lncRNA MANCR表达对肺腺癌细胞生物学行为的影响

目的观察肺腺癌细胞lncRNA MANCR表达情况,探讨lncRNA MANCR对肺腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响。方法对数生长期A549细胞分为sh-MANCR组(转染shRNA-MANCR慢病毒)、sh-NC组(转染shRNA-NC慢病毒)、对照组(不转染慢病毒)。转染48 h后,采用实时荧光定量PCR法检测细胞lncRNA MANCR相对表达量,培养24、48、72、96 h时采用CCK-8法检测3组细胞增殖吸光度(OD)值。转染48 h后,采用克隆形成实验检测细胞克隆形成率,采用流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡率,采用细胞划痕实验检测细胞迁移距离、划痕愈合率,采用Transwell小室实验检测侵袭细胞数;采用Western blot法检测细胞周期和增殖相关蛋白[周期蛋白D1(Cyclin D1)、周期蛋白依赖性激酶(CDK)2、CDK4、增殖细胞核抗原(PCNA)]、凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、caspase-3、caspase-9]及迁移和侵袭相关蛋白[环氧化酶-2(Cox-2)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9]相对表达量。结果转染48 h后,sh-MANCR组细胞lncRNA MANCR相对表达量(0.31±0.01)低于对照组(1.00±0.03)、sh-NC组(0.98±0.02)(P<0.05)。培养48、72、96 h时sh-MANCR组(0.29±0.03、0.38±0.01、0.51±0.03)细胞增殖OD值低于对照组(0.40±0.02、0.65±0.02、0.91±0.04)、sh-NC组(0.37±0.03、0.58±0.02、0.79±0.08)(P<0.05)。转染48 h后,sh-MANCR组细胞克隆形成率[(2483.33±225.46)%]、S期比率[(17.11±1.74)%]、G2/M期比率[(10.54±0.95)%]均低于对照组[(4600.00±132.29)%、(28.21±2.26)%、(17.53±1.09)%]、sh-NC组[(4650.00±150.00)%、(31.16±2.01)%、(17.50±1.87)%](P<0.05),G0/G1期比率[(63.54±2.16)%]、细胞凋亡率[(18.24±0.49)%]均高于对照组[(44.86±1.65)%、(8.43±0.45)%]、sh-NC组[(44.71±2.26)%、(8.03±0.25)%](P<0.05),细胞迁移距离[(108.85±8.04)μm]短于对照组[(240.10±7.17)μm]、sh-NC组[(224.60±9.83)μm](P<0.05),划痕愈合率[(12.05±1.00)%]低于对照组[(24.16±0.84)%]、sh-NC组[(23.70±1.51)%](P<0.05),侵袭细胞数[(45.33±1.53)个]少于对照组[(138.33±2.52)个]、sh-NC组[(135.33±1.53)个](P<0.05),以上指标sh-NC组与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。sh-MANCR组Cyclin D1、CDK2、CDK4、PCNA、Bcl-2、Cox-2、MMP-2、MMP-9蛋白相对表达量均低于对照组、sh-NC组(P<0.05),Bax、caspase-3、caspase-9蛋白相对表达量均高于对照组、sh-NC组(P<0.05);sh-NC组Cyclin D1、MMP-2蛋白相对表达量均高于对照组(P<0.05),CDK2、PCNA、MMP-9蛋白相对表达量均低于对照组(P<0.05),CDK4、Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-9、Cox-2蛋白相对表达量与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论下调lncRNA MANCR表达可抑制肺腺癌细胞增殖、侵袭及迁移,促进细胞凋亡。