蒙药京大戟奶制前后肠道毒性变化及成分分析

目的探究蒙药京大戟奶制前后肠道毒性变化与成分组成变化的相关性。方法小鼠灌胃给予生品京大戟、牛奶浸泡京大戟(奶制)及水浸泡京大戟(水制)的95%乙醇提取物,以粪便含水量、小鼠各肠段炎症因子TNF-α和IL-1β水平为指标,考察京大戟奶制前后的泻下作用及肠道致炎毒性变化;采用LC-MS/MS分析京大戟奶制前后95%醇提取物的成分组成变化。结果与空白组相比,京大戟生品、水制品可导致小鼠粪便含水量及各肠段TNF-α和IL-1β水平显著升高(P<0.05);与生品组相比,奶制品组各指标均显著下降(P<0.05),水制品组则无显著差异,表明水制不能起到减毒作用,辅料牛奶是降低京大戟毒性的关键辅料。质谱分析结果显示,京大戟中共鉴定出50个成分,其中萜类成分38个,酚酸类成分6个,其它成分6个,奶制后各成分含量均有不同程度的下降。对生、制品京大戟质谱数据进行主成分分析(Principal component analysis,PCA)及正交偏最小二乘法-判别分析(Partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA)发现,生、制品成分可明显聚为2类,通过t检验筛选出生、制品的13个差异性成分,其中11个是萜类成分,表明京大戟奶制后萜类成分组成发生显著变化。炮制后牛奶辅料残液中检测出来源于京大戟的17个成分,其中16个为萜类成分,表明京大戟萜类成分在炮制浸泡过程中转移至辅料牛奶中。结论京大戟奶制后毒性降低、泻下作用缓和,其减毒机制可能与牛奶浸泡炮制过程中,萜类成分转移至牛奶中,饮片中毒性成分含量降低有关。

HPLC法同时测定玉屏风散中色原酮、黄酮和内酯类9种成分的含量

目的建立以高效液相色谱法同时测定玉屏风散中3类化合物(黄酮类、色原酮类和内酯类)9种有效成分:升麻素苷、毛蕊异黄酮苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥矛酚苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素、白术内酯III和白术内酯I含量的分析方法。方法采用KromasilC18ODS柱(4.6mm×250mm,5μm);柱温30℃;流动相为乙腈-0.15%(V/V)磷酸水溶液,梯度洗脱;流速1mL/min;检测波长220nm。结果9种成分在各自的线性范围内,标准曲线呈良好的线性关系,相关系数均在0.9998以上;平均加样回收率分别为104.0%,100.7%,99.6%,99.1%,98.6%,96.0%,100.0%,99.4%,101.8%,RSD值均小于3%。结论该方法简单、准确、重现性好,可为玉屏风散的质量监控及新剂型研究提供更加全面、可靠的检测方法。

噬菌体展示日本血吸虫SSj14单抗的模拟抗原表位及其免疫保护性研究

为获得日本血吸虫保护性单抗SSj14的模拟抗原表位,研究其对日本血吸虫的免疫保护作用。用纯化的SSj14单抗筛选噬菌体随机12肽库,对33个克隆进行ELISA验证,获得30个阳性克隆,DNA序列分析表明这30个克隆分属11个多肽序列,分析比较发现这些多肽具有“H_NQ_X_S_PF_X_X_L_A_T”的相似基序。进而选取3个阳性单克隆及混合阳性噬菌体克隆进行Western_blotting实验,证明都有良好的抗原性。用它们免疫BALBc鼠,并攻击血吸虫尾蚴,观察免疫鼠抗血吸虫感染的保护效果和IL_12的变化,结果表明:筛选获得的噬菌体阳性克隆具有良好的免疫原性,能诱导免疫鼠产生高滴度的抗血吸虫的特异性抗体;和对照组鼠相比,免疫小鼠,分别获得13.84%～52.83%的减虫率,34.17%～65.47%的肝脏减卵率以及28.89%～73.78%的粪便减卵率;三次免疫之后,和对照组相比,免疫小鼠体内IL_12水平均有升高。为发展日本血吸虫疫苗提供了新思路、新途径。

