目的建立microRNA失功能(loss of function)研究模型,为功能研究提供实验材料。方法针对miR-483-5p成熟体序列设计含6个拷贝反义序列的DNA片段,称为"S-483",将其连接入含CAG启动子的pCAGGs载体中,构建pCAGGs-S-483重组质粒。...目的建立microRNA失功能(loss of function)研究模型,为功能研究提供实验材料。方法针对miR-483-5p成熟体序列设计含6个拷贝反义序列的DNA片段,称为"S-483",将其连接入含CAG启动子的pCAGGs载体中,构建pCAGGs-S-483重组质粒。利用脂质体技术瞬时转染Hep1-6细胞,经re-al-time PCR对成熟miR-483-5p含量进行检测。结果转染pCAGGs-S-483组miRNA-483含量(0.33±0.04)较转染空质粒组(1.00)明显下降(P<0.01),但对其它miRNAs无影响。结论 S-483海绵策略可有效"吸附"并降低miR-483-5p,成功构建了pCAGGs-S-483重组质粒,为其功能研究和miRNA敲减动物的建立提供了有益借鉴。展开更多
目的探讨miR-483过表达是否影响小鼠记忆功能。方法选取C57BL/6低龄(3月龄)及高龄(13月龄)的野生型及miR-483转基因鼠,进行新物体识别实验检测记忆能力。PCR筛选实验鉴定转基因阳性小鼠后,分析两种小鼠记忆能力的差异。运用实时定量PCR...目的探讨miR-483过表达是否影响小鼠记忆功能。方法选取C57BL/6低龄(3月龄)及高龄(13月龄)的野生型及miR-483转基因鼠,进行新物体识别实验检测记忆能力。PCR筛选实验鉴定转基因阳性小鼠后,分析两种小鼠记忆能力的差异。运用实时定量PCR方法检测各组小鼠脑中miR-483表达水平,以及记忆相关分子在脑中的表达趋势。通过Western blot方法检测小鼠脑中记忆相关蛋白的表达水平。结果低龄转基因型小鼠与低龄野生型小鼠新物体识别次数差异具有统计学意义,低龄野生型鼠记忆能力更强;低龄转基因小鼠脑中细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)表达量高于低龄野生型小鼠。结论在低龄小鼠中,miR-483过表达导致记忆损伤,同时引起脑部ERK表达水平的上调。展开更多
文摘目的建立microRNA失功能(loss of function)研究模型,为功能研究提供实验材料。方法针对miR-483-5p成熟体序列设计含6个拷贝反义序列的DNA片段,称为"S-483",将其连接入含CAG启动子的pCAGGs载体中,构建pCAGGs-S-483重组质粒。利用脂质体技术瞬时转染Hep1-6细胞,经re-al-time PCR对成熟miR-483-5p含量进行检测。结果转染pCAGGs-S-483组miRNA-483含量(0.33±0.04)较转染空质粒组(1.00)明显下降(P<0.01),但对其它miRNAs无影响。结论 S-483海绵策略可有效"吸附"并降低miR-483-5p,成功构建了pCAGGs-S-483重组质粒,为其功能研究和miRNA敲减动物的建立提供了有益借鉴。
文摘目的探讨miR-483过表达是否影响小鼠记忆功能。方法选取C57BL/6低龄(3月龄)及高龄(13月龄)的野生型及miR-483转基因鼠,进行新物体识别实验检测记忆能力。PCR筛选实验鉴定转基因阳性小鼠后,分析两种小鼠记忆能力的差异。运用实时定量PCR方法检测各组小鼠脑中miR-483表达水平,以及记忆相关分子在脑中的表达趋势。通过Western blot方法检测小鼠脑中记忆相关蛋白的表达水平。结果低龄转基因型小鼠与低龄野生型小鼠新物体识别次数差异具有统计学意义,低龄野生型鼠记忆能力更强;低龄转基因小鼠脑中细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)表达量高于低龄野生型小鼠。结论在低龄小鼠中,miR-483过表达导致记忆损伤,同时引起脑部ERK表达水平的上调。