胞细胞株Eca-109增殖有协同抑制作用,二者可协同诱导人食管癌细胞株发生凋亡。

褪黑素对荷胃癌小鼠胸腺及脾转化生长因子-β1表达的影响

目的研究褪黑素在抑制肿瘤过程中对荷胃癌小鼠胸腺及脾转化生长因子-β1(TGF-β1)表达变化的影响。方法培养小鼠前胃癌细胞株(MFC),采用小鼠荷胃癌模型。褪黑素用药干预1周后,运用实时荧光定量PCR和免疫组织化学法检测胸腺、脾TGF-β1的表达变化。结果在褪黑素抗肿瘤过程中,与正常对照组相比,荷瘤空白对照组小鼠脾TGF-β1mRNA表达明显下调,胸腺的则无明显变化,且胸腺及脾TGF-β1蛋白表达无明显差异;褪黑素干预后,大剂量组胸腺TGF-β1基因及蛋白表达明显下降,而小剂量组胸腺TGF-β1mRNA表达较荷瘤空白对照组明显升高,差别有统计学意义,小、中、大剂量组脾TGF-β1基因和蛋白表达均回调至正常水平。结论一定浓度褪黑素能够下调荷胃癌小鼠胸腺TGF-β1表达,使荷胃癌小鼠的脾表达下调的TGF-β1回调至正常水平。褪黑素抗胃癌作用与免疫器官中TGF-β1表达变化有关。

褪黑素对小鼠胃癌细胞褪黑素膜受体MT1、MT2表达的影响

目的：探讨褪黑素对小鼠胃癌细胞褪黑素膜受体MT1、MT2表达的影响。方法：应用小鼠MFC前胃癌细胞建立荷胃癌小鼠模型，不同浓度褪黑素干预后，运用免疫组织化学、实时荧光定量PCR、免疫印迹定位定量检测MT1、MT2表达的变化。结果：移植瘤肿瘤细胞表达褪黑素膜受体MT1、MT2，褪黑素促进肿瘤组织膜受体MT1、MT2表达，并呈剂量依赖关系。结论：褪黑素上调褪黑素膜受体MT1、MT2的表达，说明褪黑素可能通过膜受体信号通路抑制胃癌生长。

褪黑素对小鼠CD4^+ T细胞增殖及Foxp3启动子活性的影响

目的探讨褪黑素(melatonin,MLT)对小鼠CD4+T细胞增殖及Foxp3(Forkhead box P3)启动子活性的影响,进一步丰富神经内分泌免疫网络学说。方法免疫磁珠分选小鼠脾CD4+T细胞,CCK-8法检测褪黑素对其增殖活性的影响;构建、筛选及鉴定Foxp3核心和全长启动子重组载体,并且电转染入小鼠CD4+T细胞,加以不同淋巴细胞刺激因子和褪黑素干预,用双荧光素酶报告基因法检测Foxp3启动子的活性变化。结果与空白对照组相比,从10-5mol浓度的MLT开始对CD4+T细胞有毒性作用,并呈剂量依赖性。10-6mol MLT对CD4+T细胞的增殖活性无影响。3种淋巴细胞刺激因子(佛波酯PMA+离子霉素ionomycin;植物血凝素PHA;T细胞抗原受体TCR)刺激和(或)褪黑素干预虽然使小鼠Foxp3核心或全长启动子活性有所上调,但与空白对照差异无统计学意义(P>0.05)。结论不同浓度褪黑素对小鼠CD4+T细胞增殖活性产生不同影响;褪黑素未显著增强小鼠Foxp3启动子活性。

大鼠乳腺癌骨移植瘤中TGF-β和PTHrP的表达及意义

目的探讨转化生长因子-β(TGF-β)和甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)对大鼠乳腺癌骨转移发生、发展的意义。方法建立大鼠乳腺癌骨移植模型,观察建模后影像学变化及TGF-β和PTHrP蛋白表达。结果随建模时间的延长,X线片显示胫骨骨皮质破坏加重,TGF-β和PTHrP蛋白在正常组织及建模后第7、14和21天的光密度值分别为912±246、1 586±483、4 254±850和7 026±1 033;946±256、1 932±393、3 128±809和4 653±1 008,两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 TGF-β和PTHrP可促进大鼠乳腺癌骨转移的发生、发展。

乳腺癌组织中BCA225的表达及意义

目的探讨BCA225在乳腺癌组织中表达及临床意义。方法免疫组化法检测乳腺癌组织、非乳腺癌组织的BCA225表达。结果①BCA225在乳腺癌组织表达的敏感度为82.5%,特异度为84%;②BCA225在乳腺癌组织和非乳腺癌组织中表达的差异有统计学意义(P<0.01)。结论BCA225是乳腺癌敏感、乳腺器官特异的标志物之一。

体外组织工程软骨的构建及其对关节软骨损伤的修复

目的探讨体外组织工程软骨的构建及其对关节软骨损伤治疗的可行性。方法①体外分离、培养、扩增骨髓基质干细胞,诱导分化培养为软骨样细胞;②以胶原膜为支架在体外构建组织工程软骨;③建立兔髋关节软骨缺损动物模型16只,对照组8只,实验组8只;应用组织工程软骨修复兔股骨头关节软骨缺损,8、16周后观察修复效果。结果8周后大体标本显示关节软骨缺损为白色软骨样组织填充,组织切片显示缺损处有新生软骨形成,阿新兰染色和Ⅱ型胶原免疫组化检测有GAG和Ⅱ型胶原强阳性表达;16周后关节软骨缺损仍为软骨样组织修复,部分见表面粗糙,镜下见软骨细胞排列紊乱。结论体外构建的组织工程软骨可用于修复兔股骨头关节软骨缺损,较长期的观察结果显示有退变倾向。

乳腺癌组织中HER-2的表达及其药物治疗策略

目的探讨乳腺癌组织中HER-2的表达与患者组织学类型、TNM分期、腋窝淋巴结转移、ER和PR间的关系,及HER-2过度表达乳腺癌的药物治疗策略。方法用免疫组织化SP法检测311例乳腺癌组织HER-2的表达。结果1、HER-2阳性表达87例(占27.97%)。2、HER-2的表达与组织学类型、TNM分期无关(P值分别为0.157和0.256)。3、HER-2阳性表达与腋窝淋巴结转移、ER和PR表达降低有关(P值分别为0.032,0.014和0.026)。结论乳腺癌患者HER-2过表达提示预后不良,检测该指标可为化疗、内分泌、靶向治疗提供依据。

联合应用棕榈酰化肽与聚肌胞对黑色素瘤特异性CD8^+T细胞的影响

目的探讨联合应用棕榈酰化肽与聚肌胞(poly IC)对肿瘤特异性CD8^+T细胞的影响。方法15只C57BL/6小鼠随机分为5组(每组3只):对照组(仅给予PBS)、线性肽(gp10025-33,黑色素瘤特异性CD8^+T细胞表位)组、线性肽^+poly IC组、棕榈酰化肽组、棕榈酰化肽^+poly IC组。经肌内注射免疫小鼠后,取得外周血及脾组织,通过流式细胞仪分析黑色素瘤特异性CD8^+T细胞数量,通过Elisa及Elispot法分析疫苗活化的CD8^+T细胞体外对黑色素瘤细胞的识别。取15只荷黑色素瘤C57BL/6小鼠,监测不同方法免疫后皮下肿瘤的大小。结果与线性肽^+poly IC组比较,棕榈酰化肽与poly IC联合应用显著增加外周血gp10025-33特异性CD8^+T细胞的数量[(23.53±5.398)%vs(1.158±0.239)%,P=0.014],且内源性CD8^+T细胞可以识别黑色素瘤细胞并显著抑制皮下肿瘤生长(P<0.001)。结论联合应用棕榈酰化肽与poly IC可促进黑色素瘤特异性CD8^+T细胞的免疫应答,从而显著抑制肿瘤生长。

晚期恶性肿瘤伴高血压患者凝血和纤溶指标的变化

目的观察晚期恶性肿瘤不伴和伴高血压患者的血管内皮损伤、凝血和纤溶指标的变化,为临床提供诊治依据。方法 2013年1月至2014年1月,入选福建医科大学附属第一医院化疗科晚期恶性肿瘤患者120例,男68例,女52例,年龄59.5（29-76）岁,根据是否合并高血压,分为晚期恶性肿瘤伴高血压组（n=60）和不伴高血压组（n=60）,以同期门诊体检者60例为对照组,男38例,女22例。测定血管性血友病因子（vWF）、P-选择素、纤维蛋白原、D-二聚体的变化。结果与对照组比较,晚期恶性肿瘤不伴高血压和伴高血压组vWF[（151.3±14.7）%、（195.1±9.4）%比（113.0±10.0）%]、P-选择素[（16.4±0.9）、（19.6±0.8）比（12.0±1.0）ng/L]、纤维蛋白原[（3.6±0.2）、（5.1±0.3）比（2.8±0.3）g/L]、D-二聚体[（0.28±0.03）、（0.39±0.04）比（0.18±0.04）mg/L]明显增高;晚期恶性肿瘤伴高血压组与不伴高血压组比较,差异亦有统计学意义（均P〈0.05）。相关性分析结果显示,血压与vWF（r=0.37）、P-选择素（r=0.42）、纤维蛋白原（r=0.46）和D-二聚体（r=0.39）呈正相关（均P〈0.05）。结论晚期恶性肿瘤伴高血压患者的凝血和纤溶指标存在明显变化。