蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2对AngⅡ刺激的心肌成纤维细胞增殖的影响

目的:探讨含有Src同源结构域2的蛋白酪氨酸磷酸酶2(Src homology 2 domain-containing pro-tein tyrosine phosphatase 2,SHP-2)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)刺激的心肌成纤维细胞(cardiac fi-broblasts,CFs)增殖的作用。方法:差速贴壁法体外培养心肌成纤维细胞,以波形蛋白(vimentin)鉴定CFs纯度;MTT法检测AngⅡ作用下心肌成纤维细胞增殖率,采用重组腺病毒过表达SHP-2和SHP-2抑制剂NSC-87877分别对AngⅡ作用下的细胞增殖的影响。结果:AngⅡ对CFs增殖的促进作用有剂量依赖性,其促进细胞增殖的最高浓度为10-7mol/L;在AngⅡ的刺激下,SHP-2可以促进心肌成纤维细胞增殖,并且突变体组比野生型组增殖更明显(P<0.01)。SHP-2抑制剂NSC-87877达到50μmol/L时可以明显抑制AngⅡ刺激下的CFs增殖。结论:AngⅡ的促CFs增殖作用是通过SHP-2调控的。

SHP-2重组腺病毒的包装及对心肌细胞的感染

目的采用HEK293细胞包装Ad-GFP-SHP-2和Ad-GFP-SHP-2-E76A并扩增Ad-GFP重组腺病毒并感染乳鼠心肌细胞。方法纯化两种载体;PacⅠ酶切线性化;线性化的载体转染入HEK293细胞进行包装;从病变的HEK293细胞分离重组腺病毒。利用重组的腺病毒感染乳鼠心肌细胞,并在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达。结果 PacⅠ酶切后,琼脂糖凝胶上显示有4.5 kb的条带;转染线性化的重组腺病毒载体入HEK293细胞中,反复冻融HEK293,其上清中含有重组腺病毒,当感染乳鼠心肌细胞感染复数为100时,感染效率大于90%。结论成功包装重组腺病毒,包装后的腺病毒可高效感染乳鼠心肌细胞。

糖原合成激酶3β对骨肉瘤细胞迁移和侵袭的影响

目的研究糖原合成激酶3β(GSK3β)在骨肉瘤侵袭、转移中的作用。方法通过Western blot法检测骨肉瘤患者肿瘤组织及骨肉瘤细胞中GSK3β的表达和磷酸化水平;使用两种GSK3β小分子抑制剂处理骨肉瘤细胞,通过细胞迁移及侵袭实验检测GSK3β活性受抑制对骨肉瘤细胞迁移、侵袭的影响。结果 GSK3在骨肉瘤细胞中过表达且存在活性调节异常;在转移及非转移骨肉瘤患者肿瘤组织中均可检测到GSK3表达及活性异常,尤其在转移的骨肉瘤患者肿瘤组织中;抑制内源性GSK3活性,明显降低肿瘤细胞的迁移、侵袭能力。结论GSK3β促进骨肉瘤细胞的侵袭、迁移,可能为骨肉瘤的临床治疗开辟潜在的靶点奠定理论基础。

SHP-2^(C459/S)突变体在三氧化二砷诱导的HEK293T细胞凋亡中的作用

目的观察三氧化二砷(As2O3)对293T细胞凋亡和增殖的影响并探讨SHP-2在其中的作用。方法显性负性SHP-2突变体SHP-2C459/S与具有绿色荧光蛋白基因的载体pEGFP-C1共转染入HEK293T细胞,Ho-echst33258染色检测细胞凋亡,细胞计数及荧光分光光度法检测细胞增殖。结果SHP-2C459/S突变体能增强细胞凋亡和减轻增殖抑制。结论SHP-2可能参与到As2O3诱导的细胞凋亡和增殖抑制的信号转导通路中。

尾加压素Ⅱ在糖基化终产物诱导的肾小管上皮细胞细胞外基质合成中的作用

目的研究尾加压素Ⅱ(urotensinⅡ,UⅡ)在糖基化终产物诱导的肾小管上皮细胞细胞外基质合成中的作用。方法应用体外培养大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52E),采用ELISA、RT-PCR等方法,检测糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)作用下,UⅡ及细胞外基质成分纤连蛋白(fibronectin,FN),四型胶原(typeⅣcollagen,ColⅣ)表达情况;同时检测UⅡ作用下,转化生长因子β1(transforming growth factor,TGF-β1)、FN及ColⅣ表达情况。结果 AGEs呈剂量和时间依赖性上调NRK-52E细胞UⅡ、FN及ColⅣmRNA表达及FN、ColⅣ蛋白分泌;UⅡ促进NRK-52E细胞TGF-β1、FN及ColⅣmRNA表达及蛋白分泌,UⅡ受体抑制剂urantide明显抑制这种效应,TGF-β1中和抗体部分抑制FN及ColⅣ蛋白分泌。结论 AGEs诱导NRK-52E细胞UⅡ表达增加,UⅡ可能是一个引起肾小管损伤和纤维化形成的新的重要致病因子。

