福氏志贺菌主动外排基因acrA的克隆及原核表达

目的对福氏志贺菌外排基因acrA进行克隆和原核表达,为进一步研究其在志贺菌外排机制中的作用奠定基础。方法参考福氏志贺菌2aacrA基因序列设计一对特异引物,在引物的5′和3′端分别加入含有BamHⅠ和SalⅠ限制性酶切位点序列。以福氏志贺菌2a菌株基因组DNA为模板,通过PCR扩增acrA基因并与pMD18-T载体连接,然后转化DH5α。提取重组质粒pMD18-acrA,经BamHI/SalI双酶切并与载体pET30a连接后转化宿主菌BL21(DE3)pLys,通过IPTG诱导表达目的蛋白。结果克隆的acrA基因长度为1122bp,核苷酸序列与GenBank上公布的序列完全相同。原核表达经SDS-PAGE及WesternBlotting检测和鉴定,结果表明重组载体pET-30a-acrA可成功地在大肠杆菌中表达AcrA蛋白。结论成功构建了福氏志贺菌acrA基因的原核表达质粒,并在大肠杆菌中得到有效表达,该研究为了解AcrA蛋白的特性、功能以及对福氏志贺菌多药耐药机理的深入研究奠定了基础。

萃淋树脂在有色金属分离中的研究和应用

对萃淋树脂在稀有金属、责金属和重金属等有色金属分离和提纯中的研究及应用进行了综述。萃淋树脂分离法是一种具有高选择性、多级高效性、操作简便、环境友好的分离技术,为解决稀贵金属由于分布散、含量低、性质相似、价态易变而难以分离的问题开拓了一条新途径。

影响铝合金轮毂电镀层内应力的工艺研究

研究了铝合金材料多层电镀过程中的镀层内应力变化,结果表明半光亮镍镀层内应力增加最显著。而半光亮镍镀层内应力随镀液pH、阴极电流密度和氯离子质量浓度的增加而增大,随温度的升高而减小,由此提出了降低铝合金轮毂电镀层内应力的措施。

福氏志贺菌2a多药耐药基因marA的克隆及其原核表达

根据福氏志贺菌2a多药耐药基因marA的序列,设计并合成了1对特异性引物,在引物的5′和3′端分别加入含有BamHⅠ和SalⅠ限制性酶切位点的序列,以福氏志贺菌2a菌株基因组DNA为模板扩增了marA基因序列。将PCR产物与pMD18-T载体连接,转化到大肠杆菌DH5α。鉴定成功获得目的片段后,经BamHⅠ+SalⅠ双酶切并与载体pET-30a连接,构建原核表达质粒pET-30a-marA,并将其转化宿主菌BL21(DE3)pLys,用IPTG诱导其表达。SDS-PAGE分析表明,重组载体pET-30a-marA可成功地在大肠杆菌中表达MarA蛋白。Western-blotting检测证明,该蛋白能与志贺菌阳性血清发生特异性反应。

福氏志贺菌主动外排基因acrB的克隆与序列分析

以福氏志贺菌2a型菌株基因组为模板，经PCR扩增得acrB基因，将该基因克隆到pMD18-T Vector载体，将重组质粒进行PCR和酶切鉴定及序列测定．结果表明：测定序列与Genbank收录的福氏志贺菌参考序列同源性为99．7％，与大肠杆菌的acrB基因序列比较分析，序列同源性在98％～99％之间，说明志贺菌主动外排基因acrB在碱基序列和编码的氨基酸序列上均与大肠杆菌有很高的同源性，它可能是志贺菌引起多重耐药的主要原因．

硬质合金化学镀铜及表面装饰工艺

采用化学镀方法在硬质合金表面镀覆一层铜,在此基础上进行仿银仿金处理。结果发现,化学镀铜层的质量对仿银仿金效果影响较大,为此讨论了添加剂、温度、pH等因素对化学镀铜层的均匀度及光亮度的影响,并提出了化学镀铜的较佳工艺条件。

印制板用压延铜箔镀铜粗化工艺

介绍了压延铜箔镀铜粗化工艺的工艺流程和工艺条件。讨论了粗化处理及固化处理过程中铜离子含量、硫酸含量及电流密度等因素对压延铜箔表面质量及抗剥离强度的影响。得到了适合压延铜箔的粗化条件(20g/LCu2+,70g/L的硫酸,适量添加剂,Jk=40～50A/dm2,θ=30°C,t=3～5s)和固化条件(60～70g/LCu2+,90～105g/L硫酸,适量添加剂,Jk=20～30A/dm2,θ=50°C,t=6～8s)。经该粗化工艺处理后的压延铜箔与印制板基板结合力良好。

化学镀镍技术在电子工业的应用

化学镀镍层具有耐蚀性好、耐磨性高、焊接性良好、磁性可调等优点。因此,化学镀镍技术被广泛应用于电子工业。文章概述了化学镀镍的原理、常用的化学镀镍-磷合金工艺配方及各成分的作用,简述了化学镀镍技术在PCB制造、电子封装、电子元件制造、电磁屏蔽等领域的应用,介绍了近年来的化学镀镍新技术,并指出了今后化学镀镍技术的研究重点。

志贺菌耐药性研究进展

概述了致病性志贺菌的分类,对家畜及人类造成的危害,临床多重耐药性严重状况。从分子生物学角度介绍了志贺菌主要耐药性acrAB-tolC主动外排系统的作用特点及耐药性相关药物外输蛋白marA、acrA、acrB,基因hdeA、tolB、tol A、tol Q等研究进展,并阐述了克服志贺菌耐药性的对策。

