miR-192负性调控人肝癌细胞株HepG2中RB1基因的表达

目的探讨miR-192对人肝癌细胞株HepG2中RB1基因表达的调节作用。方法运用生物信息学方法对miR-192进行靶基因预测并分析其潜在靶基因RB1;将含有miR-192结合位点的RB1mRNA 3′端非编码区(3′UTR)片段和在miR-192结合位点进行突变的RB1 3′UTR突变片段克隆至报告基因载体pMIR-Report luciferase vector,重组质粒分别命名为pMIR-RB1和pMIR-RB1-mut;将重组质粒、Beta-gal内参质粒和microRNA共转染HepG2细胞,双荧光素酶报告基因系统检测各实验组中细胞荧光素酶的表达;SYBR Green荧光定量PCR和Western blot分别在mRNA和蛋白水平检测miR-192对内源性RB1表达的调节作用。结果生物信息学分析筛选出89个miR-192的潜在靶基因,RB1基因是其中之一;测序验证重组质粒pMIR-RB1和pMIR-RB1-mut构建成功;过表达miR-192时,共转染pMIR-RB1质粒的细胞相对荧光素酶活性(4.80±0.36)较相应过表达miR-NC组(7.90±0.91)明显降低(P<0.05),而共转染pMIR-Luc或pMIR-RB1-mut质粒的细胞相对荧光素酶活性[pMIR-Luc:(7.68±1.04);pMIR-RB1-mut:(7.56±0.99)]较相应过表达miR-NC组[pMIR-Luc:(7.86±0.73);pMIR-RB1-mut:(7.82±1.05)]无显著差异;上调miR-192水平显著降低HepG2细胞中内源性RB1mRNA[(0.56±0.10)vs(1.05±0.13)]和蛋白(47%vs 100%)的表达。结论 RB1基因是miR-192的一个靶基因,在HepG2细胞中,miR-192通过直接结合RB1mRNA 3′UTR而负性调控RB1基因表达。

即刻种植骨缺损及其修复的研究进展

即刻种植修复术是目前牙种植术中较常见而又热门的选择,它减少了手术的次数,缩短了疗程,手术创伤小,患者痛苦少。即刻种植修复术的适应证相对更为严格,特别是对牙槽骨骨量的要求。而大多数患者都存在着不同形式、不同种类的骨缺损,如何修复骨缺损是如今研究的重点。故本文将从即刻种植骨缺损的类型、即刻种植引导骨组织再生和植骨材料的应用、骨缺损剩余骨壁对其修复的影响3方面的研究进展作一简要综述。

宫颈癌组织中miR-216b与FOXM1表达及与临床病理特征的关系

目的 研究宫颈癌组织中微小RNA(mi R)-216b与叉头框蛋白M1(FoxM1)表达及其与临床病理特征的关系。方法 选取2016年3月~2019年3月华中科技大学同济医学院附属武汉市中心医院诊治的宫颈癌患者84例作为病例组,同期选择宫颈上皮内瘤变(CIN)患者40例作为CIN组,子宫良性病变患者40例作为对照组。采用实时荧光定量PCR检测各组mi R-216b及FoxM1表达水平,比较其与临床病理特征的关系及相关性分析。结果 病例组mi R-126b表达水平显著低于CIN组及对照组,FOXM1表达水平显著高于CIN组及对照组,差异均有统计学意义(均P <0.05)。mi R-126b及FOXM1的表达与FIGO分期、肿瘤分化程度及浸润深度有关,而与年龄、病理类型、有无淋巴结转移及是否存在人乳头状瘤病毒(HPV)16/18感染无关。mi R-126b水平与FOXM1水平呈负相关(r=-0.694,P=0.001)。结论 宫颈癌组织中mi R-126b及FOXM1均异常表达,两者共同参与宫颈癌的发生发展过程,有可能成为宫颈癌诊断、治疗及预后评估的新肿瘤标志物。

