农杆菌介导的河北杨遗传转化体系的建立

以兼具生态和能源植物功能的木本模式植物——杨树(河北杨)为材料,研究了携带促生长基因(35S-DAS5)的根癌农杆菌载体介导的河北杨遗传转化若干因素对转化效果的影响。结果显示,较适宜的转化系统为预培养2-4 d,农杆菌菌液(OD600值为0.4)侵染20 min,共培养4 d,在含30 mg/L卡那霉素(Km)的培养基上诱导不定芽,生根培养基中Km的适宜浓度为10 mg/L。

分子遗传改良技术在杨树上的研究与应用进展

杨树作为全球使用最为广泛的生态、能源、分子遗传木本模式植物之一,其种质资源研究改良对我国生态环境建设意义重大。综述不同目的基因(抗虫、抗病、抗除草剂、抗逆境、降低木质素、促生长等)转化杨属植物的研究与应用,分析目前为止杨树分子改良研究应用发展现状、存在问题及解决途径,为杨树遗传改良的进一步发展提供参考。

濒危蒙药沙冬青毛状根代谢组学分析

为了探讨利用蒙药蒙古沙冬青毛状根生产其药用成分的可能性,本研究采用超高效液相色谱-串联四级杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)技术分别对蒙古沙冬青毛状根和自然根组织进行化学成分分析,并通过主成分分析(PCA)和偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)等多元变量分析方法研究二者间的代谢产物差异。结果显示,蒙古沙冬青毛状根和自然根样本在正、负离子模式下分别得到3982和4209种代谢物,差异代谢物分别为1706和1639种,其中表达上调的代谢物分别有1455和1095种;注释到KEGG的差异代谢物有171和134种,主要富集在8大类65条代谢通路:氨基酸代谢、次生代谢产物生物合成、碳水化合物代谢、脂质代谢、辅助因子和维生素代谢、萜类和聚酮化合物代谢、能量代谢及核苷酸代谢等通路;蒙古沙冬青毛状根差异代谢产物主要集中在氨基酸代谢和次生代谢产物生物合成通路中,正离子模式下涉及的差异代谢物分别占37.4%和32.7%,负离子模式下占28.4%和26.1%;次生代谢产物生物合成途径中涉及黄酮/类黄酮生物合成、生物碱生物合成、β-内酰胺菌素生物合成、芥子油苷生物合成、苯丙烷代谢等11条代谢通路,其中黄酮/类黄酮生物合成途径涉及的差异代谢产物最多,占次生代谢产物生物合成途径中差异代谢物的34%,其次是有关生物碱生物合成的差异代谢物,占24%;黄酮/类黄酮生物合成途径中涉及的差异代谢物有88.2%呈现上调。本研究结果可为蒙古沙冬青毛状根代谢产物积累及途径解析提供理论依据。

濒危药材甘肃贝母试管小鳞茎再生的研究

目的:以甘肃贝母鳞茎为外植体,建立组培快繁体系,为资源保护和有效利用奠定基础。方法:研究了不同的外植体消毒方法,不同的激素浓度及配比,不同的培养条件等对原球茎发生、生长膨大、发芽生长的影响。结果:通过内吸性杀菌剂预处理,结合二次消毒可以较有效的控制外植体的污染;原球茎诱导过程中以鳞瓣为外植体的最优激素组合是ZT 3 mg/L+MEJA 3 mg/L+IAA 3 mg/L+BR 0.3 mg/L(或GA 4+7 0.2 mg/L),以鳞心为外植体最优激素组合是ZT 2 mg/L+SA 10 mg/L+BR 0.2 mg/L(或GA 4+7 0.2 mg/L),鳞心诱导效率高于鳞瓣;原球茎生长膨大阶段,鳞瓣原球茎生长膨大的最优激素组合是NAA 3 mg/L+SA 40 mg/L+BR 0.3 mg/L(或S-3307 5mg/L),鳞心原球茎生长膨大的最优激素组合是NAA 2 mg/L+SA 20 mg/L+BR 0.3 mg/L(或S-3307 3 mg/L),鳞瓣原球茎生长膨大效果明显优于鳞心原球茎;不同大小的试管小鳞茎在发芽生长特性方面存在较大差异。结论:建立了甘肃贝母试管小鳞茎的组培再生体系。