福氏志贺菌外输调节蛋白基因marA的原核表达载体构建及其鉴定

目的构建志贺菌外输调节蛋白基因marA的原核表达载体并对其表达的蛋白进行鉴定。方法采用PCR从志贺菌基因组DNA中扩增得到志贺菌外输调节蛋白基因marA,并将其定向克隆到原核表达载体pET-30a,构建原核表达重组质粒pET-30a-marA,重组子经限制性内切酶分析、PCR及测序鉴定后,转化宿主菌BL21,IPTG诱导表达,产物进行SDS-PAGE电泳、免疫印迹分析鉴定。结果经鉴定证实原核表达载体pET-30a-marA构建成功,且在大肠杆菌BL21中获得了MarA与His的融合表达,且表达蛋白产物的分子质量大小与预期值一致,并可被特异性抗体所识别。结论MarA在大肠杆菌中获得了高效的表达,为进一步研究其免疫学特性和功能奠定了基础。

福氏志贺菌2a主动外排基因acrA的克隆和分子特征

acrA基因在细菌耐药过程中起重要作用,通过生物信息学方法,结合PCR技术,对福氏志贺菌2a基因进行了克隆。基因序列分析表明,克隆得到的acrA基因ORF由1194个核苷酸组成,编码一个由397个氨基酸组成的多肽,含有一段24个氨基酸的信号肽,预测蛋白质分子量和等电点分别约为42.15ku和8.42。本研究获得的主动外排基因acrA的信息为进一步研究AcrA蛋白的结构与功能奠定了基础。

福氏2a志贺菌DNA转录激活蛋白MarA的二级结构及其B细胞抗原表位预测

研究以福氏2a志贺菌(Shigella flexneri2a,s.f2a)的基因组序列为材料,采用Gamier-Robson法、Chou-Fasman法和Kamplus-Schulz法预测了其DNA结合转录激活蛋白MarA的二级结构,用Kyte-Doolittle法对结构蛋白的亲水性进行了分析,用Emini法预测了蛋白的表面可能性,以Jameson-Wolf法预测了蛋白的抗原指数,然后综合评价了福氏2a志贺菌转录激活蛋白MarA的B细胞抗原表位。结果表明:福氏2a志贺菌MarA蛋白的二级结构较为复杂,含有较多的转角和无规则卷曲等柔性区域以及α-螺旋和β-折叠区段,该蛋白有多处抗原指数较高的区段,其中含有潜在的B细胞优势抗原表位,因此其在免疫学中的地位也应当引起重视。

福氏志贺菌多重耐药调节蛋白MarA的原核表达

为获得福氏志贺菌多种耐药调节蛋白MarA,将扩增出的marA基因亚克隆到原核表达载体pET-30a(+)中,经PCR和双酶切鉴定以及序列测定,重组质粒构建成功。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,表达的蛋白再经Ni-NTA亲和层析纯化,结果显示,MarA蛋白的表达量占菌体总蛋白的30.2%,经Western-bloting检测,表达的蛋白能被福氏志贺菌阳性血清特异识别,说明表达蛋白具有良好的免疫反应性。

志贺菌耐药性的分子机制

随着抗菌药物的广泛应用,耐药及多重耐药细菌已经严重威胁着人类和动物的健康。志贺菌的耐药机制主要是产生灭活酶、细胞壁的改变、主动外排以及作用靶位结构的改变。本文对其耐药机制的研究进展作简要综述。

从玻璃纤维池窑废耐火浇注料中回收提取铂和铑

以玻璃纤维行业生产的废耐火材料为原料,采用王水溶解、离子交换、溶剂萃取和萃淋树脂分离为主要方法回收纯铂铑,得到了良好的提取效果。结果表明,采用该工艺,铂铑的回收率可达90%以上,制得的海绵铂和铑粉的纯度均大于99.95%。

兰州市城关区犬弓形虫病流行情况血清学调查与分析

为研究兰州市城关区犬弓形虫病的流行情况,本试验采用宠物用弓形虫抗体快速检测卡和/或弓形虫间接血凝试验（IHA）,对城关区3家宠物诊所就诊犬和兰州市流浪动物救助站流浪犬共计439只进行检测分析.结果表明：3家宠物诊所就诊犬感染率分别为7.1％、6.9％、6.5％,均低于平均感染率7.5％,流浪动物救助站流浪犬感染率较高,为10.2％;犬弓形虫的感染率随着年龄的增长也在增加,调查中＜1岁犬感染率3.2％,1～3岁和3～6岁年龄段分别为5.6％和6.0％,＞6岁犬感染率11.34％;但不同性别犬对弓形虫的感染差异不显著.

福氏2a志贺菌MarA蛋白纯化复性及活性检测

目的纯化、复性志贺菌MarA蛋白并分析其生物学活性。方法将构建好的BL21大肠埃希菌工程菌经异丙基-β-D-硫代-乳糖苷(IPTG)诱导,His-tag形式表达MarA融合蛋白(约21ku),采用超声波破碎细菌,提取包涵体用高浓度尿素裂解,经镍柱亲和层析纯化,纯化后的蛋白质在小分子保护剂及还原型谷胱甘肽(GSH)/氧化型谷胱甘肽(GSSG)的存在下对融合蛋白进行复性。用凝胶薄层扫描法测纯度。结果从融合蛋白包涵体中获得纯度达90%以上的目的蛋白,免疫蛋白印迹试验结果显示,复性后的MarA融合蛋白能与抗福氏志贺菌抗体发生特异性结合。结论成功建立有效纯化融合蛋白包涵体His-MarA的方法。