低氧调控p53RFP基因启动子活性的初步研究

目的观察低氧对p53RFP基因表达及启动子活性的影响,探索低氧反应元件(HRE)是否参与了低氧对p53RFP基因启动子活性的调控。方法将HEK293细胞置于低氧条件下培养,实时定量PCR及Western blot检测p53RFP mRNA及蛋白表达水平;通过定点突变技术构建HRE突变型p53RFP启动子双荧光素酶报告基因载体并转染HEK293细胞,分别置于常氧和低氧条件下培养,双荧光素酶报告基因检测系统检测启动子活性。结果低氧处理不同时间点p53RFP mRNA表达水平均显著增加,差异有统计学意义(F=96.493,P<0.001);低氧组p53RFP及HIF-1α蛋白表达量均呈时间依赖性递增。成功构建了HRE突变型p53RFP启动子双荧光素酶报告基因载体,双荧光素酶报告基因检测显示,与常氧组相比,低氧条件下野生型p53RFP基因启动子活性增加(t=-19.504,P<0.001),HRE单突变或双突变后启动子活性均较野生型降低(F=160.891,P<0.001)。结论低氧可诱导p53RFP基因表达上调;成功构建了HRE突变型p53RFP双荧光素酶报告基因载体,HRE位点可能在低氧调控p53RFP基因启动子活性中发挥关键作用。

房颤与认知障碍的因果关系:一项孟德尔随机化研究

目的探讨心房颤动(房颤)与认知障碍之间的因果关系。方法采用两样本孟德尔随机化(Mendelian randomization,MR)分析方法,利用房颤的大规模全基因组关联研究(genome-wide association study,GWAS)汇总数据集,提取与房颤强相关的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)作为工具变量。基于公开的认知功能障碍的GWAS数据,分别提取SNPs与阿尔茨海默病性痴呆、帕金森病痴呆、血管性痴呆、路易体痴呆、额颞叶痴呆、未定义的痴呆、总体认知功能评估等的关联程度。采用逆方差加权法(inverse variance weighted,IVW)进行主要分析,Cochran′s Q检验、MR-Egger回归、留一法(leave-one-out)进行敏感性分析。为了验证结果的稳健性,使用不同GWAS数据进行重复分析及荟萃分析。结果初次分析从一项涉及多达1030836名个体的全基因组关联研究荟萃分析中提取了101个SNPs作为工具变量,IVW结果未发现房颤与认知障碍的因果联系[痴呆:OR=1.032(95%CI 0.973~1.094),P=0.290;帕金森病痴呆:OR=1.004(95%CI 0.780~1.291),P=0.977;血管性痴呆:OR=1.123(95%CI 0.969~1.301),P=0.125;未定义的痴呆:OR=1.013(95%CI 0.910~1.129),P=0.807]。重复分析从FinnGen网站的房颤GWAS数据提取了27个SNPs作为工具变量,IVW结果与初次分析一致[认知功能:OR=0.999(95%CI 0.982~1.016),P=0.874;阿尔茨海默病性痴呆:OR=0.977(95%CI 0.943~1.012),P=0.193;路易体痴呆:OR=1.014(95%CI 0.898~1.145),P=0.826;额颞叶痴呆:OR=0.996(95%CI 0.745~1.333),P=0.980]。2次孟德尔随机化分析及荟萃分析均表明遗传预测的房颤与不同类型痴呆及总体认知功能评估均无相关证据。MR-Egger回归提示不存在水平多效性,留一法逐个剔除SNP后发现结果稳定。结论未发现房颤与认知障碍之间的因果关系证据。在观察性研究中观察到的关联可部分归因于共同的生物学或共患病等混杂因素。

虎杖苷对缺血缺氧下平滑肌细胞蛋白激酶C的影响

目的 观察虎杖苷对缺血缺氧作用下血管平滑肌细胞(VSMC)蛋白激酶C(PKC)活性的影响以探讨其抗休克作用的机制。方法 取大鼠胸主动脉培养VSMC,用Koyama方法复制VSMC缺血缺氧模型。用液体闪烁计数仪测定PKC的活性。结果 缺血缺氧状态下VSMC胞浆PKC的活性上升(vs正常组P<0 .05),但胞膜的PKC活性下降(vs正常组P<0 .05),经PD治疗后胞浆PKC的活性下降(vs缺血缺氧组、治疗对照组P<0. 05,vs正常组P>0 05 ),胞膜的PKC活性上升(vs缺血缺氧组、治疗对照组P<0 .05,vs正常组P>0 .05)。结论 PD对缺血缺氧作用下的VSMCPKC的活性有调节作用,这可能是PD抗休克作用的分子机制之一。

