Gitelman综合征SLC12A3基因突变分析及分子机制研究

目的 回顾性分析2015年8月至2022年11月南京医科大学附属儿童医院收治的20例Gitelman综合征患儿临床症状及基因突变情况,初步探讨中国人群高频突变D486N致病分子机制。方法 收集患儿的临床资料及SLC12A3基因变异情况等,在人胚胎肾293T细胞(HEK293T)中分别过表达野生型和变异型SLC12A3基因,使用蛋白免疫印迹法和免疫荧光技术分别检测肾噻嗪敏感性钠-氯协同转运体(NCC)的表达水平和亚细胞定位,探讨SLC12A3基因高频突变D486N对NCC蛋白表达和定位的影响。结果 本研究期间共收集到20例Gitelman综合征患者,患儿均表现为低血钾症,共筛查到26种SLC12A3基因突变,错义变异13种、同义变异1种、无义变异1种、移码变异4种、剪接位点变异7种。其中4种突变p.T235K、c.1096-1G>A、p.A464A、c.2660+1_2660+2insT为新发突变。结论 本研究初步发现中国人群高频突变D486N影响NCC总蛋白和膜蛋白的表达,并影响NCC蛋白的膜表达。本研究的实验结果可为Gitelman综合征遗传咨询及诊治提供实验依据。

1例Ⅲ型Bartter综合征患儿CLCNKB基因复合杂合变异功能分析

目的分析1例Ⅲ型Bartter综合征患儿CLCNKB基因复合杂合变异的功能特性,探索囊性纤维化跨膜传导调节剂VX-809化合物对CLCNKB基因错义突变的挽救作用。方法回顾性分析2019年9月2日至南京医科大学附属儿童医院肾脏内科就诊的1例Ⅲ型Bartter综合征患儿的临床表现、生长发育情况、实验室检查结果及CLCNKB基因变异情况等。在人胚胎肾293细胞(HEK293)中分别转染野生型和变异型CLCNKB基因,并运用蛋白免疫印迹法检测各组ClC-Kb蛋白的表达水平,运用非配对t检验比较野生型与突变型之间蛋白表达的差异。同时,利用免疫荧光技术检测ClC-Kb的亚细胞定位,并使用囊性纤维化跨膜传导调节剂VX-809化合物处理过表达突变体的细胞。结果患儿为2岁个8个月的女性,表现为低钾血症、低氯血症、代谢性碱中毒、肾性盐消耗,高血压四项及血压均正常。基因检测结果显示患儿为CLCNKB基因复合杂合型变异。在HEK293细胞中转染2种突变(p.F213C和p.Y466Mfs*13)质粒,发现突变型ClC-Kb蛋白表达均低于野生型(P均<0.01),其中移码突变导致了一个低分子量带(~5.5×10^(4))。免疫荧光定位实验示p.F213C和p.Y466Mfs*13变异体滞留于细胞质内。VX-809处理p.F213C突变转染后的HEK293细胞后,可呈剂量依赖性地显著增加ClC-Kb蛋白的膜表达。结论CLCNKB基因2种变异体导致ClC-Kb蛋白表达降低和定位出现异常,VX-809化合物可在一定程度上纠正Ⅲ型Bartter综合征患儿CLCNKB基因变异体的蛋白表达缺陷,可能对于治疗Ⅲ型Bartter综合征有新的应用前景。

基于CiteSpace的无人机遥感技术在农业中的研究进展

无人机遥感技术作为现代农业技术的重要分支,在农业的各个方向中发挥着越来越重要的作用。为深入探究无人机遥感技术在农业中的研究和应用热点及前沿,利用CiteSpace软件和知识图谱分析方法,以中国知网(CNKI)为数据源,为提高数据可信度,文献类别仅使用北京大学图书馆所认定的《中文核心期刊要目总览》,经筛选后,获取相关文献828篇,对无人机遥感技术在农业领域的研究文献进行发文时间、作者、发文机构、关键词共现、关键词时序分析及高突显值关键词分析,并且对当前研究的热点进行分析。研究结果表明,该领域的研究热点是以机器视觉、目标检测、深度学习等人工智能处理数据的方法同无人机遥感相结合。该文期望通过数据分析,为未来我国无人机遥感在农业中的研究提供一定的借鉴。

