北京地区实验动物中猴痘病毒感染情况调查

目的对北京地区实验动物中猴痘病毒(MPXV)感染情况进行调查。方法参照世界卫生组织(WHO)MPXV实验室检测指导意见,采用荧光PCR法检测北京地区实验动物中MPXV,共642只动物,包括猴127只、小鼠215只、大鼠80只、豚鼠40只、地鼠10只、兔85只、犬85只。其中猴采集咽拭子,大小鼠、豚鼠和地鼠等采集盲肠,兔和犬采集肛拭子,采集的样本加入适量灭菌PBS,盲肠样本充分匀浆,拭子样本涡旋振荡1 min,-70℃反复冻融3次,离心取上清提取核酸,荧光PCR检测MPXV DNA,最后对结果进行分析。结果经荧光PCR检测,127只猴、215只小鼠、80只大鼠、40只豚鼠、10只地鼠、85只兔、85只犬MPXV DNA均为阴性。结论目前未在北京地区实验动物中发现MPXV感染。

单核苷酸多态性分析在近交系大鼠遗传检测中的应用

目的研究SNP在近交系大鼠遗传检测中的应用。方法 选取大鼠20号染色体MHC所在P12区上的9个SNP位点,应用新建立的高保真酶特异性检测SNP基因分型技术对五种常用近交系大鼠(BN、F344、WKY、LEW、SHR)和两种新培育近交系大鼠(MIJ和HFJ)进行SNP多态性分析。结果五种常用近交系的SNP检测结果与Rat Genome Database网站提供的基因型数据一致,并检测确立了新品系的SNP基因型。同时绘制出七种近交系大鼠在该9个SNP位点的遗传扩增图谱。结论运用所筛选的9个SNP位点进行大鼠多态性分析,能够快速、可靠地对BN、F344、WKY、LEW、SHR及MIJ、HFJ进行遗传监测。

同时检测小鼠微小病毒(MVM)和小鼠细小病毒(MPV)的荧光定量PCR的建立及应用

目的建立同时检测小鼠微小病毒(MVM)和小鼠细小病毒(MPV)的荧光定量PCR方法,并进行初步应用。方法比对NCBI上发表的MVM和MPV基因组序列,设计1对引物和探针,可同时检测MVM和MPV。考察MVM-MPV引物探针的特异性和灵敏度,并对178份清洁级小鼠粪便DNA样本进行检测。结果 MVM-MPV荧光定量PCR方法最佳线性范围为10~9~10~4拷贝/μL,标准曲线的线性关系良好,R2值可达0.99,灵敏度为101拷贝/μL,特异性强。应用MVM-MPV探针对178份小鼠粪便DNA检测,结果为2份阳性样本,经MVM、MPV特异性探针鉴定,2份阳性样本均为MPV感染。阳性样本经全基因组测序后与NCBI网站上MPV(NC_001630.1)序列比对,一致率为96%。结论建立的MVM-MPV荧光定量PCR方法,能够有效快速地同时检出小鼠细小病毒和小鼠微小病毒。

小鼠微小病毒(MVM)荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

目的建立小鼠微小病毒(MVM)荧光定量PCR方法,并初步应用于实验小鼠中。方法根据NCBI上发表的MVM(NC_001510)基因组序列,设计引物和探针,建立MVM荧光定量PCR方法。考察引物探针的最佳线形范围,特异性及灵敏度,并使用该方法对178份清洁级小鼠粪便DNA样本进行检测。结果 MVM荧光定量PCR方法最佳线性范围为10~9~10~4拷贝/μL,标准曲线的线性关系良好,R^2值可达0.99,灵敏度为101拷贝/μL,特异性强,与大鼠细小病毒H-1株和KRV株、猪细小病毒均无交叉反应。应用荧光定量PCR方法对178份小鼠粪便DNA进行检测,结果均为阴性。结论建立的MVM荧光定量PCR方法具有特异、灵敏的特点,为MVM的流行病学调查、检测提供了有效的技术支持。

树鼩腺病毒(TAV)PCR方法的建立及初步应用

目的建立树鼩腺病毒(TAV)PCR检测方法,并进行初步应用。方法根据NCBI公布的TAV基因组序列,选择19418-19917区域人工合成一段DNA序列并转入质粒中,作为阳性标准质粒。设计1对特异性引物建立TAV PCR检测方法,考察其特异性和灵敏度。应用该PCR方法对60份树鼩血DNA及56份树鼩粪便DNA进行检测。结果所建立的PCR检测方法经特异性和灵敏度测定,最低可检测13.5 x10-7μg/m L,与其他腺病毒无交叉,特异性好,灵敏度较高。60份树鼩血DNA检测均为阴性,56份树鼩粪便DNA检测有24份阳性,通过测序证实树鼩粪便中TAV感染率为42.9%,与扩增结果一致。结论建立的树鼩腺病毒PCR检测方法特异性强,灵敏度高,可用于树鼩腺病毒的常规检测中。

