鸡MBL2基因生物信息学分析及组织表达

为了研究鸡甘露聚糖结合凝集素的特征与功能,本试验通过PCR技术扩增莱航鸡MBL2基因序列,并通过生物信息学软件分析鸡MBL2基因的基本特征,并预测其功能、构建蛋白互作网络;构建真核表达载体并注射小鼠,在小鼠肝脏中进行瞬时表达;制备多克隆抗体,采用免疫组织化学技术,检测MBL-C蛋白在鸡体内的组织分布。结果显示,莱航鸡MBL2基因全长765 bp,编码254个氨基酸;MBL-C蛋白分子式为C1192H1927N333O379S13,具有信号肽;蛋白分子结构由α螺旋、β转角、延展链以及无序结构构成;进化分析显示鸡MBL2蛋白符合生物进化规律;富集分析显示该蛋白参与补体活化过程,组成细胞外区域,与内肽酶及水解酶活性有关;蛋白互作网络显示MASP1/2、LOC418892等蛋白与MBL2有互作关系;免疫组化结果证实鸡MBL-C蛋白主要由肝脏分泌,其表达量随日龄增加升高。

朗德鹅TLR4基因的生物信息学分析

为研究鹅TLR4的特征与功能,采用生物信息学方法对朗德鹅TLR4进行分析。结果表明,TLR4蛋白分子式为C_(4364)H_(6867)N_(1135)O_(1239)S_(32),定位于细胞膜,存在信号肽;含有8个LRR、1个LRR_CT、1个跨膜结构域以及胞内区的TIR;具有12个潜在的N-糖基化位点和89个磷酸化位点,可能与TIRAP和S100A9等具有相互作用。高级结构预测显示,该TLR4由α-螺旋、β-转角、延展链以及无规则卷曲组成。进化树分析表明朗德鹅与禽类亲缘关系较近,与其他物种则较远。研究表明朗德鹅TLR4蛋白是一种疏水偏碱性蛋白,符合TLRs家族典型结构,但在不同物种间存在一定差异性。

LPS诱导下鹅TLR15及相关免疫因子的表达分析

为探究炎症反应中东北白鹅Toll样受体15(TLR15)的免疫功能及其组织表达特征,本研究采用荧光定量PCR方法,对LPS诱导下的东北白鹅TLR15及相关免疫因子在不同组织的转录水平进行分析;同时利用免疫组织化学技术,对TLR15在不同组织中的表达水平进行检测。结果显示,在LPS诱导下东北白鹅TLR15及其相关免疫因子(IFN-α、IFN-γ、IL-1β和IL-6)的转录水平均高于对照组,其中TLR15、IFN-α和IFN-γ在法氏囊组织转录水平最高(p<0.01),IL-6在胸腺中转录水平最高,表明在炎症反应中TLR15及其免疫因子在不同组织的转录水平存在一定的差异。免疫组织化学检测结果显示,与对照组比较,各实验组TLR15在法氏囊、脾脏和肝脏中的表达差异极显著(p<0.01),在肺组织和肾组织中的表达差异显著(p<0.05),表明在LPS诱导下,鹅TLR15基因的转录和翻译水平一致。本研究为东北白鹅TLR15在炎症反应中的免疫功能分析提供了参考依据。

小鼠NIS蛋白的生物信息学特征及其在乳腺中的表达分析

为探究小鼠钠碘转运体(Na^+/I-symporter,NIS)蛋白的结构、功能及其在乳腺组织的表达特征,本研究扩增小鼠乳腺NIS基因编码区,测序鉴定后采用结构预测软件对NIS蛋白进行生物信息学分析,同时采用Western blotting、免疫组织化学技术和半定量PCR技术对NIS基因在不同乳腺发育时期的转录和表达水平进行分析。结果显示,小鼠NIS基因编码区全长1857 bp,与人NIS的同源性为80.40%,保守性较强。NIS蛋白含有618个氨基酸残基,分子质量约为65.7 ku,分子式为C2996H4701N749O833S32,理论等电点为7.44,半衰期为30 h,消光系数为102510,不稳定系数为29.31,脂溶系数为105.91,富含疏水性氨基酸,为稳定的疏水蛋白。NIS蛋白二级结构含有α-螺旋(41.42%)、延伸链(18.28%)、β-转角(4.05%)和无规则卷曲(36.25%),三级结构与之相一致。Western blotting结果显示,4个时期均出现特异性杂交带,大小为65.7 ku,与预期结果相符。免疫组织化学结果表明,NIS蛋白在小鼠的青春期、妊娠期到泌乳期的乳腺组织中表达量逐渐增加,在泌乳期达到高峰,存在显著差异(P<0.05),在退化期逐渐恢复到类似青春期状态;NIS基因mRNA的变化规律与蛋白表达一致。本研究结果为进一步探究NIS蛋白在乳腺发育和泌乳调控中的作用提供了参考依据。

高中生物学蛋白质相关问题探讨

在高中生物学中蛋白质被定义为生命活动的主要承担者,可见其重要性。但在高中教学中有些涉及蛋白质的问题却难以用高中生物学知识进行解答,从蛋白质的组成元素、蛋白质与生物膜系统以及蛋白质和其他物质形成的复合物3个方面进行分析,为高中生物学教学提供相关依据及理论基础。

H5亚型禽流感疫苗诱导下鹅TLR4及相关免疫因子表达分析

进一步明确TLR4及其相关免疫因子在禽类疫苗免疫过程中的表达变化。采用荧光定量RT-PCR方法和免疫组织化学技术,在注射H5亚型禽流感疫苗24 h后,对三花鹅TLR4及相关免疫因子在不同组织中的表达情况进行检测并分析。在H5亚型禽流感疫苗诱导下,实验组TLR4 mRNA在肝脏和骨髓中显著高于对照组(P<0.05),在脾脏、法氏囊以及胸腺中极显著高于对照组(P<0.01);IL-1β、IFN-α以及IFN-γ在肝脏和胸腺中极显著高于对照组(P<0.01),IL-6和IFN-α在脾脏中与对照组相比为极显著(P<0.01),但IL-1β在脾脏和法氏囊中只是显著高于对照组的水平(P<0.05)。免疫组织化学检测结果显示,TLR4在脾脏和法氏囊中与对照组相比极显著(P<0.01),在肝脏中为显著差异(P<0.05),与转录水平一致。在H5亚型禽流感疫苗诱导下,三花鹅体内能够激活TLR4及其相关免疫因子,但在不同组织中表达具有一定差异性。