野生濒危中藏药桃儿七人工育苗技术

目的:建立一种桃儿七人工育苗方法,解决传统育苗方法耗时长、育苗率低的问题,提高幼苗移栽成活率。方法:采用保护地育苗,通过温度控制和植物生长调节剂处理,研究其对桃儿七种子发芽、真叶发生、幼苗生长的影响。结果:与传统大田育苗方法相比,本技术显著提高了桃儿七种子萌发率,缩短了幼苗真叶的发生时间,增加了真叶和不定根数目,使幼苗提前1个生长周期移栽。结论:建立了桃儿七人工育苗方法,与传统育苗方法相比,可以缩短育苗时间10个月左右。

中国野生华东葡萄抗霜霉病抑制消减文库构建及初步分析

【目的】分离和获得中国野生华东葡萄抗霜霉病相关基因片段的EST序列。【方法】以高抗霜霉病的中国野生华东葡萄(V.pseudoreticulata)白河-35-1株系为材料,以田间接种葡萄霜霉菌的幼嫩叶片为处理,以田间自然生长的未接种幼嫩叶片为对照,分别提取RNA,采用抑制消减杂交技术构建抗霜霉病基因的消减正交和反交两个文库,在文库中,选择3个EST序列,用半定量PT-PCR检验构建文库中EST片段的表达情况。【结果】构建的文库中EST片段的大小在150～900bp,经筛选文库,得到正交库有效的ESTs85条,反交库ESTs29条,所获序列经过BLASTn和BLASTx网上序列比对,其中有78条ESTs与GenBank中其它植物相关基因序列有较高的同源性,31条为未知功能序列,已登录GenBank114条ESTs,登录号:FG106789-FG106902。进一步利用半定量RT-PCR对文库中3个基因的表达情况进行了分析,证明这些EST序列是可以表达的。【结论】经初步分析这些序列的功能,涉及抗病信号传导、能量代谢、蛋白质代谢、核酸代谢、光合作用及膜运输和代谢等方面,其中获得与抗病直接相关的ESTs23条,下一步是通过对获得的EST序列进行末端快速分析(RACE)技术,获得抗霜霉病基因全长序列,并进行原核和真核表达研究验证基因全长序列功能,为研究葡萄抗霜霉病的基因提供依据。

华东葡萄抗白粉病杂种后代cDNA文库的构建及EST序列分析

以抗白粉病的华东葡萄杂种后代6-12-4株系为试材,利用SMARTTM技术构建了白粉病病原菌诱导的全长cDNA文库。经检测,原始文库滴度为2.50×106pfu·mL-1,重组率达到99%,扩增文库滴度为3.0×109pfu·mL-1,重组率达到95%,插入片段长度在500～2000bp。随机挑取300个克隆,测序获得260条质量较高的ESTs,聚类及拼接后,共得到183个一致序列(所获序列已经提交GenBank,登录号为FG579859-FG580039)。经蛋白功能预测分析,获得含有TPR结构域的小的富含谷氨酰胺的蛋白、MYB类转录因子、水通道蛋白、富含脯氨酸蛋白、亲环素蛋白、ACI14蛋白、转脂蛋白等抗病相关基因,涉及到植物的信号转导,胁迫诱导,防卫反应等方面。这些EST序列为利用中国野生华东葡萄进行抗白粉病育种研究和利用提供了有价值的抗病基因片段,为丰富世界葡萄属植物抗白粉病基因提供序列数据。

濒危药用植物桃儿七的离体培养研究

以桃儿七种子诱导的无菌苗为材料,研究了外源激素对芽诱导、增殖和生根的影响,建立了桃儿七离体培养再生体系。结果表明:芽诱导阶段,采用3.0 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1GA3激素组合,出芽率最高可达85.71%,缩短出芽时间30～40 d,在添加3.0 mg·L-16-BA+0.2 mg·L-1IAA的MS培养基上利于增殖,增殖速度快,增殖系数1.63。以WPM+1.5 mg·L-1IAA+0.5 mg·L-1NAA的培养基培养30 d后,生根率可达60.1%。