虎杖苷对缺血缺氧下心肌细胞蛋白激酶C的影响

目的探讨虎杖苷对缺血缺氧作用下心肌细胞蛋白激酶C(PKC)活性的影响及其抗休克的机制。方法取大鼠乳鼠心室肌培养心肌细胞,用Koyama方法复制心肌细胞缺血缺氧模型。用γ-闪烁计数仪测定PKC的活性。结果正常状态下心肌细胞胞质PKC经虎杖苷(PD)刺激后活性下降(vs正常组P<0.05),但胞膜的PKC活性上升(vs正常组P<0.05)。缺血缺氧后胞质和胞膜PKC的活性均下降(vs正常组P<0.05),再经PD处理后胞质胞膜的PKC活性均上升(vs缺血缺氧组P<0.05,vs正常组P>0.05)。结论PD对缺血缺氧作用下的心肌有保护作用,可能是通过调节PKC的活性来发挥作用的,这可能是PD抗休克的分子机制之一。

虎杖苷对烧伤血清和LPS作用下大鼠平滑肌细胞蛋白激酶C活性的影响

目的:观察虎杖苷(PD)对烧伤血清和脂多糖(LPS)作用下大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)蛋白激酶C(PKC)活性的影响,探讨其抗休克的机制.方法:取大鼠胸主动脉培养VSMC,用烧伤血清和LPS刺激VSMC后,γ-闪烁计数仪测定PKC活性.结果:烧伤血清作用后VSMC胞质PKC的活性下降(vs正常组P<0.05),但胞膜的PKC活性上升(vs正常组P<0.05),经PD治疗后胞质PKC的活性上升(vs烧伤组、治疗对照组P<0.05,vs正常组P>0.05),胞膜的PKC活性下降(vs烧伤组、治疗对照组P<0.05,vs正常组P>0.05).LPS刺激后VSMC胞质与胞膜PKC的活性均上升(vs正常组P<0.05),经PD处理后其活性又均下降(vsLPS组、治疗对照组P<0.05,vs正常组P>0.05).结论:PD对烧伤血清和LPS作用下的VSMC的保护作用可能是通过调节PKC的活性来发挥作用的,这可能是其抗休克的分子机制之一.

虎杖苷对肺血管内皮细胞一氧化氮的影响

目的观察虎杖苷(PD)对肺血管内皮细胞(PECs)正常及缺氧培养条件下合成一氧化氮(NO)的影响从而探讨PD抗休克的可能作用机制。方法将Griess试剂加入培养液中,用紫外分光光度计测量Griess试剂与NO2-反应的OD值,通过绘制的OD-NO2-标准曲线计算NO的值。分别观测了PD在不同时间点及不同浓度下对PECs的NO表达量的影响,并观察了PD对缺氧条件下PECs表达NO的影响。结果随着PD浓度的增加,PECs的NO表达量增高,最高为(30.86±2.83)μmol/L,与对照组相比差异有显著性(P<0.01)。随着PD作用时间的延长,PECs合成NO的量也逐渐增加,以24h最高,为(29.69±4.51)μmol/L,与起始点相比差异有显著性(P<0.01)。缺氧刺激下,PECs的NO表达量下降,PD可以对抗此作用。结论PD可能通过调节内皮细胞的NO表达量来发挥其抗休克的作用,这可能是其抗休克的分子作用机制之一。

山楂对心血管系统的药理作用研究

综述了近年来的临床和实验研究 ,认为山楂有降低血清总胆固醇、甘油三酯 ,促进心肌收缩和保护心肌不受损害 ,抗动脉粥样硬化 ,降低血压 ,改善血液流变学等作用。今后应深入进行山楂单体成份作用及机理和临床药效的研究 ,以扩大其应用前景。

干细胞移植治疗冠心病的应用进展

干细胞移植治疗急性心肌梗死在基础和临床研究中均倍受争议。目前从骨髓干细胞移植后临床试验的尸检报告已经确定干细胞可以分化成心肌细胞。目前用于移植的干细胞主要分为胚胎干细胞和成体干细胞,胚胎干细胞增殖活跃且具有全能性,但由于其安全性而很难进入临床。成体干细胞主要包括骨骼肌干细胞、骨髓干细胞以及心脏干细胞等,成体干细胞由于没有移植排斥及明显的副作用已经进入临床,其中应用较广的是骨髓干细胞,但对其有效性也充满了争议。移植的时机和方式也是目前人们关注的热点,尚没有统一的认识。干细胞移植后所引起的心肌梗死、心律失常等副作用已经引起了人们的关注。