玉屏风散醇提部位HPLC指纹图谱研究

目的:采用高效液相色谱法建立玉屏风散醇提部位的指纹图谱。方法:用Sepax GP-C18ODS柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-0.15%磷酸水为流动相梯度洗脱,检测波长220 nm,流速1 mL/min,柱温30℃,分析时间100 min。结果:方法学考察表明,所用色谱方法符合定性研究要求;标示出玉屏风散醇提部位38个共有峰,并对各共有峰进行初步归属判断。结论:建立了玉屏风散醇提部位HPLC指纹图谱分析法,为玉屏风散及其制剂的质量控制提供了科学依据,同时可为该方的物质基础研究提供重要的分析手段。

江苏地产浒苔多糖对大鼠急性酒精性胃黏膜损伤的保护作用

为研究江苏地产浒苔多糖对酒精性大鼠胃黏膜损伤的保护作用和机制,将Wistar大鼠随机分成生理盐水组、模型组、浒苔多糖各剂量组(100,200,400 mg/kg)以及阳性对照组(奥美拉唑,300 mg/kg),每组各10只。采用酒精灌胃致胃黏膜损伤模型。给予浒苔多糖7 d后,观察胃黏膜组织的大体和病理组织改变,测定胃液分泌量、胃酸浓度,胃组织中黏液蛋白、丙二醛(MDA)、氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽还原酶(GSH-Px)、大鼠白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、以及环氧酶(COX-2)等生化指标的活力或含量。结果表明:浒苔多糖能明显改善胃黏膜组织损伤情况,降低损伤积分(p<0.01),提高酒精性损伤抑制率;在高剂量组能显著降低胃液量的分泌(p<0.05),提高胃组织GSH-Px,降低炎性因子IL-1β和TNF-α的释放(p<0.01);各剂量组均能降低胃组织中MDA的含量和COX-2的活力(p<0.05或p<0.01),显著提高SOD的活力以及胃黏液蛋白的浓度(p<0.05或p<0.01)。江苏地产浒苔多糖对大鼠急性酒精性胃黏膜损伤具有一定保护作用,其机制可能与增强胃黏膜保护因子,提高抗氧化、降低脂质过氧化、抑制炎症因子释放的能力有关。

噬菌体展示随机肽库及其在抗原表位研究上的应用

本文主要介绍了噬菌体展示系统的原理,并就噬菌体表面展示系统的不同表达载体类别,分别做了描述, 同时讨论该展示系统在抗原表位研究上的应用。

智能移动终端在仪器分析实验教学中的应用

随着智能移动终端功能的增加、移动网络的加速以及应用程序的多样化,通过智能移动终端获取网络教育资源并进行移动学习的方法已为学生所熟知。分析仪器分析实验教学中存在的问题,阐述智能移动终端应用于仪器分析实验教学的策略。实践表明,智能移动终端应用于实验教学,弥补传统实验教学中的不足,激发学生的参与欲与实践欲,提高实验教学质量,获得大多数学生的欢迎。

探索调节性T细胞在雷公藤甲素诱导肝损伤中作用

调节性T细胞（Treg）缺乏被认为参与了多种肝脏病理过程,如胆道闭锁、非酒精性脂肪性肝炎等.但Treg在药源性肝损伤中的作用少有研究.雷公藤甲素为传统中药雷公藤提取得到的有效活性成分,有研究报道雷公藤甲素能通过调节Treg对肾移植模型起到药效治疗作用.随着剂量升高,雷公藤甲素显现出明显肝毒性,而免疫因素在其肝毒性中作用并不明确.为了阐明雷公藤甲素是否通过干扰Treg影响肝脏免疫系统诱发肝毒性,探讨雷公藤甲素的肝毒性机理,采用了雷公藤甲素与Treg过继转输合用或者与抗CD25抗体合用,观察雷公藤甲素诱发C57BL/6雌性小鼠肝脏毒性的变化情况.结果显示,给以雷公藤甲素后,血清转氨酶水平升高,肝细胞坏死,肝脏Treg比例降低,脾脏Treg比例变化不明显,Treg转录因子和IL-10的mRNA水平降低;Treg过继转输外源性补充Treg后,能降低雷公藤甲素引起的血清转氨酶水平升高,减轻肝脏病变程度;而给予抗CD25抗体清除Treg后,能进一步升高雷公藤甲素诱导的血清转氨酶水平升高,肝脏病变程度加重.综上所述,Treg参与了雷公藤甲素干扰肝脏免疫介导的肝损伤,雷公藤甲素可削弱IL10的免疫抑制和免疫耐受的作用,Treg可能成为潜在的保护雷公藤甲素肝毒性的靶细胞.

