两种海人酸癫痫小鼠模型的建立及比较研究

目的比较分析海人酸(kainic acid,KA)侧脑室(intracerebroventricular,ICV)注射和腹腔注射(intraperitoneal injections,IP)两种给药路径建立的颞叶癫痫小鼠模型早期的行为学和病理学差异。方法100只C57BL/6N野生型(wild type,WT)雄性小鼠(体质量为20~22 g),按随机数字表法分为4组:ICV+normal saline(NS)对照组(n=10),ICV+KA模型组(n=40),IP+NS对照组(n=10),IP+KA模型组(n=40)。ICV+KA模型组使用600 nL的KA(0.5 mg/mL)进行侧脑室注射,IP+KA模型组按25 mg/kg剂量进行腹腔注射,对照组使用等量的生理盐水进行侧脑室和腹腔注射。建立模型3 d后,进行行为学、分子生物学(Western blot)和神经病理损伤评估(FJB染色,TUNEL染色,免疫荧光染色)。结果两对照组无痫性发作,两模型组均出现痫性发作。IP+KA组与ICV+KA组死亡率分别为47.50%和65.00%,造模成功率分别为80.00%与60.00%。与IP+KA组比较,ICV+KA组小鼠模型成功率明显增高而死亡率明显减少。FJB染色和TUNEL染色结果显示,与IP+KA组比较,ICV+KA组海马的神经变性和凋亡改变程度变化更加明显(P<0.05)。与IP+KA组比较,ICV+KA组海马凋亡蛋白表达差异也有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光结果显示,ICV+KA和IP+KA组海马和皮层的星形胶质细胞和小胶质细胞较对照组明显激活(P<0.05),但是ICV+KA组海马和皮层的胶质细胞激活程度均强于IP+KA组(P<0.05)。ICV+KA组海马和皮层的GFAP和Iba-1蛋白表达均高于IP+KA组(P<0.05)。结论两种KA制备方法均可制备出成功的癫痫模型。但ICV路径制备癫痫小鼠具有更高的成功率和更少的死亡率,并且神经病理损害程度和胶质细胞激活程度更加明显。

优化hα-syn基因疫苗预防注射对MPTP急性帕金森病小鼠的神经保护作用

目的探讨预防注射优化hα-syn基因疫苗对多巴胺神经元在遭受急性神经毒素损害时的保护作用。方法在小鼠双侧后肢胫骨前肌部位分别注射优化基因疫苗、空重组质粒或PBS各50μl,共3次。末次注射3周后,优化基因疫苗组皮下注射MPTP30mg/kg,对照组用等容量的PBS背部皮下注射,每日1次,连续5d。最后1次模型注射后,观察行为学和病理生理改变。结果优化基因疫苗组小鼠的爬杆分数与空重组质粒组比较明显减少(P<0.05),与PBS对照组比较,爬杆分数增多,但差异无统计学意义(P>0.05)。优化基因疫苗组与空重组质粒组相比,黑质区酪氨酸羟化酶阳性细胞数明显增多,凋亡细胞数明显减少(P<0.05),α-突触核蛋白表达略减少(P>0.05)。空重组质粒组与PBS对照组相比,黑质区酪氨酸羟化酶阳性细胞数明显减少,凋亡细胞明显增多(P<0.05),α-突触核蛋白表达明显增多(P<0.05)。结论优化hα-syn基因疫苗预防注射能够较好的防止神经毒素对黑质多巴胺细胞的损害,对多巴胺神经细胞具有保护作用。

肱三头肌肌纤维组成及其力量产生和推铅球成绩的相关性研究

探讨推铅球成绩与肱三头肌纤维类型和力量产生之间的关系。选取13个体育教育专业的男生进行为期5周的推铅球训练，并测定最后推铅球的成绩。在训练指导期间，按照要求参加实验测试：对肘伸肌分别以0．52、1．05、1．57、2．09、3．14、4．19弧度每秒的角速度进行等速力矩测试；最大强度与爆发性快速卧推测试；坐姿分别推1、2、3、4、5、6kg铅球测试；用全身与上体手臂抗阻测试来测量全身与上臂肌肉质量；采集肱三头肌长头处肌肉切片样本并利用ATP酶组织化学分析其肌纤维的组成。研究发现，推铅球成绩与以下几个因子存在着显著性相关：与肌肉纤维类型Ⅱ面积的相关系数r=0．70（P〈0．01）；与坐姿推铅球相关系数为r=0．60～0．79（P〈0．05）；与肘伸肌等速运动的相关系数为r=0．65—0．78（P〈0．05）；与卧推成绩之间的相关系数为r〉0．86（P〈0．01）以及与上臂横断面积的相关系数为r=0．68（P〈0．05）。研究结果表明，肱三头肌的肌纤维组成与其力量产生能力是铅球成绩的一个主要因素，另外上臂力量与推铅球成绩间的高度相关表明除下肢外身体的其他部位同样对推铅球有着至关重要的作用。

