三株鹅源坦布苏病毒的分离鉴定及遗传进化分析

为了解广东地区鹅源坦布苏病毒流行情况,研究对自2020年6月至2021年6月从广东地区疑似坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)感染鹅的组织病料进行TMUV分离鉴定。结果显示:共分离出3株鹅源TMUV,可感染BHK-21细胞并导致细胞病变;3株分离株核苷酸相似性为99.2%~99.7%,与Cluster2.1参考株基因同源性最高,为95.9%~99.3%,与Cluster2.2参考毒株同源性相对较低,为95.0%~96.4%;全基因组遗传进化分析和E蛋白氨基酸序列分析结果表明,3株鹅源分离株均位于Cluster2.1,其中Goose/GD/939/2021和Goose/GD/1025/2021 E蛋白氨基酸序列与其他毒株E蛋白相比多个位点存在差异。研究表明,从广东地区分离的3株鹅源TMUV均位于Cluster2.1,为进一步研究广东地区鹅源TMUV流行、进化及相关疾病的防控奠定基础。

广东地区8株鹅源基因Ⅻ型新城疫病毒F蛋白基因遗传进化分析

为了解当前广东地区鹅群新城疫病毒(NDV)遗传进化情况,本研究从广东养殖病死鹅组织样品中分离鉴定获得8株NDV,对分离株的F蛋白基因进行核苷酸及氨基酸序列分析。8株分离病毒之间F蛋白基因同源性较高,为96.3%-99.9%,但与当前国内NDV优势流行株及疫苗株同源性均较低。遗传进化分析结果显示所有新分离株均属于Ⅻ型NDVⅫb亚型分支,而当前国内NDV的优势流行株及常用疫苗株均属于Ⅶd亚型分支。氨基酸序列分析结果显示,本研究分离株F蛋白裂解位点氨基酸序列均为112K/RRQKR/F117,符合强毒株分子特征;与基因Ⅶ型代表株NDV/ZJ1相比,新分离株F蛋白B细胞中和抗原表位均出现D170N变异;而与2010年~2011年报道的广东Ⅻb亚型分离株相比,新分离株F蛋白疏水区、七肽重复序列等区域均出现氨基酸的变异。综上所述,本研究分离鉴定的8株鹅源NDV的F基因均属于Ⅻb亚型,与Ⅶd亚型流行株及常用疫苗株F基因同源性较低,且其多个氨基酸关键位点存在变异。本研究在国内首次从病死鹅体内分离到基因Ⅻ型NDV,为进一步了解基因Ⅻ型NDV在广东地区水禽中的流行、病原进化以及疫苗株更新提供参考。

番鸭源基因Ⅶ型新城疫病毒的生物学特性和免疫原性评价

为了解我国近年水禽主要流行的基因Ⅶ型新城疫病毒的生物学特性和免疫原性,通过攻毒试验和免疫保护试验测定了1株本实验室分离保存的番鸭源基因Ⅶ型新城疫病毒MDK/FS-SS/E/2007的致病指数、雏番鸭致病性和免疫保护性等特征。致病指数评价结果显示,该毒株符合新城疫病毒强毒株标准。雏鸭致病试验结果显示,攻毒组动物均出现沉郁、瘫痪和扭颈等神经症状,剖检可见脑部充血、出血,胰腺、脾脏和肝脏等器官出现变性坏死等典型新城疫临床特征。免疫保护试验结果显示,以该毒株制备的油乳灭活疫苗对雏番鸭进行3次免疫,免疫后42 d血清HI抗体几何平均滴度水平可达1∶238.9,能为番鸭提供有效保护。研究结果为水禽新城疫诊断与免疫防控研究提供了参考资料。

鹅源副鸡禽杆菌的分离鉴定及致病性试验

研究从面部肿胀的成年狮头鹅眶下窦中分离到一株细菌,经生长特性、菌体染色镜检、生化试验、16 S rDNA测序比对及HMTp210基因扩增方法对其进行鉴定,确定分离菌株为血清型B型的副鸡禽杆菌,具有NAD依赖性;副鸡禽杆菌hagA基因系统进化树显示分离株与国内大部分副鸡禽杆菌分离株的亲缘性相近,与国外副鸡禽杆菌分离株的差异较大;药敏试验结果显示喹诺酮类药物和氟苯尼考的MIC较低,分别为0.25μg/mL和4μg/mL,氨苄西林等6种药物的MIC值均大于128μg/mL,表明菌株具有较强的耐药性;分离纯培养物人工感染7日胚龄鸡胚后24~48 h内致死鸡胚,经眶下窦感染80日龄乌棕鹅,48 h鹅开始出现流鼻液、鼻窦部肿胀,72 h剖检可见眶下窦有干酪样渗出物,从渗出物中又重新分离出副鸡禽杆菌;表明分离到的副鸡禽杆菌对鹅具有较强的致病力。

鹅源经典番鸭呼肠孤病毒的分离鉴定及致病性研究

番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)近年来在维鹅中的分离率增加,造成了一定的经济损失。本研究从临床上表现出跛行、肝脏和脾脏出现白色点状坏死的雏鹅中采集肝脏和脾脏,采用PCR方法进行MDRV鉴定,对阳性病料经番鸭胚和鹅胚进行病毒分离,并对分离株进行鉴定和σC蛋白基因测序,将分离株对维鹅和雏番鸭进行致病性试验。流行病学调查结果显示:疑似感染MDRV维鹅的病毒阳性率为18.7%,病毒分离率为33%;禽胚分离结果显示,成功分离获得1株鹅源MDRV,命名为846-Goose-CHN-2020株,接种禽胚后,禽胚死亡时间在2~10d;846-Goose-CHN-2020株经禽胚传至第5代时死胚率下降;遗传进化结果显示:846-Goose-CHN-2020株与鸭源MDRV相似为91%~97.2%,与鹅源MDRV(GRV-GD2020)相似为99.8%;致病性结果显示,846-Goose-CHN-2020株对维鹅和维番鸭具有致病性,主要表现为脾脏出现白色坏死点。本研究完善了广东地区鹅源MDRV的流行病学和致病性信息,为鹅源MDRV的研究提供了一定的科学基础。