EnSite Velocity指导下室上速、室性心律失常的绿色消融

零X线下进行电生理的各类射频消融手术被称作"绿色消融"。随着医疗器械设备的完善和术者临床操作水平的提高,它已成为治疗快速心律失常的重要方法。绿色消融具有无辐射、成功率高、并发症少等优点,能高效安全地完成电生理手术。Ensite Velocity三维电解剖系统具备较好的兼容性,任何导管只要与体内接触产生电阻后即可显示,可利用任何导管进行血管径路和心腔建模。2017年6至9月,南方医科大学南方医院在Ensite Velocity系统指导下尝试进行了22例零X线绿色消融,成功消融21例,1例左侧旁路因患者身材矮小致导管不能到位而失败,改为X线透射下成功消融。手术种类包括普通室上速、三尖瓣峡部依赖型房扑、右室流出道室早等。零X线下能完成绝大部分室上速和常规室早的消融,但也存在一些缺陷,如不能实时显示血管和心脏解剖结构、对术者操作手感要求较高、成本更高等。实施零X线手术时应当有床旁超声,以备安全;最好能在数字减影血管造影室进行手术,以便消融失败时能立即改为X线透射下消融。

中医与现代医学科学实验

[目的]通过评析西方现代科学对中医价值评判的影响,认为现代医学科学实验与传统中医相比具有可控性、再现性等优点,但由于其面向简单性的主流,而很难完善地解释生命这个超级复杂系统。故认为中医今后的发展应按照自身规律,提出新的中医理论的学说,而不应总是强调现代医学科学实验的解释途径。

益气通络丹对缺血缺氧刺激下心肌细胞蛋白激酶C活性的影响

目的观察益气通络丹对缺血缺氧条件下心肌细胞蛋白酶C的影响以探讨其治疗缺血缺氧性心血管疾病的机制。方法取大鼠乳鼠心脏心室肌培养心肌细胞,用Koyama方法复制心肌细缺血缺氧环境。经益气通络丹大鼠血清处理细胞后,应用液体闪烁计数仪测定PKC(protein kinase C,蛋白激酶C)的活性。结果与正常组比较缺血缺氧状态下心肌细胞胞浆和胞膜的PKC活性均下降(P<0.05),与缺血缺氧组比较经益气通络丹治疗后胞浆和胞膜的PKC活性均有所上升(P<0.05)。结论益气通络丹对缺血缺氧性心血管疾病的治疗作用可能与调节心肌细胞的PKC活性有关。

左右冠共同开口右窦并伴左窦发出动脉残根病人1例的介入治疗

患者,男,49岁。主因发作性胸闷10 d,活动后气促6 d于2011-02-15入我院。患者于10天前因旅途劳累突发胸闷入澳门医院,伴有左上肢麻痹,入院后诊为"急性ST段抬高下壁心肌梗死",予以溶栓(具体药物不详)等治疗后患者胸闷症状缓解,于3天后治疗出院并回至当地。诉于澳门出院后1 d活动后出现气促,休息可缓解,偶伴胸闷,程度不如先前严重。不伴尿少、水肿等不适。未予重视和诊治,气促仍时有发作。今为求进一步诊治于。既往于2010年12月体检时发现糖尿病,未予规律治疗。无吸烟饮酒史。入院查体:血压95/70 mm Hg,心率105次/分,余未见特殊。辅助检查:cTnI 2.57 ng/L,CK-MB正常。糖化血红蛋白:7.8 mg/L。18导联心电图示:窦性心律,下壁导联Ⅱ、ⅢQRS波,未有ST异常改变。超声心动图示:左室下壁室壁变薄、运动减弱,各房室腔不大,二尖瓣轻度返流,LVEF52%。入院后经利尿、抗栓治疗后,患者气促症状缓解。于201 1-02-17行冠脉造影示:用6F JR4造影冠示,左冠与右冠同开口于右窦,右冠近段夹层形成,最狭窄处约90%。左冠经右窦发出长干后主要供血左室前侧壁,同时从开口处发出一细小动脉供应室间隔。于右冠近段植入Promus 3.5/20 mm药物支架。经冠脉双元螺旋CT三维重建证实,左右冠共同开口于右窦,且同时发出一细小动脉。左窦发出一动脉残根,未有分支。

左右冠状动脉右冠状窦共同开口介入治疗一例

患者,男性,49岁。患者于10天前因旅途劳累突发胸闷2小时入旅游地医院,入院时心电图（ECG）和心肌酶等结果不详,诊为＂下壁急性ST段抬高心肌梗死＂,予以溶栓（具体药物不详）等治疗后症状缓解,治疗3天后出院并回至当地.