优化人alpha-syn基因疫苗免疫MPTP慢性PD小鼠的神经保护作用

目的：探讨优化高分泌型人α-突触核蛋白（human alpha—synuclein，ha—syn）基因疫苗免疫MPTP慢性帕金森病小鼠的治疗效果和神经免疫保护作用．方法：建立慢性PD小鼠模型，采用神经毒素MPTP25mg／（kg·d），2次／wk，累计共10次．建模后随机分为3组：优化基因疫苗组、疫苗组、PBS对照组；每次治疗前，每只动物分别在双侧后肢胫骨前肌部位注射5g／L布比卡因50μL，注射72h后，3组动物分别于同部位同深度注射优化基因疫苗、基因疫苗或PBS各50μL，1次／3wk，共3次．末次免疫后2wk观察行为学改变后，处死取脑．运用免疫荧光、免疫组化等方法观察酪氨酸羟化酶阳性细胞数，以及α-syn表达变化．结果：优化基因疫苗组、疫苗组小鼠爬杆能力与PBS对照组比较都得到明显改善，有统计学差异（P〈0．05）；但优化基因疫苗组与疫苗组行为学评分间差异无统计学意义．优化基因疫苗组酪氨酸羟化酶阳性细胞数与其它两组相比增多约20％-68％（P〈0．05），α-syn表达减少约15％～45％（P〈0．05）．结论：优化基因疫苗具有较强改善帕金森小鼠行为学的作用，能增强疫苗的免疫原性，促进受损黑质细胞修复，对帕金森病小鼠有更好的免疫治疗作用．

溶酶体抑制剂对小鼠行为学与黑质多巴胺神经元的影响

目的初步探讨溶酶体抑制剂对小鼠行为学及多巴胺神经元功能的影响。方法于小鼠右侧中脑黑质(SN)区,立体定向微量注入溶酶体抑制剂和蛋白酶体抑制剂。观察阿朴吗啡诱导的小鼠旋转行为改变以及行为学变化;检测黑质区酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数。结果阿朴吗啡未能诱导出小鼠旋转行为。蛋白酶体抑制剂组为10～15圈。多巴胺损害程度与溶酶体的剂量相关。磷酸氯喹25μmol/L时多巴胺神经元几乎没有损害作用;50μmol/L时局部区域多巴胺神经元有轻微损害;100μmol/L时损害明显;200μmol/L时黑质区注射局部神经元损害最严重,黑质注射区未见有神经元存在。1～4周呈现出较为明显逐渐恢复的特点。结论溶酶体功能抑制与多巴胺神经元凋亡相关,不同剂量溶酶体抑制剂在不同时间对多巴胺神经功能的损害不同。

pVAX1-IL-4/SYN-B融合质粒的构建及表达

目的构建含人白介素4(human IL-4,hIL-4)基因与人α-突触核蛋白(humanα-synuclein,hα-syn)B细胞表位基因的真核表达质粒,并研究其在COS-7细胞内的表达。方法RT-PCR扩增人IL-4基因后,通过基因重组技术将其与α-synuclein蛋白B细胞表位基因融合,在两者之间引入柔性短肽(GSGGGSG)。将融合产物克隆到真核表达载体PVAX1上,利用电泳和测序鉴定融合质粒的大小、方向和序列。采用脂质体转染法,将融合质粒转入COS-7细胞中,用Western blotting技术检测其表达。结果电泳和测序结果与预期一致,并命名为PVAX1-IL-4/SYN-B;质粒转染COS-7细胞株成功,并且能在细胞内高效表达。结论成功构建PVAX1-IL-4/SYN-B融合质粒,并在哺乳动物COS-7细胞中高效表达,为研究融合质粒在帕金森病动物模型中的免疫效果奠定了基础。

