银花泌炎灵片对产ESBLs大肠埃希菌体外抑菌活性研究

目的研究中药制剂银花泌炎灵片对产ESBLs大肠埃希菌的抑菌活性。方法对40株大肠埃希菌临床株进行产ESBLs表型筛选和确认,采用K-B(Kirby-Bauer)纸片扩散法进行药敏实验,采用2倍平板稀释法测定银花泌炎灵片对产ESBLs大肠埃希菌的体外最低抑菌浓度(MIC)。结果在40株大肠埃希菌临床分离株中检出产ESBLs菌株18株(检出率45.0%),所有产ESBLs株均为多重耐药菌株,对氨苄西林、头孢唑啉、哌拉西林、头孢呋辛酯、复方新诺明、头孢克洛的耐药率均超过90%,对亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦,阿米卡星、阿莫西林/克拉维酸、头孢吡肟及头孢西丁的耐药率较低,均在30%以下。银花泌炎灵片对产ESBLs大肠埃希菌临床株及质控对照株ATCC25922和ATCC35218的MIC均为200mg/mL～100 mg/mL,抑菌活性差异无统计学意义(P>0.05)。结论银花泌炎灵片对产ESBLs大肠埃希菌具有较强的体外抑菌作用。

DNA测序技术在不同药物压力下大肠埃希菌耐药性产生机理研究中的应用

目的:对比长时间传代前后细菌对抗生素和抑菌中药敏感性的改变情况,检测某些耐药基因是否发生基因突变。方法:分别在含有左氧氟沙星和银花泌炎灵片的M-H肉汤培养基中对大肠埃希菌ATCC25922进行200代传代培养,测定最小抑菌浓度(MIC)并与给药前MIC进行对比,以PCR法扩增细菌解旋酶基因(gyrA)和拓扑异构酶Ⅳ基因(parC),进行测序。结果:与给药前比较,经含左氧氟沙星的培养基中连续传代的大肠埃希菌对左氧氟沙星的MIC明显上升(P<0.01),而经含银花泌炎灵片培养基连续传代的大肠埃希菌对银花泌炎灵片的MIC未出现明显差异(P>0.05)。基因测序结果,只有经左氧氟沙星培养基中连续传代的大肠埃希菌ATCC25922编码parC基因第381位发生突变,腺嘌呤(A)→胸腺嘧啶(T),其编码的赖氨酸(127)→天冬酰胺,并在第386位碱基插入胸腺嘧啶(T);而gyrA基因未见有碱基突变或插入。结论:在特定的环境压力下左氧氟沙星比银花泌炎灵片更容易诱导大肠埃希菌耐药性的产生,而parC基因突变可能是细菌耐药性产生的原因之一。

抑菌中药银花泌炎灵片的体外和体内抗细菌内毒素作用

目的:探讨传统抑菌中药银花泌炎灵片的抗细菌内毒素(LPS)作用,为其应用提供理论依据。方法:以银花泌炎灵片为研究对象,体外采用鲎实验法检测其抗LPS活性。体内实验选取90只ICR小鼠,随机分为空白对照组,药物对照组,LPS对照组,LPS低、中、高剂量预防组和治疗组,每组10只。低、中、高剂量预防组和治疗组小鼠分别灌服低剂量(0.4g·mL-1)、中剂量(0.5g·mL-1)和高剂量(0.6g·mL-1)银花泌炎灵片溶液,药物对照组小鼠灌服0.6g·mL-1银花泌炎灵片溶液,LPS对照组和空白对照组小鼠分别灌服等体积生理盐水。除空白对照组和药物对照组外,各预防组(于末次给药后3h)、治疗组(于第1次给药前3h)和LPS对照组均按18mg·kg-1腹腔注射LPS溶液,记录给予LPS溶液后48h内各组小鼠的体质量、血液指标和脏器指数。结果:体外鲎实验法,将100g·L-1银花泌炎灵溶液稀释至6.25g·L-1后仍然具有抗LPS活性。体内实验,与空白对照组比较,LPS对照组小鼠体质量、白细胞(WBC)数、红细胞(RBC)数、血红蛋白浓度(Hb)、红细胞比容(Hct)和血小板(PLT)数均降低(P<0.05或P<0.01),脾脏和肺脏指数升高(P<0.01)。与LPS对照组比较,低剂量治疗组和中剂量预防组小鼠体质量在注射LPS后24h升高(P<0.05),高剂量和中剂量预防组小鼠体质量在注射LPS后36h升高(P<0.05),中剂量预防组小鼠体质量在注射LPS后48h升高(P<0.05);高剂量治疗组小鼠WBC数升高(P<0.05);低剂量治疗组和中剂量预防组小鼠RBC数升高(P<0.01),低剂量治疗组和低、中、高剂量预防组小鼠Hb数升高(P<0.05或P<0.01),低、高剂量预防组小鼠Hct数升高(P<0.05或P<0.01),低、高剂量预防组小鼠PLT数升高(P<0.05);中剂量治疗组小鼠肝脏指数降低(P<0.01);高剂量治疗组小鼠肺脏指数降低(P<0.05);低、高剂量治疗组和低、中、高剂量预防组小鼠脾脏指数均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:银花泌炎灵片在体外和体内均具有抗细菌LPS的活性。