HIF-1α调控p53RFP基因的转录调控元件鉴定

目的分析具有血管生长调节重要功能的转录因子HIF-1α是否通过调控P53RFP的启动子区域而发挥调节作用,并对其元件进行鉴定。方法 HIF-1α和Lac Z相比,应用荧光定量PCR检测HIF-1α、P53RFP、P53 mRNA水平表达的变化。PCR扩增不同长度(1780 bp,1200 bp,780 bp)P53RFP基因启动子片段,引入KpnⅠ和HindⅢ双酶切位点,克隆入萤光素酶报告载体PGL3-basic中。HEK393A细胞共转染萤光素酶报告载体,PcDNA 3.1(+)-HIF-1α以及海肾萤光素酶载体PRL-SV40,以PGL3-control做阳性对照。48小时后检测双萤光素酶活性。结果与LacZ相比,HIF-1α组HIF-1α,P53RFP mRNA表达升高,而P53表达无变化。成功构建P53RFP不同长度片段的启动子萤光素酶报告载体;各组相对萤光素活性分别为:control组0.0483±0.0035;PGL3-1780bp组0.4990±0.1441;PGL3-1200 bp组0.4460±0.071 1:PGL3-780 bp组0.5223±0.0659。各实验组萤光素酶活性均高于control组(P<0.05);各实验组间无显著性差异(P>0.05),表明HIF-1α基因对三个不同长度片段的启动子活性的影响无显著差异。结论 HIF-1α可以促进P53RFP表达增高,而P53RFP基因的转录调控因子P53表达无变化;HIF-1α对P53RFP的调控可能通过其启动子区域的核心元件发挥作用。

急性冠脉综合征和冠脉慢性完全闭塞患者MMP2、MMP9升高及临床意义

目的观察不同类型冠心病患者MMP2和MMP9水平的变化,探讨MMP2和MMP9在预测急性冠脉综合征(ACS)中的临床意义。方法在我院心内科住院患者118例,依临床表现和冠脉造影结果分为ACS组(49例),包括不稳定性心绞痛亚组(UAP)30例和急性心肌梗死亚组(AMI)19例;非ACS冠心病组患者(44例),包括稳定性心绞痛亚组(SAP)23例、冠脉慢性完全闭塞亚组(CTO)21例。对照组为正常冠状动脉组(NCA)25例。用夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测动脉血浆MMP2、MMP9水平。结果ACS组患者血浆MMP9、MMP2水平明显高于NCA组(P<0.01)和非ACS冠心病组(P<0.05);非ACS冠心病组MMP9水平(P<0.001)和MMP2水平(P<0.05)也较NCA组明显升高。与NCA组比较,UAP亚组、AMI亚组及CTO亚组MMP9显著增高(P<0.01),MMP2也明显增高(P<0.05)。与SAP和UAP亚组比较,AMI亚组只有MMP9水平增高(P<0.05),而CTO亚组MMP9、MMP2水平均明显升高(P<0.01);CTO亚组MMP9、MMP2水平明显高于AMI亚组(P<0.05)。结论患者血MMP2、MMP9水平显著升高提示了粥样斑块的不稳定性,并与ACS病情严重程度相一致,有可能作为ACS的预测指标之一,并可能是诊断冠脉慢性完全闭塞很好的生物标志物。

亲和素桥连构建携抗P-选择素单抗靶向超声微泡及体外荧光鉴定

目的体外荧光方法鉴定生物素-亲和素-生物素(BSB)桥连技术构建携带抗P-选择素单抗靶向超声微泡(MB-BSBp)的可靠性。方法不同荧光标记物分别标记MB-BSBp的不同部位,观测微泡荧光强度(0、1、2和3级),以普通脂质超声微泡(MB)作对照。结果加入FITC荧光亲和素孵育,生物素化脂质微泡(MB-B)呈现明亮的绿色荧光(3级),而MB无荧光显示(0级)。以两个浓度梯度(1∶4和1∶16)的DTAF荧光二抗(抗抗P-选择素单抗抗体)标记MB、MB-B、MB-BS和MB-BSBp,MB-BSBp在两个浓度梯度下均发出明亮的绿色荧光(3级);而MB-B、MB-BS仅在1∶4时显示微弱的绿色荧光(1级),MB在两个浓度梯度下均无荧光显示(0级)。结论抗P-选择素单抗通过亲和素桥连有效装配在MB-B表面,体外荧光法是鉴定靶向微泡配体连接可靠性的简便方法。

