卵巢癌相关成纤维细胞的培养及其对癌细胞侵袭力的影响

目的探讨卵巢癌相关成纤维细胞(CAFs)对卵巢癌细胞株CAOV3侵袭力的影响。方法用组织块贴壁培养法获得原代卵巢CAFs和卵巢正常成纤维细胞(NFs);通过倒置相差显微镜观察细胞形态和多种蛋白的免疫组化染色,对卵巢CAFs进行鉴定,观察CAFs对CAOV3侵袭力的影响。结果获得纯化的卵巢CAFs,其波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白染色呈阳性,角蛋白呈阴性;CAFs可显著提高CAOV3的侵袭能力(P<0.01)。结论与NFs相比,CAFs在形态结构、蛋白表达等方面均有显著差异,卵巢CAFs可增强CAOV3侵袭作用。

SDF-1/CXCR4对卵巢上皮性癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:研究SDF-1/CXCR4在卵巢癌细胞生物学活性中的作用。方法:用RT-PCR方法检测卵巢癌细胞株SW626及Anglne中的SDF-1和CXCR4的表达。细胞经外源性SDF-1或者抗CXCR4单克隆抗体干预后,用MTT法检测细胞增殖,PI测细胞凋亡,Annexin-V/PI法检测细胞早期凋亡,Transwell小室检测细胞的迁移侵袭活性。结果:两株卵巢癌细胞株中,SW626细胞既表达SDF-1又表达CXCR4,Anglne细胞则两者均不表达。在SW626细胞中,SDF-1作用于无血清状态下培养的细胞(吸光度A值为0.911±0.01),与对照组(吸光度A值为0.506±0.01)相比,差异有统计学意义(P<0.01),而加入抗CXCR4单克隆抗体作用后(10μg/ml A值为0.725±0.01,20μg/ml A值为0.650±0.02),与SDF-1组相比,差异均有统计学意义(分别为P<0.05和P<0.01);抗CXCR4单克隆抗体作用于无血清状态下培养的细胞(10μg/ml A值为0.655±0.11和20μg/ml A值为0.520±0.04),与对照组(A值为0.724±0.03)相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。加入外源性SDF-1后,SW626细胞在无血清状态下的早期凋亡数为15.6%,相对于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。抗CXCR4单克隆抗体可增加SW626细胞中的PI阳性细胞数(P<0.01)。并且,与对照组相比,SDF-1促进SW626细胞的迁移和侵袭能力增强(P<0.01),而此活性可被抗CXCR4单克隆抗体阻断。结论:SDF-1/CXCR4可能通过促进细胞增殖、迁移、侵袭及抑制其凋亡,使卵巢癌细胞获得进展。

趋化因子SDF-1及其受体对卵巢癌细胞增殖及迁移的影响

目的:探讨趋化因子受体CXCR4在人卵巢癌细胞中的表达及SDF-1/CXCR4系统与卵巢癌细胞恶性表现的关系。方法:采用RT-PCR检测卵巢癌细胞系SW626中CXCR4的表达,MTT法检测SW626细胞增殖能力的变化,通过体外微孔隔离室板(Transwell)检测SDF-1对SW626细胞迁移及CXCR4的封闭对其迁移的影响。结果:CXCR4mRNA在SW626细胞呈阳性表达,抗CXCR4单克隆抗体(20μg/mL)对SW626细胞增殖有明显的抑制作用(P<0.05),SDF-1可促进SW626细胞的迁移,CXCR4的封闭能抑制SDF-1对SW626迁移的这种促进作用(P<0.05)。结论:SDF-1及其受体CXCR4的相互作用可能在卵巢癌细胞增殖和迁移中发挥着重要作用,干扰SDF-1/CXCR4的相互作用可能成为治疗卵巢癌的一个有意义的靶点和策略。