弓形虫感染大鼠外周血T淋巴细胞亚群及IFN-γ、TNF-α、IL-4动态变化

目的观察弓形虫感染大鼠外周血T淋巴细胞亚群及干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)动态变化。方法将54只清洁级Sprague-Dawley(SD)成年大鼠随机分成9组,其中8组每鼠腹腔注射经纤维素-11(CF-11)纯化的活弓形虫速殖子悬液2ml(2×105/L)。分别于弓形虫感染后1、3、7、14、28、35、42、60d时取大鼠外周全血,流式细胞术检测T细胞亚群变化,ELISA检测外周血IFN-γ、TNF-α、IL-4动态变化。对照组腹腔注射2ml生理盐水。结果T淋巴细胞亚群CD8+水平在感染弓形虫后3d(14.22%)、7d(14.93%)、14d(16.08%)均显著低于正常水平(23.08%)(P<0.05),至感染后28d恢复正常水平,而CD4+水平在整个感染过程中无明显变化。IFN-γ和IL-4水平在感染后第7d分别升高至6.73pg/ml和6.91pg/ml(P<0.05),至感染60d仍高于正常水平;TNF-α至感染后28d(14.37pg/ml)及60d均高于正常水平(10.81pg/ml)(P<0.05)。结论弓形虫感染后大鼠外周血CD8+水平一度降低,28d后恢复正常,CD4+无明显变化,IFN-γ、IL-4和TNF-α均高于正常水平,但出现时间有差异。

父母教养方式与高中生抑郁情绪的相关性

目的:探讨父母教养方式对高中生抑郁情绪的影响。方法:采用父母教养方式问卷、抑郁自评量表和焦虑自评量表于2004-03/06对北京市一所普通中学的174名学生进行调查分析。①父母教育方式问卷分为母亲教养方式56个项目,父亲教养方式58个项目,内容包括:情感温暖理解、拒绝否认、严厉惩罚、过分干涉与过分保护、偏爱被试5个保留维度。量表的同质性系数分别为0.81和0.72。实验假设父母教养方式一致,所以在计分时把每个维度中父亲与母亲的分数合并。②焦虑自评量表由20个项目组成,采用4级评分,主要评定项目为所定义症状出现的频率。③自评抑郁量表由20个陈述句组成,每条为一个相关症状,按1-4级评分,奇偶数条目分半相关性为0.73和0.92。评分在40分以下者为无抑郁;40-48分为轻度抑郁;49～56分为中度抑郁;57分以上为重度抑郁。④以班为单位施测。施测前取得该校领导、老师和同学的同意。在非考试状态下,按班级对学生进行3个问卷的团体测试。并在被试确信答案得到保密的情况下进行。⑤主要观察高中生的父母教养方式以及其焦虑抑郁情绪的特点。父母教养方式与学生的焦虑抑郁情绪之间的关系。⑥数据处理采用t检验,相关分析和单因素独立样本方差分析。结果:共发放问卷200份,回收问卷189份,回收率为94.5%。剔除不完整答卷得到合格问卷174份,有效率为92.1%。①高中生的父母教养方式:4个维度中情感温暖理解的得分最高,其次是严厉惩罚和过分干涉保护,拒绝否认维度上的得分最低。在性别差异上,父母教养方式中温暖理解在女生得分显著高于男生,而其他3个维度则是男生的得分显著高于女生。②高中生的焦虑得分:从总体上和不同性别上均高于抑郁得分。但就焦虑、抑郁本身得分来看不存在性别差异。相关分析表明高中生的焦虑、抑郁之间存在着非常显著的相关(r=0.777,P<0.01)。③父母教养方式与子女焦虑和抑郁得分的关系:除拒绝否认维度外,其余各维度都存在显著相关。其中情感温暖理解维度与焦虑、抑郁呈负相关(r=-0.412,-0.457,P<0.05);严厉惩罚和过分干涉保护维度与焦虑、抑郁成正相关(r=0.348,0.356;0.382,0.385;P<0.05)。④父母不同教养方式各维度与高中生不同抑郁水平间的差异:经事后比较分析表明,无抑郁高中生父母的教养方式在情感温暖理解维度上的得分高于轻、中度抑郁高中生之父母者,在严厉惩罚维度上的得分低于轻度抑郁高中生之父母者。在过分干涉保护维度上轻度和重度抑郁高中生父母的得分高于无抑郁学生父母的得分。结论:父母教养方式对子女的焦虑、抑郁情绪有影响。无抑郁高中生父母的教养方式在情感温暖理解维度上的得分高于轻、中度抑郁高中生之父母者,在严厉惩罚维度上的得分低于轻度抑郁高中生之父母者。在过分干涉保护维度上轻度和重度抑郁高中生父母的得分高于无抑郁学生父母的得分。父母投入的情感温暖理解越多,高中生的积极情绪越多,焦虑、抑郁的严重程度越低。