濒危药用植物羌活的研究进展

对羌活的化学成分、药理作用、临床应用及人工栽培进行了综述,并对其研究方向进行了展望,为羌活资源的进一步保育开发提供参考和依据。

杂交构树在兰州地区的生长动态及刈割期

本研究以兰州地区种植的杂交构树(Broussonetia papyrifera)为材料,对两种水肥条件下杂交构树的生长量和营养成分动态变化规律进行了研究,并采用灰色关联度分析和权重赋值法对两次刈割时的株高、产量、粗蛋白(crude protein,CP)、粗灰分(Ash)、中性洗涤纤维(neutral detergent fiber,NDF)、酸性洗涤纤维(acid detergent fiber,ADF)含量进行综合评价,以确定两次刈割最佳刈割期。结果表明:高肥力区杂交构树在第3个生长月进入株高与产量的快速生长期,低肥力区杂交构树进入快速生长期的时间要比高肥力区滞后1个月。两个肥力区的CP含量均在第3个生长月即植株进入快速生长期时含量最高,而后显著下降(P<0.05)。Ash含量均呈现逐月下降的趋势,不同之处在于两个肥力区呈显著下降(P<0.05)的月份不同,低肥力区较高肥力区提前1个月。NDF、ADF含量在两个肥力区基本表现了相同的升高趋势,在第5个生长月均达到了最高。灰色关联度分析和权重赋值法结果显示,两种水肥条件下,两次刈割时间安排为第2个生长月和第4个生长月时综合评价值均最高,建议杂交构树在兰州地区两次刈割的适宜刈割期为第2个生长月和第4个生长月。

杂交构树根际固氮菌的分离与特性研究

[目的]获得杂交构树根际固氮菌菌株并明确其功能特性。[方法]以Ashby培养基为选择分离条件,从甘肃天水、兰州、张掖种植试验区的杂交构树根系及根际土壤中分离固氮菌,对固氮菌进行鉴定及系统发育分析,同时测定固氮酶活性、溶磷、分泌吲哚乙酸和抑制植物病原菌的能力,并采用熵权法对菌株特性进行综合评价。[结果]从远根土和根表土中共分离出10株固氮菌,分属8个属,以假黄单胞菌属(Pseudoxanthomonas sp.)居多。各菌株均具有固氮酶活性,TS4和HP10的固氮酶活性均大于180 IU·L^(-1);仅TS4和HTZ2具有溶磷能力;有8株菌能够分泌吲哚乙酸,HTZ4的分泌能力最强,分泌量为44.62μg·mL^(-1)。所有菌株对灰霉菌(Botrytis cinerea Persoon)无拮抗作用;有7株菌分别对至少2种以上植物病原菌有抑制作用。HTZ4、HTZ3、HP5分别对茄链格孢(Alternaria solani(Ellis et G. Martin) Sorauer)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum Schlecht)、腐皮镰孢菌(Fusarium solani (Martius) Sacco)有最强抑制,抑制率分别为50.00%、48.78%、47.37%。综合性能较强的菌株为TS4、HP5、ZY9、HTZ4和HTZ5。[结论]研究结果可为进一步开发综合性能优良的固氮菌株,研制杂交构树多功能固氮菌肥,提高西北半干旱地区杂交构树产量提供依据和指导。

饲用型杂交构树在甘肃地区的种植适应性研究

试验旨在研究刈割次数对饲用型杂交构树生长的影响,讨论杂交构树在甘肃天水、兰州及张掖地区的种植适应性。结果表明:刈割次数对以上3个地区种植的杂交构树生长量、营养成分和返青率的影响各不相同。3个试验区刈割1次的产量均显著高于两次的产量(P<0.05),但中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)含量显著增加,容易利用的粗蛋白质(CP)含量显著减少(P<0.05)。刈割1次或两次,天水地区杂交构树的翌年返青率均可达90%以上,兰州地区可达50%以上;对张掖地区杂交构树翌年返青率影响较大,刈割1次的返青率要比两次的高出3.5倍。刈割1次翌年刈割两次,天水地区杂交构树年产量可达5 t以上,远高于兰州与张掖试验区,表现出了良好的适应性;兰州与张掖地区杂交构树生长量显著下降(P<0.05),但第3年返青率均在50%以上。研究表明:饲用型杂交构树在甘肃地区具有一定的种植适应性,但需因地制宜地制定刈割计划,采取相应的土壤栽培管理与越冬措施来获取最大的经济效益。