SHP-2在三氧化二砷诱导HEK293T细胞凋亡中的作用

目的探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在三氧化二砷(As2O3)诱导HEK293T细胞凋亡中的作用。方法将pIRES-GFP空载体、pIRES-GFP-SHP-2野生型和pIRES-GFP-SHP-2C459S突变体载体通过磷酸钙方法转染HEK293T细胞;在5μmol.L-1的As2O3孵育48 h后,用流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot方法检测Cyt-C、Caspase-3、p-ERK、ERK、p-JNK及JNK的表达变化。结果5μmol.L-1As2O3可诱导HEK293T细胞凋亡,SHP-2能抑制其作用;SHP-2C459S突变体组Cyt-C和Caspase-3表达均高于空载体组,SHP-2野生型组则低于空载体组;SHP-2野生型组p-ERK表达高于空载体组,SHP-2C459S突变体组则相反;p-JNK的表达,SHP-2C459S突变体组高于空载体组,而SHP-2野生型组低于空载体组。结论SHP-2可抑制As2O3诱导的HEK293T细胞凋亡,其机制可能与激活ERK和抑制JNK途径有关。

SHP-2通过ERK和JNK通路调节PC12细胞应对NGF的细胞生存和凋亡

目的:探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在神经生长因子(NGF)作用下大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞生存及NGF撤除后细胞凋亡的过程中的作用及机制。方法:SHP-2抑制剂NSC87877作用于PC12细胞,MTT测定PC12细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡率。将pIRES-GFP空载体、pIRES-GFP-SHP-2野生型和pIRES-GFP-SHP-2C459S突变体通过脂质体方法转染PC12细胞;加入NGF作用1h和撤除NGF5h后分别用Westernblotting方法检测细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)及磷酸化JNK(p-JNK)表达变化。结果:MTT和流式细胞仪检测表明SHP-2可以促进PC12细胞生存,抑制细胞凋亡。Western blotting结果显示无SHP-2抑制剂组和转染pIRES-SHP-2野生型组p-ERK表达在加入NGF的过程中升高;撤除NGF后,各组p-ERK表达均降低,pIRES-GFP-SHP-2C459S突变体组和pIRES-GFP组p-ERK表达明显低于pIRES-GFP-SHP-2野生型组,NGF去除+SHP-2抑制剂组的表达水平明显低于NGF去除对照组;NGF去除+SHP-2抑制剂组p-JNK表达高于NGF去除对照组;pIRES-GFP-SHP-2C459S突变体组高于pIRES-GFP空载体组,pIRES-GFP-SHP-2野生型组低于pIRES-GFP空载体组。结论:SHP-2可能通过对ERK的正向激活,抑制JNK的激活,增强NGF作用下PC12细胞生存及抑制NGF撤除后所致细胞凋亡,从而在NGF的信号转导中起到一个中心环节的作用。

乳腺纤维瘤病样化生性癌3例报告并文献复习

目的探讨乳腺纤维瘤病样化生性癌(fibromatosis like metaplasia carcinoma,FLMC)的病理组织学特点、免疫组化表型,诊断及鉴别诊断。方法收集2016年9月~2020年4月哈尔滨医科大学附属第一医院3例女性FLMC患者,对乳腺纤维瘤病样化生性癌进行病理组织学形态、免疫组化等特点进行观察分析。结果3例患者均具有乳腺无痛、质硬肿物。组织形态学显示肿瘤细胞呈梭形,细胞密度不均,形态温和,轻-中度异形,梭形细胞弥漫或相互交错排列,间质纤维组织增生伴胶原化,肿瘤边缘区域可见呈指突状浸润周围乳腺实质及纤维脂肪组织。免疫组化梭形肿瘤细胞均表达上皮标记CK、CK5/6、34βE12、CAM5.2、CK8/18、CK7、CK14、P63、BCL2、Vimentin、SMA、β-catenin、CD10、Calponin“+”,ER、PR、C-erBb2、CD34、E-cadherin、S-100、P120、GFAP“-”。随访至今,均未见肿瘤复发及转移。结论乳腺纤维瘤病样化生性癌是一类罕见的病变,形态学温和,易误诊,免疫组化对其鉴别诊断有帮助。

乳腺癌中雄激素受体表达与ER、PR、HER2、Ki67、EGFR的关系

目的研究乳腺癌中雄激素受体(androgen receptor,AR)的表达与雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)、人表皮生长因子受体2(human epidermal growth receptor 2,HER2)及Ki67、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)表达的关系。方法用免疫组织化学染色方法评估1069例乳腺癌患者的AR、ER、PR、HER2、Ki67和EGFR的表达,并分析AR表达与ER、PR、HER2、Ki67及EGFR表达的关系。同时分析AR表达与临床情况如患者年龄、肿瘤大小、肿瘤类型、肿瘤分级等的关系。结果AR阳性表达率为77.36%,ER阳性表达率为60.99%、PR阳性表达率为61.18%,且AR的表达与ER、PR的表达(P<0.0001)、肿瘤大小(P=0.0139)及低增殖指数(P=0.0002)有关,与EGFR无关。在AR+/ER-组,AR表达与HER2(P=0.0375)、肿瘤大小(P=0.0460)及低Ki67表达(P=0.0111)有关;在AR+/PR-组,AR表达与低Ki67表达(P=0.0283)相关;在HER2-组,AR与低Ki67表达(P<0.0001)有关。结论AR可作为乳腺癌个体化治疗的新靶点。