胚胎大鼠脊髓运动神经元体外培养方法的优化

目的建立一种胚胎大鼠脊髓运动神经元的体外分离培养方法。方法采用原代培养的方法 ,从孕 15天胚胎大鼠的脊髓腹侧组织中分离脊髓前角神经元 ,通过差速贴壁法纯化培养细胞 ,应用神经元特异性的烯醇化酶抗体和抗神经微丝抗体 SMI32单克隆抗体对培养细胞进行鉴定。结果纯化培养体系中神经元占培养细胞的90 %以上 ,其中 70 %左右为脊髓运动神经元 (spinalmotorneurons,SMNs)。结论通过差速贴壁法纯化分离培养的SMNs体外生长状态良好 ,纯度高 ,可作为神经科学领域的重要研究手段。

急性运动轴索型神经病患者血清对培养脊髓运动神经元的影响

为了观察急性运动轴索型神经病(AMAN)病人血清对培养的胚胎大鼠脊髓运动神经元及其轴突的影响,直接、动态观察致病因素对轴突的损害程度。我们分离了胚胎大鼠脊髓腹侧组织,制备成细胞悬液在体外进行原代培养,应用抗非磷酸化神经微丝单克隆抗体SMI-32对培养细胞染色鉴定为运动神经元。培养6天时给予25%浓度AMAN病人血清进行干预,血清中检测有致病型空肠弯曲菌(Cj)PennerO:19型脂多糖抗体存在,正常人血清作为对照组。观察神经元胞体和突起的变化,并经Guillery Shirra及Webster法进行变性纤维染色。结果表明AMAN病人血清干预9h可引起培养运动神经元的轴突变性,嗜银性增加并染为棕黑色;干预12h,胞体开始肿胀,核偏移,胞浆内有银颗粒的沉积,最终培养神经元在16h开始死亡。对照组神经元生长无变化。我们认为AMAN病人血清中含有致病成分,可引起运动神经元轴突变性和继发性胞体改变,最终神经元死亡。推测这种损害在无补体和巨噬细胞参与下,抗PennerO:19型Cj脂多糖抗体起着重要作用。