银花泌炎灵片乙醇提取物对大肠埃希菌超微结构的影响及其抑菌作用机制

目的：研究银花泌炎灵片95％乙醇提取物对大肠埃希菌标准菌株和临床耐药菌株的体外抑菌活性，阐明其抑菌机制。方法：采用管碟法分别测定银花泌炎灵片95％乙醇提取物对大肠埃希菌标准菌株ATCC25922和18株泌尿系感染产超广谱B一内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌临床分离株的体外抑菌活性，测定其最小杀菌浓度（MBC）。扫描和透射电子显微镜观察药物作用后菌体超微结构改变。结果：银花泌炎灵片95％乙醇提取物对大肠埃希菌标准菌株ATCC25922和产ESBLs大肠埃希菌的MBC50和MBC90分别为100g·L-1和150～300g·L-1。扫描电子显微镜下观察，经银花泌炎灵片95％乙醇提取物作用后大肠埃希菌菌体表面出现塌陷，两端可见凹陷和刺状突起，有的细菌严重变形；负染透射电子显微镜下观察，药物作用后菌体折光性明显变差，菌体变形出现褶皱，且部分细胞壁出现凹陷；超薄切片透射电子显微镜下观察，药物作用后菌体固缩膨大，细胞壁模糊不清甚至缺失，细胞质固缩解体，形成小空泡。结论：银花泌炎灵片95％乙醇提取物对大肠埃希菌标准菌株ATCC25922和产ESBLs大肠埃希菌均有一定程度的抑制作用，其抑菌机制可能是药物干扰或破坏大肠埃希菌细胞壁合成或破坏菌体内大分子量蛋白，以致菌体超微结构出现改变。

银花泌炎灵片对大肠埃希菌的抑菌机制

目的检测银花泌炎灵片95%乙醇提取物对大肠埃希菌的体外抑菌活性;并通过绘制时间-杀菌曲线(KCs)探讨其抑菌机理。方法采用琼脂稀释法进行大肠埃希菌标准菌株ATCC 25922和20株泌尿系统感染者临床分离株的体外抑菌活性研究,测定最小抑菌浓度(MIC)并绘制KCs。结果银花泌炎灵片95%乙醇提取物对大肠埃希菌标准菌株和临床分离株都具有抑菌活性,MIC50-90均为50～100 mg/mL;从绘制出的KCs可以看出:与对照组相比,银花泌炎灵片95%乙醇提取物可以使细菌对数生长期延迟出现,并缩短细菌平台期。结论银花泌炎灵片95%乙醇提取物对大肠埃希菌具有一定的抑菌活性,其初步抑菌机理可能与其延长细菌的分裂周期,抑制细菌的生长繁殖有关。

血栓心脉宁片抑制急性血瘀大鼠血栓形成的研究

目的观察血栓心脉宁片对急性血瘀大鼠血液流变学的影响,及其体外抗血栓形成的作用。方法采用两次注射肾上腺素加冰水浴的方法建立急性血瘀大鼠模型,观察血栓心脉宁片对大鼠血液流变学的影响及对体外血栓形成的影响。结果血栓心脉宁片高、中、低剂量组对急性血瘀大鼠全血黏度及血浆黏度均有明显的改善作用,且均有抑制其体外血栓形成的作用,以中剂量组效果最为明显,与脑心通胶囊具有相似的作用。结论血栓心脉宁片具有改善急性血瘀大鼠血液流变学及抗血栓形成的作用。

血栓心脉宁片对急性血瘀大鼠血浆GMP-140及vWF的影响

目的观察血栓心脉宁片对急性血瘀大鼠血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)及血管性血友病因子(vWF)的影响。方法采用两次注射肾上腺素加冰水浴的方法建立急性血瘀大鼠模型,观察血栓心脉宁片对大鼠血浆GMP-140及vWF的影响。结果血栓心脉宁片高、中、低剂量组均可显著降低急性血瘀大鼠血浆GMP-140及vWF含量,以中剂量组效果最为明显,与脑心通胶囊具有相似的作用。结论血栓心脉宁片具有降低急性血瘀大鼠血浆GMP-140及vWF含量的作用。

