粮谷中呕吐毒素管式化学发光免疫分析法的研究与应用

目的:建立一种准确度高、重复性优的快速检测粮谷中呕吐毒素(DON)的管式化学发光免疫分析法(CLIA)。方法:本研究基于抗原抗体的特异性反应,选择磁性微粒为固相载体,通过优化磁微粒的稀释度、反应时间等工作条件,建立了高准确度、重复性良好的DON-CLIA。结果:本研究建立的DON-CLIA的检测范围为5~185 ng/m L;最低检测限为3.82 ng/m L(样本检测限为0.076μg/g);准确度相对偏差为6.64%,重复性变异系数为2.32%,均小于10%;DON的添加回收率在90%~110%之间。结论:本研究建立的DON-CLIA的检测范围、检测限、准确度、重复性、回收率,均符合实际工作的要求,是一种快速、高效、准确的化学发光免疫分析法,适用于大量样本的DON含量的测定。

固相萃取-高效液相色谱同时测定大米中的4种烟碱农药残留量

建立了高效液相色谱法同时测定大米样品中呋虫胺、噻虫胺、吡虫啉、吡虫清4种烟碱农药残留量的检测方法,对4种烟碱农药在ENVI-Florisil和Carb复合固相萃取柱上的保留行为进行了研究。样品用乙腈提取,固相萃取净化,HPLC-DAD分离检测,外标法定量。峰面积与标准溶液浓度在0.1～1.0 mg/L范围内呈良好的线性关系,相关系数大于0.9996。样品加标回收率为75.5%～96.0%,相对标准偏差为0.49%～4.36%(n=6),检出限达到0.004 mg/kg。

竞争化学发光酶免疫测定技术检测盐酸克伦特罗

目的：建立一种检测盐酸克伦特罗（clenbuterol, CLB）的竞争化学发光酶免疫测定法（chemiluminescent enzyme immunoassay, CLEIA）。方法基于CLB的竞争酶联免疫吸附测定法（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）,通过优化反应温度、反应时间和缓冲体系pH建立了CLB的CLEIA测定法。用CLB小鼠中毒模型评价CLEIA检测法对实际样本的检测效果,并将CLEIA与LC-MS法的相关性进行了比较。结果 CLEIA法测定CLB的检测范围为0.0433~42.5363μg/L,检测限为0.0178μg/L,变异系数小于10%,回收率为95%~110%,对莱克多巴胺和沙丁胺醇仅有极低的交叉反应性。所建立的 CLEIA 法与 LC-MS 法在检测实际样本时具有较高的相关性。结论本研究建立的CLEIA法操作简便,检测限、灵敏度、准确度、特异性均符合检测要求,可用于实际样品的检测。

压电免疫传感技术快速筛检花生中过敏原

目的：采用压电免疫传感技术快速筛检花生过敏原。方法对花生主要过敏蛋白进行分离纯化,免疫新西兰大白兔获得花生抗体,对其的效价,半数抑制浓度等值进行测定。运用自组装的压电免疫传感器包被花生抗体,制作标准曲线,确定灵敏度,回收率及重现性。结果分离纯化花生过敏原蛋白纯度为90.7%,最适的花生包被抗原浓度为0.1μg/mL,自组装的压电传感器检测花生过敏原浓度在1~316μg/mL范围内具有较好的线性关系,灵敏度为0.1μg/mL,回收率介于92.3%～113.4%之间,重现性变异系数为6.04%。结论本项目建立的压电免疫传感技术检测花生过敏原与目前较多的光学分析相比灵敏度更高,实现了快速、在线检测,成本低,仪器简单,具有广阔的应用空间。

方便食品检验中大肠菌群的不确定度评定

目的对方便食品检验中大肠菌群的不确定度进行评定。方法依据CNAS-GL05:2006《测量不确定度要求的实施指南》和GB/T4789.3–2010《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》进行。结果本次实验中的扩展不确定度为0.325,采用此方法适合于大肠菌群检验结果的评定。结论采用合并样本标准偏差计算检验结果不确定度的方法较科学,其方法适合于同类样品不确定度评定。