人3突变型低氧诱导因子1α真核表达载体和腺病毒表达载体的构建及鉴定

目的为了深入研究人低氧诱导因子1α基因对冠心病的血管新生作用,构建人3突变型低氧诱导因子1α腺病毒表达载体(pAdeno-HIF-1α-Ala402-Ala564-Ala803)。方法双酶切pShuttle2-HIF-1α-Ala402-Ala564、pShuttle2-HIF-1α-Ala564-Ala803,凝胶回收前者酶切片段中大小为300bp的小片段及后者酶切片段中大小为6300bp的大片段,并将两者连接,重组成3突变型穿梭质粒pShuttle2-HIF-1α-Ala402-Ala564-Ala803,并进行酶切和PCR鉴定。鉴定正确后,采用分子克隆技术,以PI-SceI和I-CeuI双酶切重组3突变型穿梭载体,获得含有3突变型HIF-1α(pShuttle2-HIF-1α-Ala402-Ala564-Ala803)的表达盒,通过体外连接法与线性化的腺病毒骨架载体Adeno-XTM Viral DNA连接,重组成3突变型腺病毒载体(pAdeno-HIF-1α-Ala402-Ala564-Ala803),再进行酶切及测序鉴定。结果经酶切鉴定及基因测序证实重组3突变型真核表达载体和腺病毒表达载体质粒构建成功。结论成功构建重组人3突变型低氧诱导因子1α真核表达载体(pShuttle2-HIF-1α-Ala402-Ala564-Ala803)和人3突变型低氧诱导因子1α腺病毒表达载体(pAdeno-HIF-1α-Ala402-Ala564-Ala803)。

血浆基质金属蛋白酶2和组织型基质金属蛋白酶抑制剂2水平变化与急性冠状动脉综合征的关系

目的探讨不同类型冠心病患者基质金属蛋白酶2、组织型基质金属蛋白酶抑制剂2水平及其比值变化,分析其在急性冠状动脉综合征中的临床意义。方法经冠状动脉造影的118例心内科住院患者,依据其临床表现和冠状动脉造影结果分组:急性冠状动脉综合征患者49例,其中包括不稳定型心绞痛患者30例、急性心肌梗死患者19例;非急性冠状动脉综合征冠心病患者44例,包括稳定型心绞痛患者23例、冠状动脉慢性完全闭塞患者21例;25例冠状动脉正常患者为对照组。采用夹心酶联免疫吸附法检测动脉血浆基质金属蛋白酶2和组织型基质金属蛋白酶抑制剂2水平。结果急性冠状动脉综合征和非急性冠状动脉综合征患者血浆基质金属蛋白酶2、组织型基质金属蛋白酶抑制剂2水平均明显高于对照组(P<0.05),且基质金属蛋白酶2/组织型基质金属蛋白酶抑制剂2比值均显著高于对照组(P<0.01);与非急性冠状动脉综合征患者比较,急性冠状动脉综合征患者基质金属蛋白酶2、组织型基质金属蛋白酶抑制剂2水平及基质金属蛋白酶2/组织型基质金属蛋白酶抑制剂2比值均显著增高(P<0.05和P<0.01);与对照组比较,不稳定型心绞痛组、急性心肌梗死组和冠状动脉慢性完全闭塞组基质金属蛋白酶2水平明显增高(P<0.05和P<0.01),不稳定型心绞痛组、稳定型心绞痛组和冠状动脉慢性完全闭塞组组织型基质金属蛋白酶抑制剂2显著增高(P<0.05和P<0.01)。结论动脉粥样硬化斑块的演变与血基质金属蛋白酶2、组织型基质金属蛋白酶抑制剂2水平及基质金属蛋白酶2/组织型基质金属蛋白酶抑制剂2比值变化和失衡密切相关,基质金属蛋白酶2水平和基质金属蛋白酶2/组织型基质金属蛋白酶抑制剂2比值显著升高提示动脉粥样硬化斑块的不稳定性,有可能作为急性冠状动脉综合征病情严重程度的有效预测指标之一。