肺浸润性黏液腺癌与混合性浸润性黏液-非黏液腺癌的临床病理学分析

目的探讨肺浸润性黏液腺癌(invasive mucinous adenocarcinoma,IMA)与混合性浸润性黏液-非黏液腺癌(mixed invasive mucinous and non-mucinous adenocarcinoma,mIMA)的临床病理学特征、诊断及鉴别诊断。方法收集36例肺原发IMA和17例mIMA患者的临床资料,采用免疫组化EnVision两步法检测TTF-1、CK7、CK20、SATB2、CDX2、EGFR、HNF4a等蛋白的表达。应用Sanger法和FISH法检测KRAS突变和NRG1基因重排,分析其临床病理学特征并复习相关文献。结果IMA中有9例(25.0%)有乳头结构、3例(8.3%)有微乳头结构,mIMA中13例(76.5%)有乳头结构(P<0.001)、9例(52.9%)有微乳头结构(P=0.001)。IMA高核级5例(13.9%),mIMA高核级10例(58.8%)(P=0.002)。TTF-1在IMA中阳性率为37.5%,其在mIMA黏液腺癌和非黏液腺癌成分中阳性率分别为60.0%、80.0%(P=0.021)。CK7、CK20、CDX2在IMA中阳性率为90.6%、21.9%、9.4%,三者在mIMA黏液腺癌和非黏液腺癌成分中阳性率分别为100%、20%、20%和100%、6.7%、6.7%,SATB2均不表达。总EGFR和两种EGFR突变特异性抗体(L858R、DEL19)在IMA、mIMA中的表达差异无统计学意义。mIMA中有3例黏液腺癌L858R阳性,其中2例非黏液腺癌阴性;另有1例mIMA非黏液腺癌成分DEL19阳性,其在黏液腺癌中阴性。IMA中HNF4a的阳性率为72.0%(18/25),mIMA黏液腺癌和非黏液腺癌成分中HNF4a阳性率分别为41.7%(5/12)、33.3%(4/12)(P=0.048)。19例IMA行基因测序有9例(47.4%)KRAS突变,以G12D、G12V最为常见。4例mIMA行基因测序,均未显示KRAS突变。FISH检测示2例(7.1%)IMA有NRG1易位重排。结论肺mIMA比IMA更具侵袭性,mIMA中乳头、微乳头结构、高核级的病例显著多于IMA;两者在免疫表型、KRAS突变方面,差异均有统计学意义。

黑色素瘤优先表达抗原免疫组织化学染色在子宫内膜癌及宫颈腺癌鉴别诊断中的应用

目的探讨黑色素瘤优先表达抗原(PRAME)免疫组织化学染色在子宫内膜癌及宫颈腺癌鉴别诊断中的应用价值。方法收集南京大学医学院附属鼓楼医院病理科2018年5月至2023年11月全子宫切除标本中确诊的子宫内膜癌病例87例和宫颈腺癌病例63例,分别进行PRAME免疫组织化学染色,比较其在子宫内膜癌和宫颈腺癌中的表达差异。结果子宫内膜癌87例,年龄35~71岁(平均59岁,中位59岁);宫颈腺癌63例,年龄28~80岁(平均49岁,中位47岁)。78例(78/87,89.7%)子宫内膜癌和2例(2/63,3.2%)宫颈腺癌表现为PRAME阳性表达,且2例宫颈腺癌均为透明细胞癌。PRAME在鉴别子宫内膜癌及宫颈腺癌的灵敏度和特异度分别为89.7%和96.8%,在鉴别子宫内膜和宫颈的非透明细胞癌的灵敏度和特异度高达91%和100%。结论PRAME免疫组织化学染色在子宫内膜癌及宫颈腺癌中表达差异具有统计学意义,可作为鉴别原发宫颈腺癌和原发子宫内膜癌(尤其是非透明细胞癌)的辅助诊断标志物。