hα-syn蛋白核酸疫苗pVAX1-hαS_(1-140)的构建及其表达

目的构建含人α-突触核蛋白(humanα-synuclein,hα-syn)编码基因的真核重组载体,并在COS-7细胞中表达,为帕金森病的核酸疫苗开发奠定基础。方法通过PCR方法扩增hα-syn基因的CDS全长片段,含酶切位点KpnⅠ、XbaⅠ和Kozak序列。扩增产物和真核表达载体pVAX1经双酶切、纯化、连接,转化感受态细胞E.coli TOP10,筛选含目的基因的重组载体pVAX1-hαS1-140,并在COS-7细胞中表达,用RT-PCR法和Western blot法检测其表达产物。结果经单、双酶切证实插入的基因片段大小一致,基因测序证实其序列和方向完全正确。用RT-PCR法和Western blot法检测表明,重组质粒pVAX1-hαS1-140在COS-7细胞中能表达目的蛋白,而且具有生物活性。结论成功构建了核酸疫苗pVAX1-hαS1-140,并在COS-7细胞中表达,为帕金森病的核酸疫苗治疗研究奠定了良好的基础。

优化hα-syn核酸疫苗免疫反应效果及安全性的评价

目的评价pVAX1-IL-4/SYN-B核酸疫苗对C57BL/6J小鼠免疫反应的效果和安全性。方法采用C57BL/6J小鼠模型,应用ELISA法、免疫组织化学、RT-PCR技术,比较PBS对照组、空质粒组、优化核酸疫苗组、全长核酸疫苗组小鼠动物行为学及免疫学指标的差异。结果①优化核酸疫苗组小鼠血清中α-syn抗体明显增加;②优化核酸疫苗组中IL-4较高,IFN-γ较低,其他3组无明显差异;③免疫组织化学法显示疫苗产生的抗体可与帕金森模型小鼠脑切片中α-syn阳性包涵体发生特异性结合反应,而对照组和空质粒组无反应;④RT-PCR显示优化核酸疫苗组COX-2表达量明显少于全长核酸疫苗组(P<0.05),与对照组、空质粒组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论优化核酸疫苗可在小鼠体内产生高效价α-syn抗体,主要引起体液免疫反应;比全长核酸疫苗更有效、更安全,为优化核酸疫苗的进一步筛选奠定了基础。

Snail在海人酸诱导癫痫持续状态小鼠皮层中高表达

目的观察snail因子在海人酸(KA)诱导癫痫持续状态(SE)小鼠皮层中的表达和分布,探讨snail在癫痫持续发作状态中的作用。方法成年雄性C57/BL6小鼠64只,随机分成对照组和SE组,每组32只。对照组采用腹腔注射生理盐水,SE组采用KA腹腔注射诱发小鼠癫痫急性发作,并且各组分别在发作终止后的3、8、24、72 h进行取材。反转录PCR检测snail的mRNA表达水平,Western blot法检测snail的蛋白表达水平,免疫组织化学检测snail的形态分布,免疫荧光技术检测snail的定位。结果与对照组相比,SE组snail mRNA和蛋白的表达水平明显上升,24 h达到高峰;免疫组织化学技术显示,在对照组,snail表达呈弱阳性。在SE组,snail在不同皮层神经元以及胶质状细胞都有广泛分布;免疫荧光技术进一步证明snail在神经元和星形胶质细胞均有表达。结论 Snail在KA诱导SE小鼠皮层神经元和星形胶质细胞内都有强表达,提示snail可能与癫痫的发作有一定的联系。

对铁饼运动员力量素质训练方法的研究

力量素质是影响投掷运动员投掷能力的决定性因素之一,它是投掷运动中的重要素质,是掌握技术和创造优异成绩的基础。铁饼是一项力量速度性项目,力量的大小直接影响投掷的成绩,因此力量训练在铁饼运动员的身体素质训练中占有重要地位。铁饼运动员的力量训练早已被广大的教练员和运动员所重视,而且力争在训练中采用有效的手段和方法,努力发展运动员的力量素质。力量训练大体可分为两类,一类称为一般力量训练或最大力量训练,采用的手段多数是抓举、卧推、半蹲、高翻等,作为发展基础力量的主要手段,经过系统有效的练习,可以增强运动员的躯干与四肢的肌肉力量。另一类称为专项力量训练,是指与专项技术动作有直接关系近似于专项技术动作的力量练习。掷铁饼是以力量为基础、速度为核心的速度力量性项目.铁饼运动员速度力量的发展水平与投掷成绩密切相关。快速力量主要表现形式就是爆发力,在速度力量性项目中,爆发力的好坏直接决定着运动成绩的优劣,在发展最大力量的基础上积极发展爆发力,从而提高快速力量。这样既能促进最大力量水平的提高,又能使快速力量训练效果倍增。正确认识力量训练的内涵和分类,对力量训练手段的选择和科学的进行力量训练以及保证训练进行有着重要的意义。