蒙古沙冬青子叶节诱导培养再生植株的研究

[目的]建立蒙古沙冬青子叶节丛生芽再生体系。[方法]以蒙古沙冬青子叶节为外植体,研究种子萌发培养基中6-BA浓度、子叶节萌发天数、丛生芽诱导的基本培养基及6-BA浓度对丛生芽诱导的影响和外源激素对丛生芽伸长及生根的影响。[结果]表明:(1)添加6-BA的萌发培养基与不添加的相比能够显著促进子叶节的生长及子叶节丛生芽的诱导,且6-BA浓度在2.0 mg·L-1时,诱导率最高可达73.3%,平均芽数2.26个;(2)种子萌发天数对子叶节丛生芽的诱导有显著影响,萌发7 d的子叶节丛生芽诱导率最高,诱导率为74.7%,但与萌发9、11 d的子叶节丛生芽诱导率差异不显著;(3)MS和B5培养基对丛生芽诱导的影响差异不显著,但B5抑制褐化的效果显著好于MS;(4)采用1.0 mg·L-16-BA+0.3 mg·L-1IAA激素组合有利于丛生芽伸长,伸长率为60.5%;(5)不同浓度生长素组合均能促进丛生芽幼苗生根,1.0 mg·L-1IBA生根率最大,生根数最多。[结论]最佳蒙古沙冬青子叶节丛生芽再生体系为:以在MS+2.0 mg·L-16-BA培养基中黑暗培养7 11 d的幼苗子叶节为外植体,在B5+1.0mg·L-16-BA培养基中诱导丛生芽,待丛生芽长约0.3 0.5 cm后,转入B5+1.0 mg·L-16-BA+0.3 mg·L-1IAA培养基中进行伸长培养,当丛生芽伸长至2 3 cm时,单株切下转入1/2 B5+1.0 mg·L-1IBA培养基中生根,该体系与愈伤组织培养相比能缩短培养时间,改善褐化严重、玻璃化等问题,可为蒙古沙冬青的扩繁及进一步开展遗传转化奠定基础。

浅谈中学音乐教学设计的撰写

教学设计是根据教学对象和教学目标,确定合适的教学起点与终点,将教学诸要素有序、优化地安排,形成教学方案的过程。它是一门运用系统方法科学解决教学问题的学问,它以教学效果最优化为目的,以解决教学问题为宗旨。

抗生素对根癌农杆菌的抑菌效果及对烟草叶片分化的影响

研究了卡那霉素和6种头孢霉素(头孢曲松钠、头孢噻肟钠、头孢哌酮钠、头孢唑啉钠,头孢拉定和头孢他啶)对烟草叶片分化及对根癌农杆菌LBA4404和烟草转化植株的抑制效果。结果发现:不同烟草品种对卡那霉素的耐受性差异较大,品种CV为受体材料时,叶分化和茎段根再生的适宜浓度为50mg/L。品种T12为受体材料时,叶分化的适宜浓度为100mg/L,而茎段根再生则为200mg/L;头孢曲松钠和头孢噻肟钠对根癌农杆菌LBA4404的抑制效果好,并可使继代3次(60d)的烟草转化植株脱菌;不同浓度的6种头孢类抗生素对烟草叶片的分化影响不大。从头孢类抗生素对农杆菌和烟草转化植株的抑制作用、外植体的分化影响来考虑,在用农杆菌LBA4404作为介导菌株时,可选用200mg/L的头孢曲松钠或头孢噻肟钠来抑菌。

油菜素内酯合成酶基因DAS5促进杨树生长及提高抗旱性的作用

以河北杨(Populus hopeiensis)为材料,研究拟南芥(Arabidopsis thaliana)油菜素内酯(BR)生物合成酶基因DAS5对其生长表型、生物量及抗旱性的影响。结果表明:(1)转DAS5基因河北杨植株的根长、地径、叶柄及叶片长度均显著大于野生型植株,且地上、地下部分干重及根冠比显著高于野生型,其拥有发达的根系;(2)在干旱胁迫下,转DAS5基因河北杨植株失水褪绿速度较野生型植株缓慢,在复水后转基因植株能够较早较好地恢复活力,萌发较多的新幼芽且长势良好;(3)控水期间,转基因河北杨的相对生长率显著高于野生型,且随着干旱胁迫程度的加剧,其可溶性糖含量、游离脯氨酸含量、过氧化氢酶(CAT)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性均显著高于野生型。实验结果表明,与野生型相比,转基因植株具有较高的生长量与较强的抗干旱胁迫能力,说明来自拟南芥的BR生物合成酶基因DAS5可以显著增加河北杨的生长量并在抵御干旱胁迫机制中发挥重要作用。