mdrl启动子调控胞嘧啶脱氨酶-尿嘧啶磷酸核糖转移酶融合基因对卵巢癌裸鼠耐药移植瘤的抑制作用

目的：观察人多药耐药基因mdr1启动子调控的胞嘧啶脱氨酶-尿嘧啶磷酸核糖转移酶融合自杀基因（CD：：upp）对紫杉醇耐药卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用及对荷瘤裸鼠生存时间的影响。方法：建立卵巢癌耐药及非耐药细胞的裸鼠模型，将含mdr1-CD：：upp的重组腺病毒0．1ml（1×10^9pfu／ml）注入裸鼠皮下移植瘤体内，腹腔内注射5-氟胞嘧啶（5-FC），观察各组裸鼠肿瘤生长速度及存活时间。结果：实验组裸鼠移植瘤明显受到抑制，与对照组的差异有统计学意义（P〈0．05）。实验组荷瘤裸鼠的生存时间明显延长，对照组在69天内全部死亡，差异有统计学意义（P〈0．001）。结论：mdr1启动子调控的CD：：upp基因能特异性地抑制卵巢癌裸鼠耐药移植瘤的生长并延长生存时间。

卵巢癌成纤维细胞通过肝细胞生长因子促进癌细胞侵袭作用的研究

目的:探讨卵巢癌相关成纤维细胞(CAFs)分泌因子,特别是肝细胞生长因子(HGF)对卵巢癌细胞株CAOV3侵袭迁移作用的影响。方法:通过RT-PCR检测CAFs和卵巢正常成纤维细胞(NFs)中HGF mRNA的表达及与CAOV3体外共培养后两种成纤维细胞中HGF表达的变化。利用Transwell模型检测CAFs和NFs对CAOV3侵袭迁移的影响。用HGF中和性抗体拮抗CAFs和NFs分泌的HGF,检测CAFs和NFs对CAOV3侵袭迁移影响的变化。结果:CAFs比NFs表达更多的HGF(P<0.01),与CAOV3共培养后,HGF表达均增多(P<0.05)。与NFs相比,CAFs具有更强的促进CAOV3侵袭迁移的能力(P<0.01),但在HGF抗体作用后,两者的促侵袭能力减弱(P<0.01)。结论:卵巢癌细胞可促进其间质成纤维细胞HGF表达,而HGF过表达又反过来促进了自身的侵袭和迁移。

柯西中值定理的两种推广

将关于微分的柯西中值定理推广到函数处处存在单侧导数的情形;将关于定积分的柯西中值定理推广到n重积分的情形.

mdr1启动子调控CD∷UPP基因对紫杉醇耐药卵巢癌细胞的杀伤作用

目的:探讨腺病毒介导的mdr1启动子调控胞嘧啶脱氨酶∷尿嘧啶磷酸核糖转移酶(CD∷UPP)融合基因联合5-氟胞嘧啶(5-FC)对紫杉醇耐药卵巢癌细胞的特异性杀伤作用。方法:扩增、纯化含有mdr1-CD∷UPP基因的重组腺病毒,转染人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株A2780/Taxol和亲本细胞株A2780,RT-PCR检测mdr1和CD∷UPP基因的表达水平;之后加入5-FC,MTT法检测细胞抑制情况及旁观者效应,并观察腺病毒转染后裸鼠移植瘤的生长情况。结果:mdr1和CD∷UPP基因在A2780/Taxol细胞中可稳定表达,转染后A2780/Taxol组的细胞生长明显低于A2780组;转基因的A2780/Taxol细胞联合5-FC后可通过旁观者效应杀伤周围未转基因的耐药细胞;耐药组移植瘤生长明显受到抑制,肿瘤体积为(569.10±187.93)mm3,对照组肿瘤体积为(2111.98±230.82)mm3,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:mdr1启动子可调控CD∷UPP基因特异性表达并特异性杀伤紫杉醇耐药卵巢癌细胞。

腺病毒介导的靶向自杀基因对卵巢癌耐药细胞株的杀伤作用

目的研究多药耐药基因1(mdr1)调控的胞嘧啶脱氨酶-尿嘧啶磷酸核糖转移酶融合基因(CD∷UPP)联合5-氟胞嘧啶(5-FC)后对卵巢癌紫杉醇耐药细胞株生长的影响。方法以复制缺陷型重组腺病毒为载体,将mdr1-CD∷UPP基因分别转染2对人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株A2780/Taxol、SKOV3/Taxol及非耐药细胞株A2780和SKOV3,加入含5-FC的培养液培养,5 d后噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,观察旁观者效应。结果5-FC对转基因耐药细胞的生长抑制作用明显高于转基因的非耐药细胞,随着5-FC浓度增加,抑制作用增强;通过旁观者效应5-FC可杀伤周围未转基因的耐药细胞。结论mdr1-CD∷UPP靶向自杀基因联合5-FC后对紫杉醇耐药细胞具有显著的特异性杀伤作用。