lncRNA DLX6-AS1在宫颈癌组织中的表达及对宫颈癌细胞增殖和迁移能力的影响

目的观察宫颈癌组织中长链非编码RNA无远端同源框6反义1(lncRNA DLX6-AS1)在宫颈癌组织中的表达及意义,并探讨DLX6-AS1对宫颈癌细胞增殖和迁移能力的影响及机制。方法收集50例宫颈癌组织和30例正常宫颈组织,采用qRT-PCR法检测DLX6-AS1的表达,分析DLX6-AS1表达水平与患者临床病理特征的关系。取宫颈癌HeLa细胞,分为干扰对照组(si-NC组)和si-DLX6-AS1组,分别转染NC siRNA和DLX6-AS1 siRNA。分别采用MTS实验、Transwell实验观察两组细胞的增殖、迁移能力,Western blotting法检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin的表达。结果宫颈癌组织中DLX6-AS1表达高于正常宫颈组织(P<0.05)。TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移患者宫颈癌组织中DLX6-AS1表达水平高于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移患者(P均<0.05)。与si-NC组比较,si-DLX6-AS1组细胞增殖OD值降低,穿膜细胞数减少,细胞中β-catenin蛋白表达减少(P均<0.05)。结论DLX6-AS1在宫颈癌组织中的表达上调,其表达与宫颈癌恶性进展相关;干扰DLX6-AS1表达可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制宫颈癌细胞的增殖和侵袭。

miRNA-424-5p靶向SIRT4促进胃癌细胞迁移和侵袭的分子机制

目的探究miRNA-424-5p(miR-424-5p)调控SIRT4表达影响胃癌细胞迁移和侵袭能力的潜在分子机制。方法利用RT-qPCR检测57例胃癌患者肿瘤组织与癌旁组织中miR-424-5p和SIRT4的表达水平。用脂质体法将miR-424-5p inhibitor和miR-424-5p mimic分别瞬时转染入MNK-28和HGC-27胃癌细胞中,RT-qPCR检测细胞中miR-424-5p和SIRT4 mRNA的表达水平,Western Blot检测细胞中SIRT4蛋白的表达量,划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测各组细胞的迁移和侵袭能力。双荧光素酶基因报告实验检测miR-424-5p对SIRT4的靶向调控机制。共转染miR-424-5p和SIRT4进一步验证miR-424-5p和SIRT4对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果胃癌组织中miR-424-5p的表达明显高于癌旁组织(P<0.001),SIRT4的表达水平明显低于癌旁组织(P<0.001),相关性分析表明胃癌组织中miR-424-5p的表达与SIRT4呈负相关(r=-0.382,P=0.034)。此外,miR-424-5p高表达与肿瘤的浸润深度、TNM分期、脉管侵犯和神经侵犯显著相关(均P<0.05)。过表达miR-424-5p能促进胃癌细胞迁移和侵袭能力,而抑制miR-424-5p表达则呈现出相反的效果。过表达miR-424-5p可降低胃癌细胞中SIRT4 m RNA和蛋白的表达水平,相反,抑制miR-424-5p表达则上调胃癌细胞中SIRT4 m RNA和蛋白的表达水平。双荧光素酶报告基因实验显示miR-424-5p能显著影响野生型SIRT4-3’UTR表达载体的荧光素酶活性。回复实验结果显示miR-424-5p和SIRT4能显著影响胃癌细胞的迁移和侵袭能力。结论miR-424-5p在胃癌中高表达,其通过靶向抑制抑癌基因SIRT4的表达促进肿瘤细胞的迁移和侵袭,从而参与胃癌的的发生、发展。

外泌体介导LOXL4通过PI3K/AKT信号通路调控口腔鳞癌的免疫逃逸相关因子表达

目的探讨外泌体(EXO)介导的赖氨酰氧化酶样蛋白4(LOXL4)对口腔鳞癌细胞(OSCC)免疫逃逸相关因子表达的影响和调控机制。方法q RT-PCR检测口腔鳞癌细胞SCC9以及人口腔上皮细胞HOEC培养上清液中LOXL4的mRNA水平。差速离心法提取SCC9的外泌体,进行表征分析。Western blot检测外泌体标志物CD63、CD9以及目标基因LOXL4的表达量。使用荧光蛋白标记外泌体、SCC9细胞以及细胞核,利用共聚焦显微镜观察SCC9细胞对LOXL4-EXO的摄取。SCC9细胞和CD8+T细胞共培养,共培养体系分为空白对照组、LOXL4-EXO处理组、LOXL4-EXO联合PI3K/AKT的阻断剂Wortmannin处理组(LOXL4-EXO+WOR组)。CCK-8法检测细胞增殖率,ELISA法检测细胞培养液中IL-2、INF-γ、TNF-α的水平,Western blot检测PI3K、Akt、p-Akt、PD-L1的表达变化。结果与HOEC相比,LOXL4的m RNA水平在SCC9培养上清液中上调(P<0.05),并且成功分离和鉴定LOXL4-EXO,而且SCC9可摄取LOXL4-EXO。与空白对照组相比、LOXL4-EXO组的细胞增殖率上调(P<0.05),IL-2、INF-γ、TNF-α的水平下调(P<0.05),PI3K、Akt、p-Akt、PD-L1的表达量上调(P<0.05)。与LOXL4-EXO组相比,LOXL4-EXO+WOR组的细胞增殖率下调(P<0.05),IL-2、INF-γ、TNF-α的水平上调(P<0.05),PI3K、Akt、p-Akt、PD-L1的表达量下调(P<0.05)。结论外泌体介导LOXL4通过PI3K/AKT信号通路调节口腔鳞癌的免疫逃逸相关因子IL-2、INF-γ、TNF-α、PD-L1的表达。