EFEMP1在恶性间皮瘤与低分化腺癌鉴别诊断中的应用价值

目的探讨含表皮生长因子的纤维蛋白细胞外基质蛋白1(EGF containing fibulin extracellular matrix protein 1,EFEMP1)在恶性间皮瘤与低分化腺癌鉴别诊断中的作用,分析EFEMP1与传统免疫组织化学标志物联合对提高恶性间皮瘤病理诊断准确性的价值。方法收集已确诊为恶性间皮瘤的病理组织蜡块33例,良性间皮肿瘤5例,低分化癌与恶性间皮瘤不能鉴别的疑难病例7例;低分化肺腺癌组织芯片40例,低分化肠腺癌组织芯片20例;恶性间皮瘤胸腹腔积液细胞蜡块15例,腺癌胸腹腔积液细胞蜡块11例。应用免疫组织化学方法(EnVision二步法)检测EFEMP1、BerEP4、Calretinin、WT1和D2-40的表达情况,应用荧光原位杂交方法检测CDKN2A的突变情况,并分析各组病例表达差异。结果在33例恶性间皮瘤中EFEMP1阳性表达率为78.8%(26/33),在40例低分化肺腺癌和20例低分化肠腺癌(以下简称低分化腺癌)中肿瘤细胞均不表达EFEMP1,两者差异有统计学意义(P<0.05)。在15例恶性间皮瘤胸腹腔积液细胞蜡块中EFEMP1胞质弥漫阳性表达(15/15)。联合运用EFEMP1、BerEP4、Calretinin对鉴别恶性间皮瘤与低分化腺癌的特异度为98.3%,灵敏度为90.9%,受试者工作特征曲线(ROC曲线)下面积为0.958。结论EFEMP1在恶性间皮瘤组织中高表达,是诊断恶性间皮瘤的重要标志物。在胸腹腔积液细胞蜡块中,EFEMP1比Calretinin更有利于间皮细胞的形态观察。EFEMP1与BerEP4、Calretinin联合运用,有助于提高鉴别恶性间皮瘤和低分化腺癌的病理诊断准确性。

三氯异氰尿酸脱黑色素对免疫组织化学检测的影响

目的探讨三氯异氰尿酸脱黑色素对免疫组织化学检测的影响。方法对40例含黑色素的病例,分别采用3种不同氧化剂(三氯异氰尿酸、高锰酸钾和过氧化氢溶液)对Ki-67、S-100蛋白、HMB45、Melan A、SOX10、β-catenin免疫组织化学染色后漂白,比较3种方法的染色合格率和漂白时间。通过无色素的对照组织验证各抗体DAB信号在三氯异氰尿酸漂白的耐受时间。结果8%三氯异氰尿酸溶液为最佳反应浓度。8%三氯异氰尿酸漂白在Ki-67、S-100蛋白、SOX10、HMB45、Melan A、β-catenin免疫组织化学染色后(尤其是在中、高色素含量的标本)漂白合格率明显高于0.5%高锰酸钾和10%过氧化氢,差异有统计学意义(P<0.01)。8%三氯异氰尿酸的漂白时间(<20 min)短于0.5%高锰酸钾(约40 min)和10%过氧化氢(24 h)。8%三氯异氰尿酸对各种定位的免疫组织化学抗体的DAB信号均无影响且耐受时间长(20~78 h)。结论8%三氯异氰尿酸的DAB后漂白可以作为富含黑色素组织免疫组织化学检测的漂白方法。

一种适用于免疫组织化学染色的新底物Magenta及其应用价值

目的评估免疫组织化学染色的新底物辣根过氧化物酶(HRP)Magenta在明视场下的运用特点,包括特异度、灵敏度、重复性、稳定性和抗干扰能力。方法收集2021年1月至2023年12月南京大学医学院附属鼓楼医院的人体癌旁组织12例和肿瘤组织芯片176例,根据染色底物不同分为3,3′-二氨基联苯胺(DAB)组和Magenta组。(1)对不同组织的细胞定位和亚定位的抗体行Magenta和DAB显色比较,观察两者一致性;(2)通过对Magenta显色切片在不同环境(低温、常温、高温)下的存储以及接触有机溶剂(乙醇、二甲苯、丙酮、1%盐酸乙醇、0.3 mol/L硫酸、高锰酸钾等)观察其稳定性;(3)通过添加苏木精、DAB,观察其对Magenta显色信号的干扰情况。结果(1)Magenta组细胞核、质、膜等定位准确,(30±2)s出现淡粉红信号,(180±5)s完成显色,反应速度与DAB组相比,差异无统计学意义(P>0.05),显色性能与DAB组相比有较高的一致性(cohenκ=0.957),特异度和灵敏度为96.0%和99.2%;(2)Magenta显色切片在不同环境下存储不会发生信号改变,同时能耐受乙醇、二甲苯、丙酮、1%盐酸乙醇、0.3 mol/L硫酸等有机溶剂,但不能与氧化剂接触;(3)Magenta与DAB和苏木精共同染色时,阳性信号互不干扰。结论在免疫组织化学染色性能上,HRP Magenta与DAB相比阳性信号色彩更鲜明,同时稳定性好,易于长久保存,可作为免疫组织化学HRP酶底物的新选择。