新疆幼畜和人非典型轮状病毒的调查和鉴定

自１９８４至１９９４年１０年间，在新疆采集了绵羊、山羊羔、仔猪、犊牛、骆驼羔和鸡的粪样１９５９份，以及住院腹泻婴幼儿、无症状新生儿和成人腹泻的粪样２５５份，共２２１４份。用ＰＡＧＥ法检测了这些粪样中的轮状病毒和非典型轮状病毒。按Ｓａｉｆ电泳型分组法，检出的各组轮状病毒是：Ａ组２７６份，在成人腹泻和驼羔中未检出；Ｂ组２６份，都是从羊羔和仔猪中检出；Ｃ组２２份，都是从仔猪中检出；Ｄ组２份，在鸡中检出；似Ｅ组１份，从仔猪中检出。取检出的各组非典型轮状病毒９株，即羊羔Ｂ组２株（ＫＢ－６３和ＬＢ－６０），仔猪Ｂ组４株（ＭＰＢ－１、２，ＳＰＢ－３、４），仔猪Ｃ组２株（ＳＰＣ－１１、ＺＰＣ－１２），仔猪似Ｅ组１株（ＭＰＢ－５），口服接种剥夺初乳的本种动物，接种后１２－１６小时动物都发生急性水样腹泻，并检出大量病毒。对这９株病毒和１株成人腹泻轮状病毒（ＡＤＲＶ），用ＥＬＩＳＡ和对流免疫电泳检测Ａ、Ｂ组组抗原，结果ＡＤＲＶ、羊羔Ｂ组、仔猪Ｂ组和似Ｅ组共８株病毒都只有Ｂ组组抗原。用Ａ、Ｂ组轮状病毒生物素核酸探针斑点杂交分别检测８株和１０株病毒，血清学检测为Ｂ组者都只与Ｂ组有杂交信号。Ｃ组的两株则既无Ａ、Ｂ组组抗原，也不与Ａ、Ｂ?

从绵羊羔和山羊羔腹泻粪样中检出B组轮状病毒

用聚丙烯酰胺凝胶电泳法,从新疆巴里坤县的22份绵、山羊羔腹泻粪样中,检出11份具有B组轮状病毒的RNA电泳图型,联合电泳表明,绵羊羔与山羊羔的B组轮状病毒电泳图型完全相同,电镜观察表明,该病毒与典型轮状病毒(A组)具有相同的形态特征,但易降解破碎,口服接种剥夺初乳的绵羊羔和山羊羔,经11～13小时羔羊发生急性水样腹泻,并排出大量病毒,经A组轮状病毒组抗原ELISA检测,不具有共同组特异抗原,但经对流免疫电泳检测,它与成人腹泻轮状病毒(B组)具有共同组特异抗原,从而证实我国存在与国外报道相同的羊B组轮状病毒,既感染绵羊羔也感染山羊羔。是引起绵,山羊羔急性腹泻的不可忽视的病原之一。

化学修饰法制备B组轮状病毒生物素核酸探针及应用研究

用亚硫酸氢钠—乙二胺溶液对B组轮状病毒的ssRNA胞嘧啶修饰和转氨基作用，与生物素e—氨基己酸N—羟基琥珀酰亚胺酯反应，制备探针与样品在硝酸纤维膜上进行点杂交，经亲合素—碱性磷酸酶系统显色，可测出106.25－212.5pg的RNA靶序列，特异性试验表明：B组生物素探针只能与B组核酸杂交，而与无关核酸无杂交信号，用B组探针检测45份仔猪腹泻粪样，检出B组阳性5份，检出率11．1％，明显高于PAGE法，实验结果表明，生物素核酸探针制备简单并且有特异、灵敏、稳定的优点，可用于各组轮状病毒的检测。

中国绵羊进行性肺炎(梅迪)流行的血清学调查

用琼脂凝胶免疫扩散(AGID)试验检查了中国特定的绵羊群体中对绵羊进行性肺炎(Ovineprogressive pneumonia,OPP)病毒的抗体的分布。从中国华北和西北的新疆、内蒙、河北以及四川等省区的1,410头成年绵羊的血清样品中,病毒—特异性血清学分布率从内蒙与河北绵羊的0%到新疆绵羊的6%。年龄—特异性分布率在边区莱斯特(Border Leicester)纯种羊从1至4岁羊的37%到5至10岁羊的53%,在边区莱斯特与和田羊杂交三代(BHE_3)从1至4岁羊的8%到5至10岁羊的13%.品种—特异性分布率从纯种和田羊的3%到纯种边区莱斯特羊的44%。边区莱斯特与和田羊杂交一代(BHE_1)与杂交三代(BHE_3)对致病病毒的血清学分布率明显地低于边区莱斯特纯种羊(P<0.01),BHE_3对 OPP 病毒的血清学分布率明显地高于BHE_1(P<0.01)。

