A蛋白基因在枯草杆菌R25及地衣芽孢杆菌NM105中的表达

目的：测定Ａ蛋白基因在Ｒ２５及ＮＭ１０５中的表达情况。方法：根据Ａ蛋白基因产物———Ａ蛋白能特异地与许多动物的免疫球蛋白的Ｆｃ段结合这一特性，采用ＥＬＩＳＡ检测法测定。结果：在细菌生长对数期，表达量与酶活性都在快速上升，在细菌生长平台期，表达量呈下降趋势。加中性蛋白酶抑制剂，使表达量提高了４６％，低酶活性培养基的表达量是ＬＢ培养基的７．４倍，在碱性蛋白酶缺失的Ｒ２５中的表达量是ＮＭ１０５的１．６倍。结论：Ａ蛋白基因表达量与胞外蛋白酶活性关系极为密切。

pRIT-5质粒转化枯草杆菌及地衣芽孢杆菌NM105的研究

迄今文献中报道枯草杆菌基因克隆化都采用枯草杆菌１６８株及其突变体。采用我国分离的枯草杆菌Ｋｉ－２及其突变体Ｋｉ—２—１３２（Ｔｈｒ－．Ｉｌｅ－．Ｖａｌ－）和地衣芽孢杆菌ＮＭ１０５为ｐＲＩＴ—５质粒ＤＮＡ的受体菌株，用酸酚法提纯ｐＲＩＴ—５质粒ＤＮＡ，在琼脂糖凝胶电泳上看不到样品中有染色体ＤＮＡ的带。结果表明，Ｋｉ－２．Ｋｉ－２－１３２．ＮＭ１０５都可作ｐＲＩＴ—５质粒的受体菌，其转化频率在１０－３～１０－５之间，因菌株和条件不同，频率有所差异，Ｋｉ－２－１３２的转化效率为每微克ＤＮＡ可产生１０４转化体。从ｐＲＩＴ—５质粒ＤＮＡ转化Ｋｉ－２、Ｋｉ－２－１３２、ＮＭ１０５的转化体中提取的质粒ＤＮＡ仍具有ｐＲＩＴ—５质粒ＤＮＡ的抗氯霉素（Ｃｍｒ）的转化活性。从转化体提纯的质粒ＤＮＡ的电泳图以及ＣｌａＩ消化后的电泳图与原来的ｐＲＩＴ—５ＤＮＡ的电泳图相同。

枯草杆菌对A蛋白基因表达的影响

Ａ蛋白基因载体质粒ｐＲＩＴ—５是一个Ｅ．ｃｏｌｉ和枯草杆菌（Ｂ．Ｓｕｂｔｉｌｉｓ）的穿梭质粒。它在大肠杆菌中呈现氨基苄青霉素抗药性（Ａｐｒ），氯霉素抗药性（Ｃｍｒ），在枯草杆菌中仅呈现Ｃｍｒ。利用细胞感受态转化及原生质体转化，将ｐＲＩＴ—５由大肠杆菌分别导入枯草杆菌Ｒ２５及地衣芽孢杆菌ＮＭ１０５，经Ｃｍｒ转化株筛选及酶切电泳，结果表明该Ａ蛋白基因载体质粒ｐＲＩＴ—５成功地转化至Ｒ２５及ＮＭ１０５中。根据Ａ蛋白基因产物—Ａ蛋白能特异地与许多动物的免疫球蛋白的Ｆｃ段结合这一特性，应用ＥＬＩＳＡ检测方法，测定Ａ蛋白基因在Ｒ２５及ＮＭ１０５中的表达情况。其结果表明，Ａ蛋白基因表达量与胞外蛋白酶活性关系极为密切。

胞外蛋白酶对外源基因表达的影响

根据Ａ蛋白基因产物—Ａ蛋白能特异与许多动物的免疫球蛋白的Ｆｃ段结合这一特性，应用ＥＬＩＳＡ检测方法，测定Ａ蛋白基因在地衣芽胞杆菌ＮＭ１０５中的表达情况，进而研究胞外蛋白酶对外源基因表达的影响。其结果表明，Ａ蛋白基因表达量与胞外蛋白酶活性关系极为密切。在细菌对数生长期表达量与酶活都在快速上升。在细菌生长平台期，表达量呈下降趋势。在低酶活培养基的表达量是ＬＢ培养基的７．４倍。