高效液相色谱法测定四角蛤蜊、菲律宾蛤仔中呈味核苷酸

建立高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)同时测定四角蛤蜊、菲律宾蛤仔中呈味核苷酸5’-尿苷酸(5’-UMP)、5’-鸟苷酸(5’-GMP)、5’-肌苷酸(5’-IMP)和5’-腺苷酸(5’-AMP)含量。采用Waters Atlantis T3(4.6 mm×250 mm,3μm)色谱柱,以0.01 mol/L KH_2PO_4溶液-甲醇为流动相梯度洗脱,紫外检测器在260 nm处进行检测,外标法进行定量。结果表明:各呈味核苷酸线性关系良好,相关系数R^2均为0.999 9,回收率在96.19%~103.25%内,相对标准偏差在1.08%~1.28%内。四角蛤蜊与菲律宾蛤仔中均含有4种呈味核苷酸,其中5’-AMP含量最多,其次是5’-IMP和5’-UMP,而5’-GMP含量最低。该方法简单,重现性好、灵敏度和准确度高,适用于四角蛤蜊、菲律宾蛤仔中呈味核苷酸含量测定,为研究贝类风味及贝类食品的开发提供一定的依据。

UPLC法测定大鼠血浆中Liguzinediol浓度以及动力学研究

目的建立测定大鼠血浆中Liguzinediol浓度的UPLC测定方法,探讨其在大鼠体内的药代动力学。方法血浆样品经甲醇提取后,上清液经N2吹干流动相复溶后注入UPLC分析,色谱柱为UPLC HSS T3柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),流动相为甲醇-水(28∶72,V∶V),流速为0.4 ml.min-1,检测波长278 nm。SD大鼠6只,iv给药10 mg.kg-1后,用UPLC法测定给药后大鼠血浆中Liguzinediol的浓度,利用DAS软件拟合并计算其药代动力学参数。结果 Ligu-zinediol的血药浓度在0.41～52.4 mg.L-1范围内呈线性,提取回收率均>80%,日内、日间精密度<10%,符合生物样品分析要求。大鼠静脉注射10 mg.kg-1的Liguzinediol,其血药浓度(C)-时间(t)曲线呈二室模型,主要药动学参数T12β、AUC(0-∞)、CL分别为1.62 h、18.36 mg.h.L-1、0.71 L.h-1.kg-1。结论该方法操作简便、快速、专属性强,可用于Liguzinediol的药代动力学及成药性研究。

江苏沿海低值贝类资源综合利用现状与展望

潮间带滩涂湿地是江苏沿海海岸线的重要特征,特定的生态环境适于海洋贝类生物资源的生长,江苏省贝类资源丰富,然而贝类资源的开发利用仍较落后,未形成系统的产业化链条,存在资源利用率低、加工水平落后、高附加值产品少等问题。为促进江苏丰富低值贝类资源的综合开发,综述了贝类生物资源品质评价与种质资源优化,贝类资源生物效应研究,贝类资源高值化利用研究等方面,分析江苏贝类生物资源研究开发的现状,展望低值贝类资源的综合利用与规模化开发,形成上、中、下游的产业化发展,带动江苏海洋贝类集约化开发,促进江苏海洋经济发展。

超滤工艺对血塞通注射液中有效成分的影响研究

目的:采用正交试验法,研究超滤工艺对血塞通注射液有效成分的影响。方法:以血塞通注射液中有效成分三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd为检测指标,HPLC法分析,观察其有效成分超滤前后的瞬时浓度变化,并采用正交试验法考察不同孔径聚砜膜(PS膜)、操作压力、药液温度以及药液浓度对血塞通注射液有效成分动态透过率的影响。结果:在超滤过程中三七皂苷R1和人参皂苷Rg1的动态透过规律基本一致,超滤工艺各组的平均动态透过率范围为45%～95%,其中药液浓度具显著性影响,其他因素无显著性影响。人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd的动态透过规律影响基本一致,超滤工艺各组的平均透过率范围分别为2.8%～62%、1.8%～45%,超滤过程中这两个成分损失较大,其中药液温度和膜孔径对人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd的动态透过率有显著性影响,药液浓度对人参皂苷Rd动态透过率也有较显著的影响。结论:该研究为血塞通注射液的工艺优化提供了客观的技术指导。