NS-398对宫颈癌细胞系的增殖抑制作用及对survivin基因表达的影响

目的:研究选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398对宫颈癌HeLa,SiHa细胞系的增殖、凋亡作用及其对凋亡抑制基因survivin表达的影响。方法:体外培养宫颈癌HeLa,SiHa细胞系,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法分析不同浓度的NS-398分别作用于HeLa,SiHa细胞系24h、48h后对细胞增殖的作用;流式细胞仪(FCM)检测对细胞凋亡的作用;RT-PCR分析对凋亡抑制基因survivin表达的影响。结果:MTT检测显示,NS-398可抑制宫颈癌HeLa,SiHa细胞系增殖,并有浓度时间依赖性,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。FCM检测提示,NS-398可诱导HeLa,SiHa细胞系凋亡,有浓度依赖性,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR分析表明,NS-398可抑制HeLa,SiHa细胞系凋亡抑制基因survivinmRNA表达,与对照组的差异有统计学意义(P<0.05)。结论:NS-398可抑制宫颈癌HeLa,SiHa细胞增殖,诱导凋亡,其机制与抑制凋亡抑制基因survivin mRNA表达有关,为宫颈癌治疗提供了新的靶点和理论依据。

论一特殊线性系统的约当规范形

论述了线性系统同一特征值对应的约当块中有多个约当子块的情况下,其传递函数形式和结构图的实现,并给出了一种便于计算机编程实现的求其约当规范形的有效方法.

腹膜后路径在直肠子宫陷凹封闭的腹腔镜全子宫切除术中的应用

目的探讨腹膜后路径在直肠子宫陷凹封闭的腹腔镜全子宫切除术中的策略方法及其效果。方法对华中科技大学同济医学院附属协和医院2015年1月至2019年6月间所行直肠子宫陷凹封闭的腹腔镜全子宫切除术的临床资料进行分组研究。腹膜后路径组35例,腹膜内路径组40例,比较两组手术和围手术期并发症等情况。结果腹膜后路径组手术时间、术中出血量分别为(115.57±17.23)min、(75.71±40.89)mL,均少于腹膜内路径组[(140.88±18.32)min,(112.57±95.24)mL],差异均有统计学意义(均P<0.05)。两组患者术后体温恢复时间、肛门排气时间和住院时间比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。腹膜内路径组有1例中转开腹,1例术中出血量大于500 mL,而腹膜后路径组两者均无。两组均无膀胱、输尿管和肠管损伤。结论应用腹膜后路径对直肠子宫陷凹封闭的患者进行腹腔镜全子宫切除术,术中出血少,解剖层次清晰,未发现输尿管、肠管损伤,效果满意,值得推广。

手工旋切法在腹腔镜子宫肌瘤剔除术中的应用

目的探讨腹腔镜子宫肌瘤剔除术中手工旋切取出肌瘤的方法、可行性及其效果。方法对我院2017年8月至2019年8月间腹腔镜子宫肌瘤剔除术患者的临床资料进行分组研究,手工旋切组30例,电动旋切组30例,比较两组手术的肌瘤取出时间及术中、术后情况。结果手工旋切组的肌瘤取出时间为(8.50±3.26)min,电动旋切组的为(15.67±4.49)min,手工旋切组的肌瘤取出时间较电动旋切组的少,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者手术时间、术中出血量、体温恢复时间、肛门排气时间及住院天数比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论手工旋切法在腹腔镜子宫肌瘤剔除术中是完全可行的,其经济、方便而且安全可靠。

修正离散KP系列的流方程

该文主要研究修正离散KP系列的流方程问题,给出流方程的一般表示形式.

q-KP可积系列规范变换的交换性

证明了q-KP系列的两类规范变换TD和TI的交换性.