应用聚合酶链反应检测伪狂犬病病毒DNA

选用标准的伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）闽Ａ株，经ＢＨＫ２１细胞培养，提取ＰＲＶＤＮＡ作为摸板；合成１对２０－ｍｅｒ寡核苷酸作为引物；选择扩增序列由２６２个碱基对组成的位于编码多糖蛋白ｇｐ５０基因，用耐热的Ｔａｑ－ＤＮＡ聚合酶经３０个循环以后，扩增的产物直接用凝胶电泳检测，并用标准分子量确定。结果表明：以ＰＲＶＤＮＡ作为模板进行扩增，有扩增产物生成，以同科的疱疹病毒ＤＮＡ作为模板在相同的条件下进行ＰＣＲ扩增，无扩增产物生成，说明ＰＲＶＰＣＲ扩增是特异的。ＰＣＲ技术检测ＰＲＶＤＮＡ敏感度为２８．５ｐｇ．ＰＲＶＰＣＲ技术的建立，为伪狂犬病诊断和流行病学研究提供了更敏感、可靠的手段。

抗犬细小病毒高免血清的制备和应用

应用差速离心和密度梯度平衡离心技术从患 CPV 性肠炎的犬粪便和肠内容物中提纯的 CPV 抗原接种犬,制备了高效价的抗血清。用该血清共治疗78头病犬,治愈率达82%(64/78).实践表明,自制的高免血清对患 CPV性肠炎的病犬具有治疗和控制疾病发展的作用,特别是早期病例,仅用抗血清即可治愈,对中期病犬结合支持和对症疗法可大大提高治愈率,有很高的应用价值。

轮状病毒的生物素核酸探针及分子杂交的研究

用亚硫酸氢钠-乙二胺溶液对轮状病毒的ssRNA胞嘧啶修饰和转氨基作用,与生物素e-氨基己酸N-羟基琥珀酰亚胺酯反应,制备探针与结合在硝基纤维膜上的核酸样品杂交,然后用亲和素和生物素化碱性磷酸酶温育,2-萘酚磷酸和固蓝B盐显色,阳性反应呈蓝紫色;轮状病毒生物素核酸探针可检测20～39pgRNA靶序列。SA_(11)或NCDV探针可识别同源的SA_(11)和NCDV核酸序列,也能识别同属A群的Wa株,羊轮状病毒S_1株的核酸序列。检测141份猪、羊和人腹泻粪样,杂交阳性118份,并对几株细胞培养物进行了杂交试验。结果表明,该法制备的生物素探针具有稳定、特异、灵敏等特点,较其他化学方法制备生物素探针简单,取材容易,价廉,可以广泛应用于各种微生物的基础研究及其所致疾病的临床诊断。

体外转录制备轮状病毒生物素核酸探针

通过体外转录将生物素化UTP掺入到轮状病毒的单链RNA中制成探针,把它与结合在硝基纤维膜上的核酸样品杂交,经亲和素一生物素化碱性磷酸酶温育,α-萘酚磷酸和固蓝盐显色后,阳性反应呈蓝紫色;轮状病毒生物素核酸探针可检测到20PgRNA靶序列。SA_(11)或NCDV探针可识别同源的SA_(11)、NCDV、Wa和Sl的核酸序列。检测141份猪、羊和人腹泻粪样,118份呈阳性。对几株细胞培养物进行了杂交试验。结果表明,生物素核酸探针具有稳定、特异。

生物素标记寡核苷酸探针检测B群轮状病毒

用５′端接氨基标记法，用生物素对Ｂ群轮状病毒（ＧＢＲＶ）ＩＤＩＲ株具有群特异性的３片段基因上２３ｂｐ寡核苷酸序列进行标记，经高效薄层层析板（ＨＰＴＬＣ）纯化，制备了Ｂ群轮状病毒生物素寡核苷酸探针，探针显色灵敏度达１０Ｐｇ，与ＧＢＲＶ、ＫＢ６３株基因杂交可检测到１００ｐｇ靶序列，而与Ａ群和Ｃ群轮状病毒及无关基因均不产生杂交信号，该探针可用于Ｂ群轮状病毒的检测、鉴定，以及同群不同毒株间基因相关性研究。

光敏生物素标记核酸探针检测A群轮状病毒的研究

采用光敏生物素标记Ａ群轮状病毒（ＧＡＲＶ）全基因组ＲＮＡ，制备了ＧＡＲＶ群特异核酸探针，该探针与样品进行打点杂交，经亲和素－碱性磷酸酶（ＡＶ－ＡＰ）系统显色，可检出１００ｐｇ病毒ＲＮＡ序列。试验表明轮状病毒光敏生物素核酸探针具有特异、灵敏、稳定的特点，可用于ＧＡＲＶ的检测和进行基因相关性研究。