弓形虫感染大鼠外周血T细胞亚群动态变化

目的观察弓形虫感染大鼠外周血T淋巴细胞亚群的动态变化。方法将58只清洁级SD成年大鼠随机分成9组,其中8组为实验组,1组为对照组,实验组每鼠腹腔注射2×105/LCF-11纤维素纯化的活弓形虫速殖子悬液2ml,对照组腹腔注射2ml生理盐水,并留4只为正常对照鼠。分别于弓形虫感染后1、3、7、14、28、35、42、60d时取大鼠外周全血,用流式细胞术检测外周血T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+百分比。结果弓形虫感染后3d、7d时,CD3+水平降至最低,但与正常鼠和对照鼠无显著性差异(P>0.05),至感染14d基本恢复至正常水平,此后再无明显变化。CD8+亚群水平在感染后3d、7d、14d时均显著低于正常水平(P<0.05),至感染后28d恢复正常水平。而CD4+亚群水平在整个感染过程中无明显变化(P>0.05)。CD4+/CD8+比例在感染后3d、7d、14d时显著高于正常鼠和对照鼠(P<0.05)。结论弓形虫感染影响大鼠外周血T淋巴细胞亚群比例,但可自行恢复正常。

共培养下后交叉韧带成纤维细胞中MMPs的基因表达

目的研究后交叉韧带(posterior cruciate ligament,PCL)成纤维细胞与滑膜细胞共培养下,2种细胞之间的交流对PCL成纤维细胞中基质金属蛋白酶MMP-1、2、3表达及活性的影响。方法分为共培养组和单培养组:①用显微镜观察共培养24 h后细胞的活性和迁移率。②分别培养6 h后,提取总RNA,逆转录PCR;实时荧光定量PCR对人后交叉韧带成纤维细胞MMP-1、2、3基因的表达进行半定量和定量分析。③共培养处理1、2、3 d后收集培养上清液,用明胶酶谱法检测MMP-2的活性。结果共培养使PCL细胞和滑膜细胞较单层细胞培养迁移率分别增高了(43.1±0.1)%和(76.2±0.2)%(P<0.01)。与单培养相比,共培养组明显增加了MMP-2的基因表达,但降低了MMP-1、3的基因表达。酶谱结果表明共培养增加了MMP-2活性(P<0.05)。结论共培养能够促进细胞的迁移以及调节细胞中MMP-1、2、3的表达情况。

探究式教学模式初探

本文以培养学生创新精神和实践能力为出发点 ,倡导教学结构、教学方法改革并结合汽车应用材料课程探究式教学实践 ,把以教师为中心的教学结构转变成以学生为中心的教学结构。对比两种教学方式特点及教学效果 ,阐述探究式教学是培养学生参与意识 。

计算机三维重建技术发展与应用

叙述了国内外三维重建的发展状况及三维重建研究的重要意义。提出了利用三维重建技术建立专家系统 ,对工程图二个视图的识别与匹配实现智能识图 ,重建三维模型 ,通过判断反馈系统 ,实现人机交互 ,是一种比较理想的ICAI系统。

多类型现场总线在工业自动化控制中的综合应用

对ProfiBus、InterBus-S和Genius三种现场总线以及它们所连接的设备特性进行了深入分析,探讨了在网络底层用多类型现场总线在复杂现场环境下的综合运用。