蛋白质芯片技术在食品检验上的应用

蛋白质芯片是近年来兴起的一种强有力的研究方法,具有高通量、高敏感和所需样品少的显著特点。该文探讨了蛋白质芯片在食品检验中的应用前景,主要表现在食品营养学、食品卫生检测和转基因食品的检测。

大豆转基因检测中DNA提取方法的比较研究

为筛选出用于大豆DNA提取的适宜方法,分别使用Bayer法、DuPont法、Monsanto法、Qiagen和Tiangen试剂盒法提取大豆子粒DNA,并通过紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳法与实时荧光聚合酶链式反应分析DNA质量。结果显示:Bayer法提取的DNA含有较多杂质,抑制实时荧光聚合酶链式反应;Monsanto法提取的DNA纯度差且得率低,不符合检测要求;DuPont法、Qiagen与Tiangen试剂盒法能提取到纯度好、得率高、完整性好的DNA,符合实时荧光聚合酶链式反应的检测要求,但是Qiagen试剂盒法成本过高。因此,DuPont法与Tiangen试剂盒法适用于大豆转基因检测中的DNA提取。

酶联免疫吸附分析法检测花生过敏原的研究

本文利用自己研制的花生过敏原免疫新西兰大耳兔,获得效价为200 000的抗花生过敏原特异性抗体,建立了花生过敏原蛋白的间接竞争酶联免疫(ELISA)检测方法。结果表明:花生抗原在0.01～100 ng/mL范围内具有较好的线性关系,其竞争标准曲线为y=-0.1212x+0.9285(r=0.9819),Ic50为34.28 ng/mL,检出限为0.1 ng/mL。

高效液相色谱-串联质谱法测定红曲类保健品中的桔青霉素

本文建立了高效液相色谱-串联质谱对红曲类保健品中桔青霉素含量进行检测的方法.采用70%甲醇-水溶液提取,取出部分提取液经HLB固相萃取小柱净化,采用高效液相色谱-串联质谱法测定其中桔青霉素的含量,采用多反应监测(MRM)方式监测离子对m/z 251→233(桔青霉素).桔青霉素浓度在5—100 ng·m L-1范围内线性关系良好(R2=0.9994),精密度RSD表示均低于8.2%,方法的定量限为50μg·kg-1,平均回收率在72.4%—82.0%的范围内.该方法快速、灵敏,结果准确,比免疫亲和柱净化方法操作简便,成本更低,适用于基质复杂的保健品中桔青霉素的定性定量检测.

TaqMan探针实时荧光PCR方法检测粪便中微小隐孢子虫卵囊

以微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)特异性DnaJ-like蛋白基因的保守序列为模板,设计和合成特异性引物和荧光标记探针,通过检测微小隐孢子虫卵囊DNA和加标模拟样品进行敏感性分析,建立标准曲线,并对其特异性和干扰性进行评价。结果显示,该方法只对微小隐孢子虫卵囊进行特异性扩增,其他常见的肠道原虫和肠道病原菌均不能扩增;微小隐孢子虫纯卵囊基因组DNA检测的灵敏度为26个/ml;对加标粪样可检测至2 600个/ml卵囊。提示本研究建立的实时荧光PCR检测微小隐孢子虫卵囊方法具有快速、特异性和敏感性高等优点。

商品化正相硅胶固相萃取柱-气相色谱法检测橄榄油中的蜡含量

目的：建立一种前处理简单快速、环保且重复性好的橄榄油中蜡含量的检测方法。方法采用商品化正相硅胶固相萃取柱（硅胶含量为500 mg）替代国际和国家标准中推荐的自制硅胶固相萃取柱,对橄榄油中的蜡酯组分进行分离,然后通过气相色谱-氢火焰离子法检测分析。结果本研究建立的方法仅需50 mg样品,试剂总用量不到30 mL, C40酯、C42酯、C44酯和C46酯的检出限分别为0.10、0.12、0.14、0.17μg/mL,相对标准偏差小于8%,加标回收率为83.3%~93.3%。结论本研究建立的方法简单,重复性好,准确度高,有效解决了国家标准中橄榄油蜡含量检测中前处理繁琐耗时、试剂损耗大、样品回收率低以及结果稳定性较差的问题。并可以成功应用于不同等级橄榄油样品的检测,为特级初榨橄榄油、初榨橄榄油和油橄榄果渣油的鉴别奠定基础。