农杆菌介导的携带egfp基因载体转化寡雄腐霉

【目的】寡雄腐霉(Pythium oligandrum Drechsler)是一种对动、植物和环境无害,兼具杀菌和增产效果的生防真菌。通过研究建立农杆菌介导的寡雄腐霉遗传转化体系。【方法】选用EHA105、AGL-1、LBA4404三种农杆菌菌株对寡雄腐霉进行遗传转化研究,通过对影响遗传转化效果的条件参数试验优化,确立适宜寡雄腐霉遗传转化的农杆菌菌株及转化条件,建立农杆菌介导的寡雄腐霉遗传转化体系。【结果】经研究发现,所选3种农杆菌菌株中EHA105菌株对寡雄腐霉的遗传转化效果最好,其次是AGL-1菌株,LBA4404菌株转化效果不好。EHA105菌株经IM(含300μmol/L AS)诱导培养至OD_(600)=0.6时,与浓度为10~6–10~7个/m L的寡雄腐霉孢子悬浮液以1–10:1的比例混合,在25–26°C以液体振荡的方式避光共培养72 h(pH 5.0,含300μmol/L AS),寡雄腐霉菌体液体振荡恢复培养24 h,涂布抗性选择平板筛选寡雄腐霉转化子,即可得到寡雄腐霉基因工程菌株,其转化率可达到130个转化子/106个孢子。【结论】本研究首次构建了农杆菌介导的寡雄腐霉遗传转化体系,研究结果可为寡雄腐霉的生防机制及分子育种研究提供技术支撑。

生防真菌寡雄腐霉原生质体的制备及再生

寡雄腐霉Pythium oligandrum是一种对动、植物和环境无害,兼具杀菌和增产效果的生防真菌。本研究以0.8mol/L甘露醇与25mmol/L CaCl_2和10mmol/L Tris-HCl作为渗透压稳定剂,使寡雄腐霉菌丝体在含有裂解酶、纤维素酶、破壁酶的复合酶系中酶解得到其原生质体。此原生质体通过液体振荡培养的途径恢复再生1d后涂于平板上可生长为成熟菌体。本研究所述方法制备得到的寡雄腐霉原生质体数量超过1×10~9CFU/m L,活性超过80%;通过液体培养再生途径使得寡雄腐霉原生质体再生率达32.9%。此方法操作简便,稳定性好,获得的寡雄腐霉原生质体品质高、数量多,完全能够满足后期基因遗传转化、细胞融合培养等研究应用。

甘肃不同居群桃儿七[Sinopodophyllum hexandrum(Royle) Ying]鬼臼毒素含量与环境因子的相关性

为探讨桃儿七(Sinopodophyllum hexandrum)中鬼臼毒素含量与环境因子的相关性,采集甘肃省境内6个不同居群桃儿七的地下部分和根际土壤样品,测定鬼臼毒素含量和根际土壤中水分、pH值、有机质、总氮、速效磷、速效钾、有效铁、有效锰、有效铜、有效镁、总铁、总锰、总铜、总镁等14个因子。采用逐步回归分析和通径分析方法对土壤因子、海拔和气候因子(年均温、年均降雨量、年均日照时数、年均最高温(2010—2014年最高温的平均值)、年均最低温(2010—2014年最低温的平均值))与桃儿七地下部分的鬼臼毒素含量进行了相关性分析。结果表明:不同居群间桃儿七鬼臼毒素含量呈现极显著差异,居群内鬼臼毒素含量相对一致,基本呈正态分布。逐步回归结果显示,年均温、年均日照时数和土壤总氮含量是影响桃儿七鬼臼毒素含量的3个主导环境因子,且均与鬼臼毒素含量呈显著负相关。进一步通径分析表明,3个主导因子对鬼臼毒素含量的影响程度依次为:年均温>年均日照时数>总氮含量。研究结果表明,在桃儿七人工栽培中可通过适当低温、缩短日照时间、减施氮肥等措施来调控桃儿七鬼臼毒素含量。

《八音和鸣》教学设计

教学内容：湖南文艺出版社七年级上册《八音和鸣》教材分析：本课选自湖南文艺出版社七年级上册第三单元，《八音和鸣》中“八音”一词，是中国古代乐器制作的八种原料—-“金、石、土、革、丝、木、匏、竹”的总称。在小学阶段的音乐课中，学生已经接触过一部分传统民族乐器，并听赏了一些民乐作品。作为初中阶段的中国传统民乐欣赏课，应在复习巩固已有知识的情况下，进一步了解“民族乐器的分组”，了解“民族管弦乐队的编制”等。