合并高校图书馆的现状、对策及目标

文章以兰州师专图书馆并校后的现状为例,对合并后的高校图书馆现状进行了分析,提出了近期工作的对策及合并后高校图书馆发展的目标。

论硕士研究生就业能力的培养

目前,硕士研究生就业率出现下滑局面。如何摆脱这种困境,需要我们认真思考。其中重要一点就是重视硕士研究生培养过程,提升综合素质。关键在于构建基于应用能力培养的课程体系,搞好教学实践和科研实践。

大学毕业生就业难问题分析

从教育改革和人才市场供求规律的角度,讨论了大学生毕业生就业难问题,指出高校扩招速度远高于经济增长速度是造成就业难的总量性原因,教育改革突出了就业难的结构性原因,各项社会因素也加剧了就业难的形成。只有依靠政府部门和社会各界的共同努力,才能有效解决这一问题。

国内外海洋污染现状、防治对策研究及对青岛市海洋环境的保护建议

人类的生存与发展离不开海洋。但是,现阶段,全球范围内大多数海域都因为人类不规范的经济生活而被严重污染,变成了"蓝色垃圾桶"。文章通过对海洋污染的来源及特点、危害、我国海洋污染现状、海洋污染的防治对策进行调研、分析,根据青岛市海洋污染状况及特点,提出对策建议,现将对策。

989例儿童肺炎支原体感染的临床特征分析

目的探讨儿童肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae,MP)感染的临床特征。方法从2018年1月至2020年1月在银川市妇幼保健院因下呼吸道感染首次住院治疗的989例患儿中筛选出198例MP感染的患儿,采集患儿静脉血,用被动凝集法检测支原体的感染情况。从季节、年龄、性别及临床症状和实验室指标等多方面对MP感染的患儿进行分析。结果989例标本中MP占198例,检出率为20.0%;198例MP阳性标本中,MP混合病毒的感染率最高(66.2%)。秋、冬季MP感染的检出率高于其他季节(P<0.01)。MP感染多见于6岁以上的患儿。在与MP混合感染的病原体中以人呼吸道合胞病毒(RSV)、人鼻病毒(HRV)、副流感病毒3型(PIV3)、肺炎克雷伯杆菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌多见。与非MP感染组比,MP单独感染组患儿中性粒细胞百分比升高,血清降钙素原含量降低(P均<0.05)。结论MP是儿童下呼吸道感染的主要病原体之一,MP感染多发生于秋、冬季和6岁以上患儿,与病毒混合感染最多见,中性粒细胞百分比、血清降钙素原、C-反应蛋白可以作为MP感染的辅助指标。

疼痛管理小组在提高患者术后自控镇痛质量中的应用

目的探究疼痛管理小组在提高患者术后自控镇痛质量中的作用。方法选取2017年1月~8月于本院收治并在术后使用自控镇痛98例患者作为研究对象,以入院先后顺序均分为对照组及试验组,各49例。对照组予以常规镇痛管理,试验组采用疼痛管理小组干预管理,对比2组患者的自控镇痛质量。结果术后6h 2组患者视觉疼痛(vision algetic standard,VAS)评分差异微小(P>0.05),术后12h、24h、48h试验组患者VAS评分明显低于对照组(P<0.05);试验组术后第1个24h镇痛药用量明显高于对照组,术后第2个24h及术后48h应用镇痛药总剂量均明显低于对照组(P<0.05);试验组镇痛不全、恶心呕吐、瘙痒等发生率均明显低于对照组(P<0.05)。结论对患者予以术后自控镇痛,使用疼痛管理小组干预管理,可优化镇痛质量,效果确定,推广应用价值高。

6%海岛素预防酥梨花期冻害试验报告

田间药效试验表明,海岛素能够有效预防酥梨花期冻害,提高坐果率,促进幼果发育,中科2号与安泰生对预防酥梨花期冻害也有一定的作用,但安泰生与海岛素混用对海岛素的防冻效果有显著的增效作用。

葡萄减肥增效效果试验研究

水肥一体化施肥技术是果树的一项重要减肥增效措施。目前在渭南市临渭区葡萄萄生产中,存在施肥量过大问题,为此,本研究开展了葡萄减肥增效效果试验,通过两年多点示范证明,葡萄在施足底肥的基础上,通过简易水肥一体化施肥技术,可以满足葡萄生长对养分的需要,达到减肥增效的目的。