国家基本药物制度下基层医疗机构补偿机制的实践与思考

保障基本药物制度的顺利实施,建立科学的补偿机制非常重要。新的补偿机制的进步之处是:政府增加投入,并规定各级财政的责任;补偿范围广泛;补偿方式多元化。进一步探索基层医疗机构补偿机制的方向是:完善基层医疗机构成本核算,降低财政资金风险;建立科学的绩效考核指标,提高财政资金的使用效率;合理地调整医疗服务收费价格。

大鼠主要组织相容性复合体RT1研究进展

主要组织相容性复合体在免疫应答中起着重要作用,其多态性研究及应答机制一直是基础免疫学的热点。大鼠基因组草图已经绘制完成,对于主要组织相容性复合体RT1分子水平的遗传学,基因组学,进化及功能方面的研究日渐深入。本文主要介绍了实验大鼠MHC复合体基因的遗传结构,并绘制了其物理结构图谱。重点阐述大鼠的RT1复合体基因的多态性研究,以及RT1复合体对大鼠的移植模型和复杂疾病模型的意义。

不孕症患者就医行为研究

目的:通过对不孕症患者就医行为过程的分析,寻找不孕症患者就诊行为的误区,提出相关的建议,干预患者行为。方法:通过问卷调查,对患者的就医行为进行调查。用描述性统计方法、统计检验对患者就医行为的过程进行分析。结果:发现不孕症患者在就诊过程中倾向于选择同性医务人员、较高层次的医疗机构,在就医过程中存在一些误区:夫妻双方不同时就诊、诊断疾病不科学、就诊时机不恰当、治疗不系统等误区。结论:针对不孕症患者就诊行为的特殊性,本文从政府、医院、个人三方提出了相关建议,促进形成合理的就医行为。

高保真酶特异性检测大鼠SNP基因型新方法

目的应用高保真酶(Pfu)和3’末端修饰引物在单管双向等位基因特异性扩增(SB-ASA)中区分SNP基因型,建立高保真酶特异性检测SNP基因型的新方法。方法选取近交系大鼠SNP位点,以RS8149053为例,设计两个外部引物和两个等位基因特异性引物,四引物3’末端进行硫代磷酸化修饰,应用高保真聚合酶(Pfu)进行特异性扩增,扩增结果测序验证其可靠性。结果在RS8149053 SNP位点(C/T)上,等位基因型CC扩增出179 bp目的片段,基因型TT扩增出597 bp目的片段,基因型不同则扩增出分子量不同的片段,目的条带测序结果与Rat Genome Database数据库基因型结果一致,高保真酶扩增结果稳定且特异性强。结论高保真酶等位基因特异性扩增技术能有效降低假阳性率,是一种快速、特异的SNP基因分型新方法。

树鼩副粘病毒(TPMV)PCR方法的建立及初步应用

目的建立树鼩副粘病毒(Tupaia paramyxovirus,TPMV)PCR检测方法,并进行初步应用。方法根据NCBI公布的TPMV基因组序列,选择8231 bp^8720 bp区域人工合成一段DNA序列并转入质粒中,作为阳性标准质粒。根据TPMV保守区域设计一对特异性引物,考察方法的特异性和灵敏度,并应用于60份树鼩呼吸道咽拭子c DNA及12份树鼩肺组织c DNA的检测中。结果所建立的PCR检测方法特异性好,灵敏度高,可达11.5×10-5μg/m L。60份树鼩呼吸道咽拭子c DNA及12份树鼩肺组织c DNA检测均为阴性。结论建立的树鼩副粘病毒PCR检测方法特异性强,灵敏度高,可用于树鼩副粘病毒的常规检测中。

鸡胚致死孤儿病毒和鸡减蛋综合症病毒多重PCR检测方法的建立及初步应用

目的建立鸡胚致死孤儿病毒(CELO)和鸡减蛋综合症病毒(EDS)的多重PCR检测方法并进行初步应用。方法参照Gen Bank提供的基因序列,设计了2对特异性引物分别扩增CELO长纤突蛋白和EDS六邻体蛋白的基因序列,建立检测CELO和EDS的多重PCR方法,考察该方法的特异性和敏感性,并使用该方法检测流感疫苗主种子批病毒是否存在外源性禽腺病毒的污染。结果该多重PCR方法成功扩增得到了两条特异性目的条带,并经测序验证。该方法特异性好,灵敏度显示核酸最低检测量可达10-4μg/m L。使用该方法检测12批次流感疫苗主种子批病毒,外源性禽腺病毒的检测结果均为阴性。结论成功建立鸡胚致死孤儿病毒和鸡减蛋综合症病毒的多重PCR检测方法,灵敏度高,特异性好。在流感疫苗主种子批病毒的外源性禽腺病毒的检测中具有很高的使用价值和应用前景。