江苏产菲律宾蛤仔提取物的抗疲劳作用

研究了江苏产菲律宾蛤仔提取物(RE)对运动小鼠抗疲劳能力的影响。将小鼠随机分为6组,正常组、模型组、阳性组以及低、中、高3个剂量组。小鼠灌胃15 d后,采用小鼠游泳疲劳模型,观察各组小鼠负重游泳时间、不负重游泳后血清乳酸(LA)、尿素氮(BUN)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)指标的差异。结果:高、中剂量组小鼠负重游泳时间明显长于模型组和低剂量组;与模型组相比,3个剂量组小鼠血清乳酸(p<0.01)含量显著降低,且呈剂量依赖性;肌酸激酶(p<0.01)、乳酸脱氢酶(p<0.01)活力均下降,超氧化物歧化酶(p<0.05)活力升高,尿素氮含量仅高剂量有显著性差异。结论:菲律宾蛤仔提取物能提高小鼠运动耐力,加速疲劳的消除。

江苏东部沿海四种低值贝类软体中牛磺酸动态积累规律与适宜采收期研究

以采自江苏东部沿海的文蛤、青蛤、四角蛤蜊及菲律宾蛤仔四种低值贝类为样本，研究其软体中牛磺酸的动态变化规律，探讨这四种贝类的最适采收期。建立以邻苯二甲醛（OPA）柱前衍生化结合HPLC—UV测定牛磺酸的方法，以Kromasil 50mm×2．1mm C18为分离柱，甲醇-0．05mol／L乙酸钠（pH6．0）23：77为流动相，流速0．3mL／min洗脱，紫外检测波长为330nm。该方法可以准确测定四种贝类软体中牛磺酸的含量，且灵敏度高，重现性好。贝类的生长具有明显季节性，一般春夏季较秋冬季生长较快，尤其夏季水温为25～28℃时为快速生长期，此时，贝类软体中牛磺酸含量达到最高。菲律宾蛤仔牛磺酸含量最高在7月，约为42．79mg／g；而文蛤、青蛤、四角蛤蜊软体中牛磺酸含量最高在6月，分别约为27．48、16．59、15．00mg／g。若从产量和有效成分牛磺酸的含量变化上综合考虑，建议菲律宾蛤仔牛磺酸最佳采收期为7月，文蛤、青蛤、四角蛤蜊最佳采收期为6月。

血清微小RNA在中药肝毒性临床前评价中的应用研究

通过对19种具有潜在肝脏毒性的中草药进行临床前安全性评价,在观测体重、摄食量、血清生化指标、脏器系数与肝脏组织病理学改变的同时,探讨血清微小RNA(miRNA)作为新型候选标志物在中草药肝损伤诊断中的应用价值。结果表明:与溶剂对照组相比,血清miRNA-122水平显著升高的给药组有6组,而血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平显著升高的分别为2组和3组,其中五倍子组表现为急性药源性肝损伤。在血清miRNA-122的时间相关性和剂量相关性分析中,与血清ALT和AST相比,血清miRNA-122呈现出更高的敏感性,表现为更早期和更大幅度的显著升高。说明血清miRNA-122可作为中草药肝损伤的新型候选诊断标志物,与肝脏组织病理学改变具有良好的相关性,且较传统血清生化学指标更为敏感。

四角蛤蜊废弃肉渣制备ACE抑制肽的工艺研究

采用胰蛋白酶水解四角蛤蜊废弃肉渣制备ACE抑制肽。以体外ACE抑制率为指标,在单因素实验的基础上,通过响应面法优化酶解工艺。结果表明,胰蛋白酶水解四角蛤蜊肉渣制备ACE抑制肽的最佳工艺条件为:酶解温度48℃,pH为8.50,胰蛋白酶加入量为0.60%,酶解时间为2h,酶解产物的平均ACE抑制率为77.08%,与预测值77.22%的相对误差为0.18%,证明响应面法对于酶解肽工艺优化具有指导意义。