抗栓中药血栓心脉宁片对血管内皮细胞全基因表达谱的影响

目的研究抗栓中药血栓心脉宁片(XXT)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)基因表达谱的影响,探讨XXT对血管内皮细胞作用的分子机制。方法 XXT与HUVEC共培养24h,运用Bio 35khuman Genome Array全基因组表达芯片,检测XXT对HUVEC基因表达谱的影响,分子注释系统MAS3.0软件进行聚类分析。荧光定量PCR(Real Time–PCR)验证基因表达谱结果。结果 XXT作用内皮细胞24h后,基因芯片分析筛选出差异表达大于1.5倍的基因2 130个,其中上调基因689个,下调基因1 399个,包括转录调节、炎症反应、免疫反应、细胞黏附、抗凋亡、信号转导等相关基因,经Real Time-PCR验证结果与基因芯片结果一致。结论 XXT可影响血管内皮细胞多条细胞信号传导通路相关的基因表达,如参与细胞凋亡、氧化应激和抗凝等多个基因。

血栓心脉宁片对急性血瘀大鼠血浆TXA_2及PGI_2含量的影响

目的观察血栓心脉宁片对急性血瘀大鼠血浆血栓素A2(TXA2)及前列环素(PGI2)的影响。方法采用两次注射肾上腺素加冰水浴的方法建立急性血瘀大鼠模型,观察血栓心脉宁片对大鼠血浆TXA2及PGI2含量的影响。结果血栓心脉宁低、中、高剂量组均可使急性血瘀模型大鼠血浆TXA2含量明显降低,而使血浆PGI2含量明显升高,以中剂量组效果最为明显,与脑心通胶囊具有相似的作用。结论血栓心脉宁片可降低急性血瘀模型大鼠血浆TXA2含量,提高大鼠血浆PGI2含量。

脂筏在柯萨奇B3病毒感染心肌细胞中作用

目的探讨脂筏在柯萨奇B3病毒(CVB3)感染心肌细胞中的作用,旨在为阐明CVB3致病的分子机理及寻找新的抗病毒靶点提供依据。方法用甲基-β-环糊精(MβCD)去除细胞膜维持脂筏稳定性的胆固醇分子后感染CVB3,用Western blot法检测CVB3 VP1蛋白的表达并测定病毒的滴度,同时观察补充外源性胆固醇恢复MβCD对CVB3感染的抑制作用。结果用MβCD去除胆固醇分子破坏细胞膜脂筏结构,可抑制CVB3感染细胞;1.2、5.5和10 mmol/L MβCD去除细胞膜胆固醇CVB3滴度分别为(4.2±0.06)、(3.5±1.05)、(3.0±0.15)和(2.0±0.15)lgP-FU/mL,均低于无MβCD处理对照组的(5.7±0.06)lgPFU/mL(P<0.001);补充外源性胆固醇可恢复MβCD对CVB3感染的抑制作用。结论细胞膜脂筏在CVB3感染心肌细胞中起重要作用,是病毒进入细胞的关键因素。

重组胸腺素α1对流感疫苗的增效作用

目的探讨重组胸腺素α1(Recombinant human thymosinα1,rhTα1)对免疫低下小鼠接种流感疫苗后免疫应答效果的影响。方法将BALB/c小鼠随机分为5组:疫苗组、环磷酰胺+疫苗组、环磷酰胺+疫苗+rhTα1低浓度(0.2 mg/kg)组、环磷酰胺+疫苗+rhTα1中浓度(0.4 mg/kg)组、环磷酰胺+疫苗+rhTα1高浓度(0.8 mg/kg)组。经小鼠腹腔注射环磷酰胺,80 mg/kg,共3次,隔天给药;肌肉接种流感疫苗,1.8μg血凝素/只;皮下注射低、中、高浓度rhTα1,0.2 ml/只,每周2次,连续4周。动态监测各组小鼠血清血凝抑制(HI)抗体效价,并观察小鼠脾脏指数及脾脏形态学结构的变化。结果与疫苗组相比,环磷酰胺+疫苗组小鼠体内HI抗体效价降低,脾指数降低,脾脏组织病理形态退化;与环磷酰胺+疫苗组相比,环磷酰胺+疫苗+rh-Tα1各浓度组HI抗体效价升高,小鼠脾指数增加,脾脏组织病理形态明显改善。结论重组胸腺素α1可提高免疫低下小鼠流感疫苗接种的免疫效果,为寻找适合免疫低下人群的疫苗增强剂提供了有益的尝试。