毛果杨腺苷酸合成酶基因ACS-1的克隆和酶学分析

乙酰辅酶A连接酶(ACS)属于腺苷酸合成酶超基因家族,与4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)有着紧密的进化关系。通过对毛果杨数据库中4CL基因的同源检索,克隆获得了毛果杨基因Prt4CL8的序列(命名ACS-1,Genebank登录号XM_002329288.1)。序列分析表明,ACS-1具有ACS的关键残基以及C端末尾的PTS1序列;而4CL的高度保守结构域boxⅠ和boxⅡ在该蛋白中不保守。利用PCR技术克隆序列,构建表达载体pET30a,转化大肠杆菌并表达重组蛋白。对其进行酶学活性分析,结果证明该蛋白不能催化4CL常见底物,而对ACS底物乙酸钠具有明显催化活性:Km为(0.25±0.02)mmol·L-1;Vm为(8.63±0.63)mmol·L-1。结果表明,ACS-1是ACS家族成员,为腺苷酸合成酶超基因家族成员的鉴定与功能分析提供了一定的理论基础。

毛白杨细胞质抗坏血酸过氧化物酶基因的克隆及表达分析

利用同源克隆技术得到1个毛白杨细胞质抗坏血酸过氧化物酶基因,命名为PcAPX。该基因编码249个氨基酸残基,预测分子量为33.01kD。采用原核表达技术在大肠杆菌中表达并纯化该蛋白并进行酶活性分析,结果表明:重组PcAPX蛋白对抗坏血酸(AsA)和过氧化氢(H2O2)有很高的活性,其对抗坏血酸的米氏常数(Km)和最大反应速度(Vmax)分别为(0.71±0.03)mmol·L-1和(0.41±0.02)mmol·L-1·min-1·mg-1;对过氧化氢的Km和Vmax分别为(0.60±0.21)mmol·L-1和(0.35±0.12)mmol·L-1·min-1·mg-1,表明PcAPX对AsA和H2O2拥有较高的催化底物的能力和催化效率。利用实时定量RT-PCR分析毛白杨PcAPX基因的表达模式,结果表明其在老叶中表达量高于新叶、韧皮部、形成层和根部。该研究结果将进一步促进毛白杨APX基因家族成员参与植物生长调控的研究。

政府审计引入社会审计的问题研究

政府审计是国家治理的重要方面,随着时代的发展,政府审计的地位也越来越重要,对审计的要求也越来越严格。由于我国审计起步发展较晚,现有的审计力量往往难以满足国家社会的需求,需要通过购买社会审计服务,社会审计成为提高政府审计效率的重要方式和手段。

地塞米松对咪喹莫特诱导的小鼠银屑病模型的作用及机制

目的探讨地塞米松对银屑病的治疗作用及机制。方法将30只小鼠按照体质量排序后根据随机数据表分为空白对照组、模型组和地塞米松组。每天1次灌胃给药,地塞米松组给1 mg/kg的地塞米松溶液,空白对照组与模型组给等量的生理盐水。给药1 h后,模型组与地塞米松组在小鼠背部涂抹62.5 mg左右的5%咪喹莫特乳膏,空白对照组涂抹等量凡士林。采用皮损面积与严重度指数(PASI)评分和银屑病病理评分系统(Baker)分别观察小鼠皮损情况和组织病理学改变;动物全自动血液分析仪测定小鼠白细胞的种类与数目;流式细胞术测量小鼠脾脏细胞中Th细胞、Th17和Tregs细胞的比例,酶联免疫吸附测定小鼠血液中IL-17的含量。结果与模型组相比,地塞米松组可以显著降低PASI评分和Baker评分,改善银屑病样小鼠皮损情况;降低血液中白细胞总数及中性粒细胞数目,提高脾脏中Th辅助细胞的数量,增加Tregs细胞的比例(P<0.05),但不改变脾脏中Th17的数量(P>0.05);同时减少IL-17的分泌(P<0.05)。结论地塞米松对咪喹莫特诱导的银屑病样皮损有良好的干预作用,其干预作用可能与脾脏中Tregs细胞的比例增大有关。

植物有机毒素解毒修复相关突变体的筛选和鉴定

陆生植物具有特殊的解毒和修复功能,通过酶促代谢反应降低或清除体内的异源有机毒素物质。为筛选和鉴定拟南芥解毒修复相关的调控因子,以对毒素超敏感的ROXY19转基因植株为亲本,通过正向遗传学手段筛选抗性恢复的突变体。初筛和复筛获得8个解毒能力相对提高的候选突变体,命名为biànhuó1~8(bió1~8)。与野生型拟南芥和亲本植株相比,bió1突变体主根毛数量明显增加,bió2突变体花瓣数目变多。bió候选突变体呈现不同生长发育表型,说明植物的解毒修复反应和生长发育过程紧密相关,可能发现新的解毒修复调控因子。