建立区域会诊中心的实践与思考——以常州市武进人民医院为例

目的由于城乡医疗资源分布不均,乡镇医疗机构医技人才相对匮乏,对疑难病症的诊断存在困难,因此武进区卫生和计划生育局牵头建立了区域影像、心电、临检、病理四大会诊中心,实现区域医疗资源共享,方便患者就医,取得较好的成效。笔者结合武进人民医院的具体实践,介绍区域会诊中心的建立以及取得的成效,对未来发展方向进行了探讨。

鸡胚致死孤儿病毒荧光定量PGR检测方法的建立及初步应用

目的：建立鸡胚致死孤儿病毒CELO的荧光定量PCR检测方法，实现该病毒在鸡胚及禽源性生物制品中的快速检测。方法根据CELO L5纤突1序列设计引物和探针，建立荧光定量PCR检测方法，并对其线性、特异性、精密性、灵敏度进行考察。运用建立的方法对40份SPF鸡胚尿囊液和16株流感疫苗主种子批毒种进行CELO检测。结果：建立的荧光定量PCR其最佳线性范围为1×10^9～1×10^4拷贝／μl，R^2值达0．99以上，特异性良好，与其他种属的腺病毒及流感病毒间均无交叉反应，灵敏度为10^2拷贝／ul；荧光定量PCR方法检测40份SPF鸡胚尿囊液和16株流感毒种结果为阴性。结论：本研究所建立的鸡胚致死孤儿病毒荧光定量PCR检测方法，特异性好，敏感性高，为鸡胚及禽源性生物制品中的快速检测提供了技术支撑。

兔出血症病毒抗体的实验室检测能力验证结果评价

目的通过兔出血症病毒抗体检测能力验证计划,了解实验动物检测机构检验能力,提高实验动物质量检测水平。方法按照CNAS批准的能力验证方案,通过筛选血清制备样品,经过稳定性和均匀性检验合格,作为能力验证样品。采用随机编号,发样给参加单位,并附作业指导书。在规定时限提交检验报告和原始记录复印件,其结果与样品预检结果一致的判为满意结果,不一致或未能提交结果的判为不满意结果。结果来自14个省市自治区的20个实验室报名参加本次比对实验,均在规定时间内反馈了检测结果,17个实验室检测结果为合格或优秀,占参加比对实验室的85%。在20个实验室中,14个实验室采用了酶联免疫吸附实验(ELISA)方法,6个实验室采用血凝抑制实验(HAI)方法。结论全国各实验动物检测机构兔出血症病毒抗体总体检测能力较高,实施能力验证计划能够反映实验室的检测水平。

实验小鼠呼肠孤病毒Ⅲ型抗体的实验室检测能力验证结果评价

目的通过实验小鼠呼肠孤病毒Ⅲ型抗体检测能力验证计划,了解实验动物检测机构检验能力,提高实验动物质量检测水平。方法按照CNAS批准的能力验证方案,血清经过标定后,经过稳定性和均匀性检验合格,作为能力验证样品。采用随机编号,发样给参加单位,并附作业指导书。在规定时限提交检验报告和原始记录复印件,其结果与样品预检结果一致的判为满意结果,不一致或未能提交结果的判为不满意结果。结果共有17个省市的27个实验动物检测机构报名参加本次能力验证项目。27个检测机构均提交了满意结果,占总参加机构的100%。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法的有26个检测机构,采用免疫荧光实验(IFA)方法的有1个检测机构。结论实验动物质量检测机构实验小鼠呼肠孤病毒Ⅲ型抗体检测能力较高,实施能力验证计划能够反映实验室的检测水平。

实验大鼠细小病毒H-1株抗体检测能力验证结果评价

目的了解全国实验动物检测相关实验室在大鼠细小病毒H-1株抗体检测项目的技术水平,发现并解决检验中存在的问题,促进各实验室加强质量管理,提高检测水平。方法不限定检测方法,推荐各参加实验室参照国标规定的方法,对统一发放的大鼠血清样品进行细小病毒H-1株的定性检测,结果以阳性或阴性表示,与预期结果均一致判为满意结果,不完全一致或逾期未反馈结果判为不满意。结果来自13个省市自治区的18家单位报名参加本次比对实验,1家单位因故退出,实际参加并发放比对样品共17家单位,其中16家在规定时间反馈了检测结果,1家未在规定时间反馈结果,反馈结果的16个实验室检测结果均为满意,占参加比对实验室的94%,其中13个实验室使用外购试剂盒,14个实验室采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测,仅2个实验室对阳性结果进行了复检。结论全国各实验动物检测机构大鼠细小病毒H-1株总体检测能力较高,个别实验室因故未参加或逾期未反馈结果,检测能力有待考察。