鸡源霉形体的分离和鉴定

对乌鲁木齐市 2个大型鸡场鸡毒霉形体 (Mycoplasmagallisepticum ,MG)、滑液囊霉形体 (M .synoviae ,MS)感染情况用血清平板凝集试验 (SPA)进行了血清学抽样调查。结果表明 ,凝集抗体的阳性率分别为 6 6 .92 %和 35 .90 %,其中商品鸡场MG和MS的阳性率分别为 82 .5 0 %和 5 2 .5 0 %。从疑似MG、MS感染鸡的气管、肺、气囊、鼻裂和跗关节腔分离到 19株分离物。经初步鉴定 ,分离物均为霉形体属成员。用生化和血清学及其他生物学方法 ,对这些分离物进行了鉴定。结果 6株为MG ,3株为MS ,其余 10株也属于霉形体。

B组轮状病毒RT-PCR来源的cDNA探针核酸诊断方法的建立

近十年来，国内外学者相继报道在人以及牛、羊、猪、大鼠的腹泻粪样中检出Ｂ组轮状病毒〔１－３〕。洪涛等于１９８３年首次报道成人腹泻轮状病毒（ＡＤＲＶ）属于Ｂ组轮状病毒〔４〕。目前，轮状病毒Ｂ组已被公认为引起人及不同动物腹泻的流行病学的重要因素。由于Ｂ组轮...

PRV特异性糖蛋白gp50基因片段的克隆探针制备

在ＢＨＫ２１细胞中增殖伪狂犬病病毒（ＰＲＶ），提纯ＰＲＶＤＮＡ，选编码特异性糖蛋白ｇｐ５０基因中的２６２ｂｐ片段进行ＰＣＲ扩增。扩增产物经ＫｐｎⅠ和ＳａｌⅠ双酶切后，将２２２ｂｐ片段与质粒ｐＵＣ１９连接构成重组子ｐＵＰ。通过转化大肠杆菌ＪＭ８３、Ａｍｐｒ和α互补效应筛选后，扩增、提纯重组子ｐＵＰ，用ＫｐｎⅠ和ＳａｌⅠ酶切，电泳回收克隆的２２２ｂｐ片段。用光敏生物素标记２２２ｂｐ片段和重组子ｐＵＰ制备的探针，分别检出４６．８ｐｇ和９３．６ｐｇ的ＰＲＶＤＮＡ，且ｐＵＰ探针只与ＰＲＶ呈杂交阳性反应，与ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２及ＣＭＶ呈阴性反应。

诊断B组轮状病毒的三种酶联免疫方法的建立

用从当地分离鉴定的山羊Ｂ组轮状病毒ＫＢ－６３毒株，在剥夺初乳的山羊羔体内传代繁殖病毒，制备抗原，建立了酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）、斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）及生物素－亲和素系统酶联免疫吸附试验（ＢＡＢＥＬＩＳＡ）。这三种方法经阻断试验、重复性试验以及交叉试验表明，其特异性、重复性好。以双盲法将此三种方法与对流免疫电泳法（ＣＩＥ）和聚丙烯酰胺凝胶电泳法（ＰＡＧＥ）作了对比研究，表明此三种方法均较ＣＩＥ和ＰＡＧＥ法敏感。用这三种方法对成人、婴儿、绵羊羔、山羊羔、仔猪的１２０份腹泻粪样（包括实验室接种材料）进行检测，三种方法的检出率分别为１６．７％、１８．３％、２５％，而ＣＩＥ和ＰＡＧＥ的检出率分别为１２．５％和８％。

用ABC-Dot-ELISA检测轮状病毒抗原与抗体

Hawkes等(1982)建立了斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)后,已有许多学者将其用于寄生虫、细菌、病毒的检测,认为比普通ELISA简单、特异、敏感、快速。70年代末建立的生物素亲和素酶联免疫吸附试验(ABC-ELI-SA),大大提高了ELISA的敏感性。我们结合两者之长,建立了生物素亲和素斑点酶联免疫吸附试验(ABC-Dot-ELISA),用于检测仔猪、羔羊及婴儿腹泻粪便中轮状病毒抗原及羊(山羊、绵羊)与人血清中的轮状病毒抗体,并同Dot-ELI-SA、ABC-ELISA及ELISA进行了比较。

斑点ELISA检测轮状病毒抗原和抗体

检测动物及人轮状病毒抗原和抗体的斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA),与病毒核酸电泳(CRNA,PAGE)和ELISA作比较,检测抗原的符合率分别为78％、89.5％。敏感度分别为1.565、1.856;检测血清时,以ELISA为对照,符合率为94.8％,敏感度为1.04,特异性检验结果证明,本法简单、敏感、特异、快速、经济,适合基层使用。

新城疫免疫防治对策

新城疫(ND)是目前世界上普遍流行对生产威胁极大的一种病毒性传染病.死亡率高者达80%,非典型性新城疫常造成误诊,因此,加强综合防治是当务之急,免疫接种是防治ND的最有效方法.

鸡法氏囊病诊断和治疗

新疆石油局钻井三公司鸡场,1993年4月其罗曼育成鸡鸡群暴发急性传染,经病理剖检实验室诊断为传染性法囊病,用八一农学院微生物室生产的鸡法氏囊高免卵黄抗体进行紧急被动免疫等措施,迅速控制了疫情,减少了损失.现报导如下: