雷帕霉素诱导SiHa细胞自噬并通过MMP2途径抑制细胞迁移

探讨雷帕霉素诱导宫颈癌Si Ha细胞自噬后对细胞迁移的影响及分子机制,可为宫颈癌治疗新靶点和新方法的发现提供实验依据。本文采用不影响Si Ha细胞活性的雷帕霉素最大浓度处理Si Ha细胞后,通过检测细胞中微管相关蛋白轻链3Ⅱ(microtubule-associated protein light chain 3Ⅱ, LC3Ⅱ)/LC3Ⅰ的变化,观察雷帕霉素对细胞自噬的诱导作用;通过划痕实验观察雷帕霉素诱导Si Ha细胞自噬后细胞迁移能力的变化;通过免疫印迹法观察雷帕霉素诱导Si Ha细胞自噬后细胞中基质金属蛋白酶2 (matrix metalloproteinase 2, MMP2)水平的变化。结果显示:20 nmol/L雷帕霉素处理Si Ha细胞后,细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明显增加,为未处理组的291.282%±28.463%(P<0.05),表明成功诱导Si Ha细胞自噬;雷帕霉素诱导Si Ha细胞自噬后,细胞迁移率为29.886%±1.807%,与未处理组的38.914%±1.422%相比明显降低(P<0.05),同时细胞中MMP2的相对表达水平明显降低(为未处理组的61.310%±17.843%)(P<0.05)。上述结果表明,雷帕霉素诱导自噬后可能通过MMP2途径抑制Si Ha细胞的迁移。

基于SNP位点及系统进化树分析辽宁省水痘-带状疱疹病毒基因特征

目的分析辽宁省水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)基因序列,确定流行的优势基因型及核苷酸、氨基酸变异情况。方法PCR方法对2017-2020年辽宁省31株VZV基因组开放阅读框(open reading frame,ORF)1、6、12、16、17、21、22、35、37、38、50、54、55、56、60、66的部分片段进行特异性扩增,并对扩增产物进行序列测定,结合单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)及系统进化树两种方法确定病毒基因型别,分析不同位点核苷酸及氨基酸的变异情况。结果辽宁省31株VZV均为Clade 2基因型。31株VZV序列与Clade 2基因型参考株相比,核苷酸与氨基酸的同源性分别为99.6%~100.0%和98.7%~100.0%,遗传距离为0~0.002。与V-Oka疫苗株相比,31株VZV均有位点发生变异,导致氨基酸发生变化,包括1株在ORF1的541~549位点发生ACCTCCCAA缺失,2株在ORF1的780~781位点发生CGG插入;31株VZV的24个位点发生点突变,其中同义突变15处,错义突变9处,编码区内突变20处,编码区外突变4处,编码区内的同义突变13处,编码区内的错义突变7处。发生在编码区内的错义突变包括731位点C→T的碱基突变,790位点C→T的碱基突变,791位点C→T的碱基突变,17829位点A→G的碱基突变,24567位点G→A的碱基突变,98261位点T→C的碱基突变,101579位点A→C的碱基突变,导致编码氨基酸分别发生由精氨酸→赖氨酸、精氨酸→谷氨酰胺、精氨酸→谷氨酰胺、组氨酸→精氨酸、精氨酸→谷氨酰胺、酪氨酸→组氨酸、亮氨酸→精氨酸的变化。结论Clade 2基因型为近年来辽宁省VZV流行的优势基因型,辽宁省VZV病毒株的基因序列高度保守。研究VZV基因特征,对研究辽宁地区VZV分子流行病学具有重要意义,并为水痘控制和疫苗接种计划提供科学依据。

蛋白酶体抑制剂MG132对宫颈癌SiHa细胞中p53蛋白泛素化降解的影响

目的探讨蛋白酶体抑制剂MG132对人宫颈癌SiHa细胞中p53蛋白泛素化降解的影响。方法采用MTT法筛选的不同浓度蛋白酶体抑制剂MG132处理SiHa细胞,通过Western blot法测定细胞内p53蛋白相对含量(以GAPDH为内参),同时设未处理组(未加入MG132)。结果20μmol/L为不影响SiHa细胞活性的MG132最大浓度,因此选用低于该浓度的1、3和5μmol/L MG132处理SiHa细胞。经1、3和5μmol/L MG132处理的SiHa细胞中p53蛋白相对表达量分别为1.210±0.252、1.057±0.130和1.475±0.210,均明显高于未处理组(0.034±0.026),差异均有统计学意义(P<0.001),且MG132对p53降解的抑制作用呈剂量依赖性(P<0.01)。结论蛋白酶体抑制剂MG132可抑制SiHa细胞内p53蛋白泛素化降解,且呈剂量依赖性。