梭梭qRT-PCR内参基因的筛选及稳定性分析

研究旨在探明梭梭(Haloxylon ammodendron)不同非生物胁迫下稳定表达的内参基因,为后续梭梭抗逆性相关基因功能研究奠定基础。采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)技术从梭梭转录组数据库中检测了GAPDH、EF1-α、UBC、RPL32、ALB、50S-1721、50S-1063、RPⅡ、H3、PP2A、SOD、HSC70、TUA和TUB 14个候选内参基因在热胁迫、干旱、盐、ABA和昼夜节律条件下的表达变化,利用geNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFinder软件对梭梭候选内参基因的稳定性进行评价,最终筛选出合适的内参基因,并通过对梭梭磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(phosphoenolpyruvate carboxylase,PEPC)基因表达分析,验证不同内参基因对试验结果的影响。4种软件分析得到的最优内参基因存在差异,在RefFinder网站上综合排序分析表明,在ABA处理和昼夜节律下,ALB是最优内参基因,RPⅡ基因在干旱胁迫下表达最稳定,TUB和RPⅡ基因在盐胁迫下最适用,H3基因在热胁迫下表达最为稳定。各种胁迫下最适宜的内参基因为ALB和RPL32。计算几何平均值得14个候选内参基因的综合稳定性排名,其中排名前2位的基因分别为SOD和RPL32。综上,SOD和RPL32可作为梭梭qRT-PCR标准化的内参基因。

农林类大学生移动终端网络使用调查分析

手机、平板电脑、笔记本等移动终端给大学生的日常生活带来了无时无刻、潜移默化的影响,但这种影响却是利弊并存。农林类大学生有其专业特殊性,有必要对其移动终端网络使用情况进行分析。选取农林类大学生为研究对象,重点对移动终端的意义认知、移动终端背景下大学生社会互动特征、移动终端对农林类大学生现实生活的影响及农林类大学生移动终端使用暴露出的问题进行分析,提出相应地对策建议。

梭梭SCARECROW-like 30基因的克隆、表达及功能分析

SCARECROW-like(SCL)是GRAS转录因子中的重要成员,主要参与植物生长发育、逆境胁迫响应以及赤霉素(GA)信号转导调控等。本研究基于梭梭转录组数据克隆获得1条在干旱胁迫下显著上调表达的SCL基因,并命名为HaSCL30。HaSCL30全长编码序列(CDS)为2109 bp,编码702个氨基酸,预测蛋白分子量为78.37 kDa,理论等电点为5.57,为不稳定亲水性蛋白,具有GRAS超家族保守结构域。多序列比对及系统进化表明梭梭HaSCL30蛋白与同为C4植物的玉米ZmSCL30及同科植物甜菜BvSCL30同源性较高、亲缘关系较近。STRING蛋白互作分析预测出SCL30蛋白与转录因子WRKY33和ERF104具有共表达特征。HaSCL30基因在梭梭不同组织(子叶、同化枝及根)均有表达,在子叶中相对表达量最高。在干旱和盐胁迫下HaSCL30出现不同程度上调表达。亚细胞定位结果表明HaSCL30定位于细胞核和细胞膜。酵母异源表达结果显示,过表达HaSCL30能提高酵母耐盐和耐旱性。基于以上结果,HaSCL30可能参与荒漠植物梭梭的高盐、干旱胁迫响应,对其荒漠环境生存能力的提高存在正向调控作用。研究结果为进一步揭示HaSCL30在梭梭抗旱耐盐中的功能及作用机制提供依据。

油用向日葵铵转运基因HaAMT1.1的克隆及功能分析

AMT1.1是铵转运家族的基因之一,在植物吸收转运NH_(4)^(+)中起到重要作用。为了明确氮素在植物体的转运吸收机制,本研究以油用向日葵‘早矮大头’为研究材料,成功从中克隆向日葵AMT1.1的同源基因HaAMT1.1。生物信息学分析表明该基因CDS区长1497 bp,编码491个氨基酸;正电荷残基28个,占氨基酸总数的5.7%,负电荷残基30个,占氨基酸总数的6.1%;其分子式为C_(2417)H_(3625)N_(597)O_(668)S_(22),预测分子量为52439.29 Da,理论等电点为6.58;HaAMT1.1为疏水性蛋白,无跨膜结构域,具有Ammonium Transp超家族保守结构域,与黄花蒿AMT1.1亲缘关系最近。亚细胞定位结果表明HaAMT1.1位于细胞质膜和细胞核上。实时荧光定量PCR分析表明,不同组织中Ha AMT1.1基因在根系中表达量最高;不同NH_(4)^(+)浓度处理下,该基因在经低浓度NH_(4)^(+)处理的表达量显著高于经高浓度NH_(4)^(+)处理的组织。本研究结果为进一步分析HaAMT1.1基因的生物学功能提供参考。