玉竹百合蛤蜊汤煎煮工艺及抗疲劳作用的研究

目的研究经典食疗方玉竹百合蛤蜊汤的最佳煎煮方法及其抗疲劳的作用,为今后以该方为基础的抗疲劳保健品的开发提供理论依据。方法为优选玉竹百合蛤蜊汤的煎煮工艺,以浸膏得率,总多糖、牛磺酸的含量为考察指标,以加水量、提取时间、提取次数为考察因素,采用正交试验优选其煎煮方法;并按照2003版《保健食品检验与评价技术规范实施手册》的要求,设正常组、模型组、阳性组及玉竹百合蛤蜊汤低、中、高3个剂量组,经口给予样品,采用小鼠游泳疲劳模型,对比各组小鼠负质量游泳时间、不负质量游泳后血清乳酸(LA)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)指标的差异,观察玉竹百合蛤蜊汤对小鼠的抗疲劳能力影响。结果玉竹百合蛤蜊汤最佳煎煮工艺为加10倍量水,提取3次,每次60min,在最佳煎煮工艺下,总多糖含量为(79.48±7.82)mg/g,牛磺酸含量为(1.95±0.02)mg/g,干浸膏得率为(26.82±0.53)%。高、中剂量组的玉竹百合蛤蜊汤能显著延长小鼠负质量游泳时间(P<0.05);与模型组相比,3个剂量组的玉竹百合蛤蜊汤能显著降低小鼠血清乳酸(P<0.01)及丙二醛(P<0.01)的含量,且呈剂量依赖性,并能显著降低肌酸激酶(P<0.01)、乳酸脱氢酶(P<0.01)的活力,并升高超氧化物歧化酶的活力。结论本实验确定了玉竹百合蛤蜊汤的最佳煎煮工艺,并证明了该食疗方具有较好的抗疲劳功效,为该方作为保健食品进一步开发提供依据。

探针药物评价藤黄酸对肝细胞色素P450酶亚型的影响

目的用Cocktail探针药物法,研究藤黄酸对大鼠肝细胞色素P450(CYP450)的影响。方法将SD大鼠随机分组,藤黄酸组给予藤黄酸0.5%CMC-Na溶液(2mg·mL-1),以0.5%CMC-Na为空白对照,在一定的时间点采集血样,通过HPLC检测探针药物在大鼠体内的代谢情况,以评价藤黄酸对肝细胞色素P450酶的影响。结果藤黄酸组中咖啡因和氨苯砜的代谢情况与空白组没有显著性差异,但氯唑沙宗的代谢加快,t1/2缩短。结论藤黄酸对代谢酶CYP1A2及CYP3A4的影响不明显,但对代谢酶CYP2E1具有诱导作用。

四角蛤蜊核苷类成分纯化工艺研究

采用大孔吸附树脂与阳离子交换树脂串联纯化四角蛤蜊醇沉上清液中核苷类成分,以核苷的纯度和回收率为指标,考察树脂的型号、上样浓度、水洗体积、洗脱剂浓度及流速对纯化效果的影响,以期得到最佳的纯化工艺。确定大孔吸附树脂的型号及最佳工艺为:SP207型,质量浓度250 mg/m L,p H值为5.0,水洗除杂体积是3 BV,洗脱液为体积分数5%乙醇。进一步通过离子交换树脂纯化,确定树脂型号及最佳纯化工艺为:001~*7阳离子交换树脂,质量浓度6.3 mg/m L,氨水∶乙醇(体积比3∶30)溶液洗脱,洗脱流速是3 BV/h。经两种树脂串联纯化后,四角蛤蜊醇沉上清液中核苷类成分的质量分数由1.80%提高至50.60%,总回收率为70.32%。工艺验证结果表明SP207大孔吸附树脂与001~*7阳离子交换树脂串联纯化核苷类成分的方法稳定可行,能够用于四角蛤蜊核苷类成分的分离纯化。