敲减NEDD1表达抑制肺腺癌细胞增殖与迁移

目的:探讨神经前体细胞表达发育下调蛋白1(NEDD1)在肺癌发生和发展中的作用。方法:采用免疫组化实验检测NEDD1在肺癌组织中的表达情况,结合数据库资料分析NEDD1在肺癌组织与癌旁正常组织中的表达有无差异,并分析NEDD1的表达水平与肺癌预后的相关性;敲减NEDD1在A549细胞的表达后用平板集落形成实验检测集落形成能力的变化,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布的情况,Transwell小室实验检测对细胞的迁移能力的影响,Western blot检测细胞周期相关蛋白的表达,并分析NEDD1与周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)表达的相关性。结果:与正常肺组织相比,肺癌组织中NEDD1表达水平升高,Kaplan-Meier曲线预后分析显示NEDD1高表达者预后差,NEDD1低表达者预后较好;光镜下观察可见敲减NEDD1表达的A549细胞增殖速度明显减慢,平板集落形成能力降低(P<0.05);与对照组相比,敲减NEDD1表达促进A549细胞凋亡,抑制细胞的迁移;与对照组相比,敲减NEDD1表达后G 1期细胞的比例增加,细胞阻滞于G 1/S期,Western blot检测周期相关蛋白水平可见p-Rb和cyclinD1蛋白表达水平降低,p-Chk1、p-Chk2和p-p53蛋白表达水平升高(P<0.05);数据库分析结果示NEDD1与CDK2的表达呈正相关。结论:NEDD1具有抑制肺癌细胞凋亡、加速细胞周期进程从而促进细胞增殖的能力,且其在肺腺癌组织中的高表达与患者预后不良相关,因此可以作为肺腺癌诊断和预后新的标志分子。

SYN008与Xolair®对过敏性哮喘小鼠治疗作用效果比较:炎症与重塑

目的分析奥马珠单抗类似药(SYN008)对过敏性哮喘模型小鼠的疗效及与奥马珠单抗原创药(Xolair®)的疗效比较,为SYN008临床应用提供依据。方法将40只健康BALB/c小鼠随机分为4个组,每组10只。第Ⅰ组为对照组,第Ⅱ~Ⅳ组采用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)——氢氧化铝腹腔注射诱发哮喘,且Ⅲ组和Ⅳ组分别用Xolair®(200μg/只)和SYN008(200μg/只)腹腔注射。造模完成后检测各组小鼠血清IgE及肺泡灌洗液(broncho alveolar lavage fluid,BALF)中2型辅助性T细胞(T helper 2 cell,Th2)细胞因子变化;通过苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色、过碘酸-雪夫(peroxynitrite-schiff,PAS)染色和马松三色(Massons trichrome,Masson)染色观察小鼠肺组织病理变化;并通过实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)、酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、免疫印迹(western blotting,WB)和免疫组化法检测肺组织中转化生长因子β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)、磷酸化Smad家族成员3(phosphorylated Smad family member 3,P-smad3)和Smad家族成员3(Smad3)、胶原蛋白Ⅲ(collagenⅢ,COL3)和黏蛋白(mucin 5AC,MUC5AC)的表达情况。结果与对照组比较,哮喘组小鼠血清IgE和BALF中白细胞介素-4(interleukin 4,IL-4)、IL-5和IL-13含量明显升高(P均<0.001);与Ⅱ组比较,Ⅲ组和Ⅳ组小鼠血清IgE和BALF中IL-4/5/13含量都明显下降(P<0.001,P<0.05,P<0.01,P<0.05;P<0.001,P<0.05,P<0.05,P<0.05);HE、PAS和Masson染色证实了Xolair®和SYN008可有效减少哮喘小鼠炎细胞聚集、气道杯状细胞化生和胶原沉积,并且两者可以通过抑制肺组织的TGF-β1、P-smad3/Smad3、COL3和MUC5AC减轻气道重塑,且两组各项检测指标均无统计学差异。结论SYN008可以改善小鼠的过敏性哮喘,且与Xolair®药效一致,未来有望应用于临床有效治疗过敏性哮喘。