动物性食品中莱克多巴胺检测方法研究进展

莱克多巴胺作为激素类添加剂,对动物机体产生副作用,同时影响消费者的健康。近年我国进出境口岸屡次在进口动物性食品中检出莱克多巴胺。本文对近几年来动物性食品中莱克多巴胺的检测方法新进展和新兴技术做了大量调查和整理,旨在为出入境口岸动物性食品中莱克多巴胺的检测提供一定的参考,为进出口动物性食品的安全控制提供理论依据。

2012年张家港口岸进境冷冻猪肉制品中单核细胞增生李斯特氏菌污染调查

目的了解进境冷冻猪肉制品单增李斯特菌污染状况,建立流行病学监测网,以便制定良好的预防控制措施,更有效地预防和控制由该菌引起的食源性疾病和疫情的发生。方法 mini VIDAS快速筛选、显色平板分离、API Listeria鉴定结合国标法进行单增李斯特菌检测。结果 2012年共检测冷冻猪肉制品171批,检出单增李斯特菌14株,阳性率为8.19%(14/171)。结论单增李斯特菌污染较为严重,应加强对冷藏生畜、肉类食品的卫生管理。

猪δ冠状病毒研究进展

猪δ冠状病毒是近年发现的一种新型猪肠道病冠状病毒,可引起猪急性腹泻和新生仔猪死亡。目前没有有效的抗病毒治疗药物和疫苗。自从2014年初美国报道检出PDCoV以来,PDCoV快速蔓延至多个国家,具有全球流行的潜在趋势,引起了世界各国的极大关注及众多的调查研究。本文就PDCoV的病原学、流行病学、检测技术等方面的研究进展进行综述,为该病的进一步研究和有效防控提供依据。

樟芝皿培菌丝提取物体外对SPCA-1肺癌细胞增殖的抑制作用

利用细胞克隆实验、划痕实验和alamarBlue^TM细胞活力测定实验评价樟芝皿培菌丝体醇提物石油醚萃取相和氯仿萃取相对SPCA-1非小细胞肺癌的体外抑制作用,并进一步利用流式细胞术Annexin V-FITC(fluorescein isothiocyanate)/PI(propidium iodide)双染测定细胞早期凋亡率、流式细胞术2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(2',7'-dichlorofluorescindiacetate,H2DCFDA)单染测定ROS(reactive oxygen species)释放量、流式细胞术PI单染测定细胞周期变化和ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)检测细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、p53和PARP的表达,探讨樟芝皿培菌丝体醇提物石油醚萃取相和氯仿萃取相抑制SPCA-1增殖的作用机理。研究结果表明:樟芝皿培菌丝体醇提物石油醚萃取相和氯仿萃取相均能抑制SPCA-1细胞克隆的形成、迁移和增殖,石油醚萃取相的活性明显好于氯仿萃取相;石油醚萃取相通过促进SPCA-1释放ROS来诱发线粒体依赖性早期凋亡的发生,并使促凋亡蛋白Caspase-3和p53表达上升,同时抑制蛋白PARP表达,从而发挥其抑制SPCA-1肺癌细胞增殖的作用;而氯仿萃取相主要通过将SPCA-1细胞阻滞在S期抑制其增殖。

食用植物油中农药残留检测技术的研究进展

我国农产品中农药残留的中毒事件和进出口贸易中农药残留超标事件时有发生,已成为影响农业可持续发展的重要问题,因此农药残留检测技术也在迅速发展。文章综述了现阶段对植物油中农药残留检测技术的研究进展。主要从前处理和检测方法 2方面进行分析,根据前处理方法和检测方法的不同,分别介绍了各类前处理方法如液液萃取法(liquid-liquid extraction,LLE)、固相萃取法(solid phase extraction,SPE)、基质固相分散萃取法(matrix solid phase dispersion,MSPD)、分散固相萃取(disperse solid phase extraction,d SPE)法、凝胶渗透色谱法(gel permeation chromatography,GPC)等方法的原理和过程,以及各类检测方法如气相色谱法、气相色谱-质谱联用法(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)、液相色谱法和液相色谱-串联质谱联用法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)等的特点和应用范围。文章总结各类方法的优缺点,并提出了食用植物油中农药残留分析方法的发展趋势。