实验动物金黄色葡萄球菌的实验室检测能力验证结果评价

目的通过实施实验动物金黄色葡萄球菌检出能力验证计划,了解实验动物检测机构检验能力,提高实验动物质量检测水平。方法按照CNAS批准的能力验证方案,通过低温冻干制备样品,经过稳定性和均匀性检验合格,作为能力验证样品。采用随机编号,发样给参加单位,并附作业指导书。在规定时限提交检验报告和原始记录复印件,其结果与样品预检结果一致的判为满意结果,不一致或未能提交结果的判为不满意结果。结果共有28个实验室参加本次能力验证项目,其中获得满意验证结果的实验室为22个,占总参加机构的78.57%;未得到满意验证结果的实验室为6个,占21.43%。采用国标检测方法的有27个,采用PCR检测方法的有1个。结论实验动物质量检测机构对金黄色葡萄球菌的检测能力较高,实施能力验证计划能够反映实验室的检测水平。

实验小鼠、大鼠微卫星DNA检测法标准的编制

实验动物的遗传质量直接影响生物医药研究结果的可信性,遗传质量控制手段的多样性直接决定实验动物的遗传质量水平。本标准制定的目的是为实验小鼠和实验大鼠的遗传质量控制提供DNA检测方法,弥补现行方法的局限性,填补我国在该领域的空白,推动我国实验动物遗传质量检测水平的提高。

大鼠细小病毒H-1株和KRV株双重PCR检测方法的建立及应用

目的建立大鼠细小病毒H-1和KRV株双重PCR方法并对方法进行初步应用。方法根据NCBI发表的H-1(NC_001358)和KRV(U790330)基因组序列分别设计特异引物,以H-1和KRV病毒DNA为模板建立双重PCR方法,对方法进行优化后验证方法的敏感性和特异性;经口感染大鼠,分为H-1和KRV单独感染组和混合感染组,感染后第2,4,6,8,10天采集大鼠粪便,第10天处死所有大鼠,采集心、肝、脾、肺、肾和盲肠内容物等组织,用建立的方法对粪便和组织样本进行检测。结果建立的双重PCR方法以H-1和KRV为模板能够分别扩增出183 bp和302 bp 2个条带,敏感性验证显示能够检测到的最低H-1量为3.8 pg/m L,最低KRV量为0.73 pg/m L;在以小鼠微小病毒、犬细小病毒和猫细小病毒为模板时无任何条带扩增出,特异性良好。感染第2天在所有大鼠粪便中均检测到病毒核酸,感染大鼠均无明显临床症状,感染第10天采集组织,H-1在各组织的检出率分别是心50%(4/8),肝50%(4/8),脾62.5%(5/8),肺50%(4/8),肾37.5%(3/8),盲肠内容物62.5%(5/8),且单独感染组检出率高于混合感染组;KRV在各组织的检出率分别是心0(0/8),肝25%(2/8),脾87.5%(7/8),肺12.5%(1/8),肾25%(2/8),盲肠内容物62.5%(5/8),混合感染组检出率高于单独感染组。结论建立的H-1和KRV双重PCR方法能够高效的检测大鼠粪便及组织中的病毒感染,可作为实验动物国家标准的有力补充。

猫疱疹病毒Ⅰ型实时荧光定量PCR方法的建立及初步应用

目的：建立猫疱疹病毒I型（ FHV-1）实时荧光定量PCR检测方法，应用于实验用猫及临床患猫FHV-1的快速检测。方法根据已发表的FHV-1 TK基因序列设计特异引物和TaqMan探针，使用分子生物学方法制备质粒标准品，建立FHV-1实时荧光定量PCR方法，并对方法的线性、特异性、敏感性、及稳定性等进行测定。用建立的方法对48份猫临床样品进行检测。结果成功建立FHV-1实时荧光定量PCR方法；该方法的线性范围为（1×102～1×109）copies／μL，与单纯疱疹病毒Ⅰ型（HSV-1）、犬疱疹病毒（CHV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猫细小病毒（ FPV）均无交叉反应，检测灵敏度可达到10 copies／μL。批内变异系数均小于5％。应用该方法从48份猫临床样本中检测出33份FHV-1核酸阳性。结论建立的FHV-1PCR检测方法具有特异、敏感及稳定的特点，适合于临床FHV-1的快速定量检测。