龙胆苦苷生物合成候选调控基因GrbHLH1的挖掘、克隆与表达分析

为挖掘滇龙胆中调控龙胆苦苷生物合成的bHLH转录因子,使用长春花中调控环烯醚萜生物合成的转录因子bHLH环烯醚萜类合成1(CrBIS1)的基因序列比对滇龙胆转录组数据库,获得一个候选调控基因GrbHLH1,以该序列为基础,采用逆转录多聚酶链式反应(reverse transcription PCR,RT-PCR)技术从滇龙胆幼叶克隆GrbHLH1基因,并对其进行生物信息学分析和组织特异性表达分析。结果表明滇龙胆GrbHLH1基因(GenBank登录号:KF941186.2)的开放阅读框长1104 bp,编码367个氨基酸,主要在叶中表达;GrbHLH1蛋白的相对分子质量为40.60 kD,理论pI为4.82,可能定位于细胞核,无信号肽,亲水、不稳定,主要由α-螺旋(18.53%)和环(70.30%)构成;该蛋白质具有HLH保守结构域,属于IVa型bHLH转录因子,与长春花CrBIS1和CtBIS2蛋白的亲缘关系最近。以上数据表明GrbHLH1基因是龙胆苦苷生物合成的候选调控基因,为进一步研究该基因的调控作用奠定了基础。