《故乡》英译本可接受性调查——以美国读者为例

国内对鲁迅作品译本潜在目的语读者的反应少有研究。该研究基于接受理论和尤金·奈达的测试理论,选取鲁迅作品《故乡》的两个英译本设计了两份问卷,邀请美国加州学生参与测试,调查两个译本在潜在目的语读者中的接受情况。结果表明,两个译本采取的不同翻译策略均会影响读者对原文的理解,不熟悉中国文化也是读者感到困惑的重要原因。总体而言,读者能够理解选段大意,也对中国文化表现出浓厚的兴趣,展现了中国文化外译的良好前景。

基于电力市场输电阻塞管理的数学模型分析

利用Matlab的逐步回归分析程序从观察者给出的数据中进行选取,再通过多元线性回归拟和,得到在各线路有功潮流值基于各发电机组出力情况下,通过设立目标函数和约束条件建立了一兼顾阻塞费用的模型。调整模型的目标函数既限制了电价的快速增长,又尽可能降低了因调整产生的阻塞费用,证明了该方法的可行性和有效性。

卵巢癌相关成纤维细胞对上皮性卵巢癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭活性的影响

目的:采用Transwell体外共培养体系,研究直接分离自卵巢癌的癌相关成纤维细胞CAFs对卵巢癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭活性的影响,探讨CAFs在上皮性卵巢癌进展中的作用。方法:采用0.4μm孔径的Tranwell小室进行CAFs或者NFs与卵巢癌细胞CAOV3体外共培养,用RT-PCR的方法检测共培养之后的卵巢癌细胞CAOV3中增殖细胞核抗原(PC-NA)表达的改变,以了解卵巢癌细胞增殖的变化。②用流式细胞仪检测共培养之后CAOV3细胞的细胞周期和Annexin-V/PI检测CAOV3细胞的凋亡情况。③用8μm孔径的Transwell小室建立卵巢癌CAFs与CAOV3细胞的交互作用模型,观测CAFs对CA-OV3细胞迁移特性的影响。④以Matrigel模拟重建基底膜,用8μm孔径的Transwell小室建立卵巢癌CAFs与CAOV3细胞的交互作用模型,观测CAFs对CAOV3细胞侵袭特性的影响。结果:与CAFs共培养之后卵巢癌细胞CAOV3的PCNA基因表达显著增高,并且随着CAFs细胞量的增加,CAOV3细胞增殖活性显著增强。同时CAFs细胞的PCNA基因表达下降,随着CAOV3细胞数量的增加,PCNA表达明显减少(P=0.011)。②采用流式细胞仪检测细胞周期的方法可以发现,与CAFs共培养之后CA-OV3细胞的凋亡显著减少(P=0.008),而在与NFs共培养之后的CAOV3细胞中未发现这一现象。③同时用Annexin-V/PI的方法,用流式细胞仪进行检测,也可以证实与CAFs共培养之后CAOV3细胞的凋亡显著减少(P=0.011),而与NFs共培养之后,CAOV3的凋亡没有明显变化。④与对照组相比CAFs或者NFs对CAOV3作用8h后,CAOV3迁移明显增加,但CAFs组的增加有极显著性(P<0.01)。⑤侵袭实验中发现,与对照组相比CAFs或者NFs对CAOV3作用24h后,CAOV3侵袭明显增强,但CAFs组的增强有极显著性(P<0.01)。结论:CAFs能促进卵巢癌CAOV3细胞的增殖,减少其凋亡,并且两种成纤维细胞对卵巢癌细胞均有促迁移和侵袭的作用,但是CAFs的作用更加显著。这些发现提示,在CAFs与卵巢癌CAOV3细胞的交互作用中,产生的信号因子能够促进卵巢癌的进展。

卵巢癌相关成纤维细胞和正常卵巢成纤维细胞的基因表达差异

目的:对卵巢癌相关成纤维细胞(Carcinoma-associated fibroblasts,CAFs)及卵巢正常成纤维细胞(Normalfibroblasts,NFs)进行分离、培养、纯化,并分析两者多种基因表达的差异。方法:①用组织块贴壁培养法获得原代卵巢癌CAFs和卵巢NFs,通过胰酶消化法和反复传代法进行细胞的纯化;②观察细胞形态,多种基因的免疫细胞化学染色检测及相应mRNA的半定量分析,对CAFs和NFs进行初步鉴定;③应用RT-PCR的方法对CAFs和NFs中多种基因进行分析比较。结果:①获得了纯化的卵巢CAFs和NFs;②卵巢CAFs的细胞免疫化学染色α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)染色呈阳性,角蛋白呈阴性,卵巢NFs波形蛋白(Vimentin)阳性,而α-SMA和细胞角蛋白阴性;③卵巢CAFs与NFs中Vimentin与α-SMA的mRNA发现均有表达,但CAFs中表达增加,差异有统计学意义(P<0.05);④与NFs相比,CAFs中多种mRNA的表达增加,其中包括生长因子,血管生成促进因子,细胞因子等。结论:与NFs相比,CAFs在mRNA、蛋白表达等方面均有统计学差异;卵巢癌中CAFs基因表达的检测表明,其基因表达有显著变化,提示这些成纤维细胞可能为卵巢癌细胞的生长提供了最适合的微环境。推测卵巢-宿主界面微环境在上皮性卵巢癌的发展中可能起重要作用。