动物性食品中莱克多巴胺检测方法研究进展

莱克多巴胺作为激素类添加剂，对动物机体产生副作用，同时影响消费者的健康。近年我国进出境口岸屡次在进口动物性食品中检出莱克多巴胺。本文对近几年来动物性食品中莱克多巴胺的检测方法新进展和新兴技术做了大量调查和整理，旨在为出入境口岸动物性食品中莱克多巴胺的检测提供一定的参考，为进出口动物性食品的安全控制提供理论依据。

牛奶中无乳链球菌DNA提取方法的比较

目的以牛奶中的致病性无乳链球菌作为研究对象,对9种常用的细菌核酸提取方法进行比较。方法选用紫外分光光度计法和实时荧光PCR法对各方法进行系统评估。结果超声波处理结合天根吸附柱的方法能提取到得率较高、纯度较好的DNA,结合实时荧光PCR法后对牛奶中无乳链球菌的检测灵敏度能达到90 cfu;天根吸附柱法提取所得DNA得率稍低,结合实时荧光PCR法后对牛奶中无乳链球菌的检测灵敏度也能达到90 cfu;溶菌酶法和超声波破碎提取法用于实时荧光PCR后对牛奶中无乳链球菌的检测灵敏度能达到350 cfu;Chelex-100法更适于纯菌的检测,该法结合实时荧光PCR法对无乳链球菌的检测灵敏度能达到350 cfu的灵敏度。结论应根据样品类型、方法要求和检测成本来选择适合的核酸提取方法。

食品过敏原标签要求及生产过程控制初探

食品过敏已成为世界关注的重大公共卫生学和食品安全问题。食品过敏原是引起食品过敏的直接诱因,具有耐加工和交叉反应的特性。国际食品法典委员会(Codex Alimentarius Commission,CAC)规定了必须在食品标签中标注的8种可能引起过敏反应的食品及其配料,包括含有麸质的谷类、甲壳动物及其制品、鸡蛋及其制品、鱼类及其制品、花生、大豆及其制品、奶和奶制品(包括乳糖)、坚果及其制品、浓度不低于10 mg/kg的亚硫酸盐。欧盟、美国、日本、澳大利亚和新西兰等已根据国际食品法典委员会对过敏原的要求出台强制性标识食品过敏原的法规,这在一定程度上对我国出口食品企业造成了影响。本文通过对比CAC以及欧盟、中国、美国、日本、澳大利亚和新西兰等地有关过敏原标签的要求,提醒出口食品加工企业减少因标签不合格造成的经济损失,并为其在生产加工过程中过敏原的控制提出建议。

红棕榈油的短期毒性试验研究

为评价红棕榈油作为烹调用油的安全性,按照GB 15193.22—2014《食品安全国家标准28天经口毒性试验》对马来西亚产红棕榈油进行短期毒性试验。将100只SD大鼠分为5组,按照人体摄入量的5.12、10.24、20.48倍设置红棕榈油低、中、高剂量组,同时设置溶剂对照组(玉米油组)和阴性对照组(棕榈油组)。采用掺入饲料和经口灌胃两种方式同时连续给予大鼠红棕榈油28 d,每天观察大鼠临床表现,每周记录体质量、摄食量,计算食物利用率等指标,试验前和结束时对大鼠进行眼部检查,结束时进行血液学、血生化、尿常规检测,并进行大体解剖,计算脏器系数并进行组织病理学检查。结果表明,红棕榈油以雌性2.04、4.11、8.31 g/kg,雄性2.12、4.23、8.45 g/kg的实际剂量给予大鼠28 d,受试大鼠临床表现良好,体质量、食物利用率、脏器质量、脏器系数均无异常改变;血液学、血生化及尿常规指标均在正常范围;各脏器病理组织学检查均未见与受试样品有关的病理改变。短期毒性试验结果表明红棕榈油未对大鼠产生毒性效应,短期经口食用是安全的。