赛前训练对我国优秀女子竞走运动员比赛成绩的影响

竞走运动员不但要具有顽强的意志品质,更重要是的要具备先天优越的心肺功能和后天通过训练所获得的超强的有氧耐力以及正确的竞走技术。我国竞技体育的科学训练原则方针是"三从一大",训练的核心就是如何从实战出发控制掌握好训练的运动量和运动强度,这就要求教练员能够在训练时正确地把握一个"度"的问题。而在运动员的训练过程中系统地进行机能监控正好是能恰当把握这个"度"的重要参考因素,因为它能及时地为教练员提供一些有针对性的运动员身体机能指标,为教练员更好、更科学地安排和掌控运动员的训练提供了更为科学的依据。而如何把握好竞走运动员的赛前训练,利用机能监控更好地为训练服务,是值得我们去不断总结和探索的重要课题,对于提高大赛前的训练效果和在大赛中取得成功的把握有着重大的作用和意义。本文旨在通过对国家队女子队员赛前训练的研究,发现赛前的训练安排须考虑运动员的身体机能状态和心理状态等因素,主要的原则是运动员训练的个性化原则。

定眩汤治疗椎动脉型颈椎病52例

采用川芎、泽泻、首乌、葛根等药物为主组成的定眩汤治疗椎动脉型颈椎病。从痰、瘀、虚着手 ,采用补肾固本、益气活血、化痰通络的治疗方法 ,临床治疗 5 2例 ,痊愈 4 0例 ,收到了较好的疗效。

中学生写作能力培养之我见

培养学生的写作兴趣和能力是语文教师教学的应有之义。激发兴趣,加强阅读,勤写多练,体验成功四个方面是培养学生作文能力的重要途径。

MST3在颞叶癫痫模型小鼠海马的表达变化

目的观察海人酸(kainic acid,KA)所致癫痫(epilepsy,EP)小鼠海马Ste20蛋白激酵素(MST3)表达水平的变化,探讨MST3在癫痫发病过程中的可能作用。方法选用成年雄性小鼠,并随机分成模型组和对照组。模型组小鼠侧脑室注射2μL(100 ng/μL)KA,分别于术后3、8、24 h收集动物标本以进行检测。使用RT-PCR和Western Blot测定MST3 mRNA含量和MST3蛋白动态表达变化,应用免疫组化观察MST3在海马的表达分布与特点。结果与正常对照组相比,模型组海马组织内MST3mRNA的表达随时间持续升高,24 h达到高峰;MST3的蛋白表达也表现出同样的动态升高趋势;术后3～24 h的模型组海马免疫组化检测显示,模型组MST3主要以海马齿状回、门回区、CA3区域表达增加为主,并且这些区域表达逐渐递增。结论随着时间的推移,MST3表达水平呈现逐渐增加趋势,可能与神经元损伤造成的凋亡之间有密切的关系,提示MST3可能在癫痫发病过程中起重要作用。

浅议语文阅读教学中对学生想象力的培养

语文阅读教学对学生想象力的培养,应从咀嚼文字、挖掘文本潜在因素以及创设宽松民主氛围等方面着手,从而加深对文章的理解,锻炼思维能力,发展智力。

促脑血管疾病危险因素与帕金森病相关性研究

目的:探讨促脑血管疾病的一些常见危险因素与帕金森病(Parkinson's disease,PD)之间的关系。方法:对在重庆医科大学附属第一医院就诊的PD患者及健康体检者抽血检测血糖、低密度脂蛋白胆固醇(Low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)及同型半胱氨酸(Homocysteic acid,Hcy),同时行颈动脉彩超了解颈总动脉内膜中层厚度(Intima-media thickness of carotid artery,IMT),对PD患者进行帕金森病统一评定量表(Unified Parkinson's disease rating scale,UPDRS)评分。对PD组和对照组检查结果进行统计学分析,并将可能与PD发病有关的因素纳入相关分析。结果:PD组血糖水平高于对照组(P<0.05);Hcy水平高于对照组(P<0.01);PD组LDL-C水平低于对照组(P<0.05);IMT值小于对照组(P<0.001)。Spearman相关分析显示Hcy与PD发病呈正相关,LDL-C、IMT与PD发病呈负相关,血糖与PD发病无明显相关性。结论:本实验结果提示高Hcy是PD发病的危险因素;实验证实PD病人LDL-C、IMT明显低于对照组,提示患动脉粥样硬化的几率相对较小。