安肠愈疡汤对溃疡性结肠炎大鼠三叶因子3蛋白表达及肠道菌群的影响

目的观察安肠愈疡汤对溃疡性结肠炎大鼠三叶因子3(TFF3)蛋白表达及肠道菌群的影响。方法36只SD大鼠随机分为空白组、模型组、美沙拉嗪组和中药低、中、高剂量组,除空白组外,其余5组均自由饮用4.5%DSS溶液7 d制备溃疡性结肠炎大鼠模型,各给药组于造模第2日开始分别给予相应浓度药物干预,连续2周。干预结束后行结肠黏膜组织病理学评分,Western blot检测结肠组织TFF3蛋白表达,16S rDNA高通量测序分析粪便菌群。结果与空白组比较,模型组大鼠结肠组织病理学评分升高,TFF3蛋白表达下调,肠道菌群丰度、多样性降低,拟杆菌属丰度升高,乳杆菌属丰度下降;与模型组比较,各给药组结肠组织病理学评分降低,TFF3蛋白表达上调,肠道拟杆菌属丰度下降,乳杆菌属丰度升高,其中中药高剂量组差异最明显,中药中、高剂量组和美沙拉嗪组肠道菌群丰度、多样性升高。结论安肠愈疡汤可通过上调肠黏膜修复因子表达,恢复肠道菌群多样性,促进益生菌生长,抑制致病菌生长,进而修复肠黏膜。

安肠愈疡汤对溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜屏障的修复作用及机制研究

[目的]观察中药安肠愈疡汤对溃疡性结肠炎(UC)大鼠咬合蛋白(Occludin)、紧密连接蛋白1(Claudin-1)基因、蛋白及白细胞介素-13(IL-13)/酪氨酸激酶1(JAK1)/信号转导与转录激活因子6(STAT6)信号通路的调控作用,探讨其修复肠黏膜屏障的机制。[方法]将36只SD大鼠随机分为6组,分别为空白组、模型组、美沙拉嗪对照组、安肠愈疡汤低、中、高剂量组,经4.5%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液造模及药液灌胃后处死大鼠,留取标本,苏木精-伊红(HE)染色检测各组大鼠结肠黏膜组织病理情况,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法、蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测结肠组织Occludin、Claudin-1基因、蛋白的表达,RT-PCR法检测IL-13、JAK1、STAT6基因的表达。[结果]各用药组均明显降低组织病理学评分,差异均具有统计学意义(P<0.01),镜下表现为结肠组织结构好转,炎细胞浸润减轻,均可上调Occludin、Claudin-1基因及蛋白表达(P<0.01),差异均具有统计学意义;除低剂量组外,余用药组不同程度激活IL-13/JAK1/STAT6通路的基因表达(P<0.05或P<0.01);以中药高剂量组和美沙拉嗪组的作用最为显著,差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。相关性分析发现,Occludin、Claudin-1表达水平与JAK1、STAT6表达水平呈负相关(r=-0.664,r=-0.654,r=-0.629,r=-0.637,P<0.05),与IL-13表达水平呈正相关(r=0.888,r=0.983,P<0.05),差异均具有统计学意义。[结论]中药安肠愈疡汤能够明显促进UC大鼠肠黏膜修复,其作用机制可能与激活IL-13/JAK1/STAT6信号通路,上调Occludin和Claudin-1的表达水平有关。

基于肠道菌群探讨安肠愈疡汤联合美沙拉秦治疗溃疡性结肠炎的作用机制

目的在课题组前期研究基础上,进一步观察中药安肠愈疡汤联合西药美沙拉秦对溃疡性结肠炎(UC)患者内镜下黏膜愈合、组织学缓解的疗效及对肠道菌群的调控作用,探讨其治疗UC的深层机制。方法选取符合纳排标准的UC患者23例,作为观察组,给予安肠愈疡汤联合美沙拉秦口服,连续治疗12周,比较观察组治疗前后结肠镜Baron积分、组织病理学Geboes评分。健康志愿者10例,作为对照组。通过16S rRNA测序技术检测对照组及观察组治疗前、后肠道菌群分布,观察安肠愈疡汤联合美沙拉秦对肠道菌群的调控作用。结果(1)观察组治疗后Baron积分及Geboes评分较治疗前均明显下降(P<0.01);(2)观察组治疗前菌群多样性及丰富度均降低,治疗后菌群多样性及丰富度均有回升,且PCoA分析显示观察组肠道菌群在治疗后更接近健康对照组;(3)观察组治疗前具有较低的厚壁菌门(Firmicutes)、布劳特氏菌属(Blautia)、柔嫩梭菌属(Faecalibacterium)等有益菌丰度,治疗后菌群丰度回调,且Blautia在治疗后具有明显菌群优势(P<0.05),而致病菌埃希氏-志贺氏菌属(Escherichia-Shigella)在治疗后丰度下调(P<0.05)。结论UC患者肠道菌群组成与健康人有显著差异,其肠道菌群多样性、丰富度减少,有益菌丰度减少,致病菌丰度增加,这与国内外学者研究结果一致。安肠愈疡汤联合美沙拉秦不仅在实现UC内镜下黏膜愈合、组织学缓解方面疗效显著,而且可调控UC患者肠道菌群,提高其多样性、丰富度,增加有益菌,减少致病菌。结合本课题组前期研究结果,安肠愈疡汤联合美沙拉秦可能通过提高肠道菌群的丰富度与多样性,增加Blautia、Faecalibacterium等有益菌丰度,影响以NF-κB等为主的信号通路,从而达到治疗UC的目的。