氨肽酶P2在结直肠癌组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系

目的探讨氨肽酶P2(XPNPEP2)在结直肠癌组织中的表达及其与患者临床病理特征和预后的关系。方法采用免疫组织化学方法检测113例配对的结直肠癌组织和癌旁组织中XPNPEP2的表达情况,采用卡方检验分析XPNPEP2表达水平与患者临床病理特征的关系,Kaplan⁃Meier法绘制不同XPNPEP2表达水平结直肠癌患者无复发生存和总体生存曲线,组间生存差异采用Log⁃rank检验进行比较,并进一步通过单因素和多因素Cox比例风险回归模型分析影响结直肠癌预后的独立危险因素。结果结直肠癌组织中XPNPEP2蛋白的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.001),且XPNPEP2高表达与肿瘤浸润深度、脉管浸润及TNM分期显著相关(均P<0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤位置、肿瘤大小、分化程度及淋巴结转差异移均无统计学意义(均P>0.05)。XPNPEP2高表达组结直肠癌患者的无复发生存率和总生存率均显著低于低表达组(均P<0.05)。COX多因素分析示XPNPEP2表达水平是影响患者无复发生存率和总生存率的独立危险因素(均P<0.05)。结论XPNPEP2蛋白在结直肠癌中表达上调,其高表达与多种不良临床病理特征及预后密切相关,可作为判断结直肠癌患者预后的重要生物标志物。

乙型肝炎病毒X蛋白对HepG2细胞羧末端结合蛋白反应蛋白表达的影响

目的研究乙型肝炎病毒X蛋白（HBx）对博莱霉素诱导HepG2细胞DNA双链断裂（DSB）损伤修复关键因子羧末端结合蛋白反应蛋白（CtIP）的影响。方法建立稳定表达HBx的HepG2肝癌细胞株（HepG2-HBx）及空质粒对照细胞株（HepG2-vec）。用博莱霉素诱导细胞DSB损伤后，用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡情况，用实时定量PCR及Western blot检测CtIP的mRNA与蛋白表达水平，并用激光共聚焦显微镜观察CtIP蛋白在细胞内的定位情况。多组数据采用单因素方差分析和SNK—q检验；两组数据间比较用t检验。结果经检测转染HBx基因的HepG2细胞（HepG2-HBx）能稳定表达HBx。博莱霉素处理后，HepG2-HBx细胞与HepG2-vec细胞的凋亡比例分别为16．90％±0．89％和15．30％±0．86％，差异无统计学意义（q=2．074，P〉0．05），但死亡细胞比例分别为8．71％±0．74％和4．90％±0．46％，差异有统计学意义（q=7．126，P〈0．01）；同时两种细胞株都出现了细胞周期G2／M期阻滞，差异有统计学意义（F=11．401，P〈0．05）。HBx使CtIP蛋白表达水平和mRNA表达水平均下调，HeDG2-HBx细胞与HepG2-vec细胞CtIP蛋白的相对表达量分别为0．66±0．04、0．73±0．05，差异有统计学意义（t=2．314，P〈0．05）;CtIP mRNA相对表达量分别为1．00±0．06、1．23±0．08，差异有统计学意义（t=2．732，P〈0．05）。同时观察到CtIP蛋白主要在细胞胞核内表达。结论HBx能干扰肿瘤抑制蛋白CtIP的表达，可能影响细胞DSB损伤的修复。

高速铁路发展及标准体系浅析

文章立足中国高速铁路发展现状,对欧洲、日本两大高速铁路出口地的发展现状、标准体系、未来发展规划进行了分析,探讨了中国高速铁路产业转型及升级、新兴技术领域绿色创新的发展方向。