膀胱侧入分离法在膀胱子宫陷凹封闭的腹腔镜下全子宫切除术中的应用

目的对膀胱子宫陷凹封闭的患者采取腹腔镜膀胱侧入分离法进行全子宫切除术的临床疗效进行评价分析。方法对我院2015年1月至2019年1月间腹腔镜下膀胱子宫陷凹封闭的全子宫切除术60例患者,根据下推膀胱的方法分为:侧入组30例,直入组30例,比较两组手术和围手术期并发症情况。结果侧入组的平均手术时间[(108.50±13.59)min]短于直入组[(117.83±14.24)min],差异有统计学意义(P <0.05)。两组患者的术中出血量、术后体温恢复时间、肛门排气时间和住院时间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。直入组1例中转开腹和1例膀胱损伤,侧入组无一例发生。结论对于膀胱子宫陷凹封闭的患者采取腹腔镜膀胱侧入分离法进行全子宫切除术,手术时间短、解剖层次清晰、未发现膀胱损伤、效果满意,值得推广。

卵巢上皮性癌组织中p16INK4A基因表达缺陷的意义及其与甲基化的关系

目的研究抑癌基因p16INK4A在卵巢上皮性癌(卵巢癌)组织及细胞系中的表达变化,分析其表达变化与甲基化的关系。方法选取7种卵巢癌细胞系、18份卵巢癌组织和10份正常卵巢组织为研究对象。采用甲基化特异性PCR方法检测p16INK4A基因甲基化状态;RT-PCR技术检测p16INK4A基因的mRNA表达;蛋白印迹(western blot)法检测P16INK4A蛋白的表达。5-杂氮-2′-脱氧胞苷对p16INK4A基因甲基化的卵巢癌细胞进行去甲基化处理,再次进行p16INK4A基因的mRNA和蛋白表达的检测,以及p16INK4A基因甲基化的分析。检测5-杂氮-2′-脱氧胞苷处理前后卵巢癌细胞的生长情况;并将处理前后的细胞接种于裸鼠,观测肿瘤的体积、重量。结果3种卵巢癌细胞系(Anglne、SW626和OVCAR3细胞)、6份卵巢癌组织中存在p16INK4A基因甲基化,卵巢癌细胞和卵巢癌组织中的甲基化率分别为3/7和33%(6/18)。卵巢癌细胞系、卵巢癌组织和正常卵巢组织中,p16INK4A基因的mRNA相对含量的平均值分别为0·34±0·11、0·81±0·13、1·52±0·12,蛋白相对含量的平均值分别为0·56±0·14、1·32±0·12、2·09±0·11,卵巢癌细胞系、卵巢癌组织分别与正常卵巢组织相比,差异均有统计学意义(P<0·05)。有甲基化表现的卵巢癌细胞和组织中p16INK4A基因的mRNA和蛋白表达均下降。5-杂氮-2′-脱氧胞苷处理能使p16INK4A基因甲基化的卵巢癌细胞中的p16INK4A基因的mRNA和蛋白重新表达或表达增高。与去甲基化处理前比较,去甲基化处理后Anglne、SW626和OVCAR3细胞的生长速度均减慢;接种去甲基化处理的OVCAR3细胞的裸鼠中,肿瘤体积和重量明显减小,分别为(0·243±0·022)cm3、(0·035±0·004)g。结论p16INK4A基因的表达下降或缺失在卵巢癌的发生中起重要作用,DNA甲基化是其表达缺陷的原因,去甲基化处理可以恢复p16INK4A基因的表达并抑制卵巢癌细胞的增殖。