戟天健脑方介导CREB/BDNF通路调节低糖低氧条件下大鼠海马神经元细胞突触可塑性的机制研究

目的:观察戟天健脑方对低糖低氧诱导大鼠海马神经元突触可塑性的影响。方法:SD大鼠灌胃7 d后制备含药血清,离体原代培养乳鼠海马神经元细胞,收集神经元细胞以每孔4×105个接种于24孔板中,DMEM高糖培养基培养。待细胞在培养至70%~80%时开始分组,共分为空白组、模型组、阳性组、戟天健脑方高、中、低剂量组6组,各组改用含药血清培养基,低氧条件下培养6 h后取出,正常氧条件下恢复20 h。免疫组化法检测甲基CpG结合蛋白2(methyl CpG-binding protein 2,MecP2)、三磷酸鸟苷酶活化蛋白(p250 GTPase activating protein,p250GAP)、突触后膜致密物质95(postsynaptic density 95,PSD-95)蛋白表达,免疫荧光法观察突触特异性指标突触生长相关蛋白43(growth-associated protein43,GAP-43)、突触素(synaptophysin,Syn)蛋白位点,ELISA法检测细胞环磷酸腺苷应答元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的含量。结果:与空白组比较,模型组中海马神经元细胞MecP2、PSD-95、GAP-43、Syn表达明显减少,p250GAP表达明显增加,CREB、BDNF含量明显减少(P<0.01);与模型组比较,阳性组及戟天健脑方高、中、低剂量组中MecP2、PSD-95、GAP-43、Syn表达明显增加,p250GAP表达明显减少,CREB、BDNF含量明显增加(P<0.05,P<0.01)。结论:戟天健脑方可以激活CREB/BDNF通路,增强PSD-95、GAP-43、Syn表达,促进突触重塑,保护大鼠海马神经元细胞。

桃红四物汤治疗原发性痛经疗效的Meta分析

目的通过对临床文献的研究,系统评价桃红四物汤治疗原发性痛经的疗效和安全性。方法采用主题词与自由词相结合的方式,检索CBM、CNKI、Wan Fang Data、VIP、ChiCTR、The Cochrane Library、ClinicalTrials.gov、Pubmed、Web of Scinece数据库,收集桃红四物汤治疗原发性痛经的随机对照试验,检索日期截止至2019年11月18日。采用Cochrane Handbook 5.1(干预措施系统评价手册5.1版)评价纳入研究的方法学质量。采用RevMan 5.3软件对结局指标(总有效率、不良事件发生率)进行Meta分析。结果共纳入17个随机对照试验作为研究对象,所涉及的患者总数为1853例。Meta分析显示:桃红四物汤(单用或配合其他疗法)与常规疗法(解热镇痛药、非甾体抗炎药、针灸、艾灸等)的疗效比较,临床总有效率高(OR=6.65,95%CI(4.97,8.89),P<0.00001),不良事件发生率较低。结论桃红四物汤治疗原发性痛经优于常规疗法,不良反应少;但是本研究所涉及的文献存在随机方法选取不当,分配隐藏、盲法未描述等问题,整体质量偏低。建议今后开展随机对照试验,参照CONSORT声明,选取科学严谨的随机对照方法,进行大样本多中心双盲的临床试验,增加证据强度。

基于网络药理学探讨柴胡加龙骨牡蛎汤治疗帕金森病伴发抑郁的作用机制

目的:基于网络药理学研究方法,探究柴胡加龙骨牡蛎汤(Chaihu-jia-Longgu-Mul-decoction,CLMD)治疗帕金森病伴发抑郁(Parkinson’s disease with depression,PDD)的可能作用机制。方法:利用中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)、PubChem数据库、Swiss平台筛选CLMD的生物活性成分,并预测其靶点;应用Genecards数据库分别收集"帕金森病(Parkinson’s disease,PD)""抑郁(Depression)"的疾病靶点;利用在线韦恩图绘制平台Venny 2.1对PDD与CLMD的靶点进行映射,运用STRING平台及Cytoscape软件构建蛋白相互作用(PPI)网络,筛选获得核心靶点;通过DAVID平台对核心靶点进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集和基因本体(GO)富集分析,探究可能的生物过程与信号通路;应用Cytoscape软件进一步筛选CLMD治疗PDD的关键成分,并构建"药物-成分-靶点-通路"网络。结果:预测得到CLMD治疗PDD的关键成分4个:槲皮素、β-谷甾醇、豆甾醇、山柰酚;核心靶点33个:AKT1、MAPK3、TP53、ALB、IL-6、VEGFA等。GO和KEGG富集分析结果显示,CLMD治疗PDD主要涉及凋亡、细胞增殖、转录、蛋白磷酸化等生物过程,可能通过酶结合、蛋白结合、转录因子结合等分子功能在蛋白质复合体、细胞质、细胞核、线粒体等多部位发挥作用,其作用机制可能与FOXO、PI3K-Akt、HIF-1、MAPK、VEGF、m TOR等信号通路有关,涉及AKT、m TOR、PTEN、MAPK等多个核心靶点。结论:CLMD治疗PDD具有"多成分-多靶点-多途径"的特点与优势,本研究为进一步研究CLMD治疗PDD的物质基础与分子机制提供了理论依据。

基于网络药理学探讨青钱柳调节血糖的作用机制

目的 通过网络药理学及分子对接的方法探讨青钱柳调节血糖的潜在作用机制。方法 通过文献对青钱柳进行化学成分搜集,利用Swiss ADME平台进行活性成分筛选,借助Swiss Target Prediction数据库进行作用靶点进预测,运用Cytoscape 3.8构建药物成分-靶点网络;检索Genecards,OMIM以及Disgenet数据库获取血糖靶点;通过韦恩图,得到青钱柳调节血糖靶点;使用String平台构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络;使用metascape数据平台进行基因分类(GO)富集分析和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路分析。构建青钱柳调节血糖活性成分-共同靶点-信号通路网络。同时进行分子对接验证。建立实验性Ⅱ型糖尿病大鼠模型,检测大鼠空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FIns)、糖化血红蛋白(HbA1c)水平,及大鼠胰脏组织ESR2、PTPN1的表达。结果 通过文献搜集筛选获得青钱柳39个活性成分,导入Swiss Target Prediction平台获得509个相关靶点。检索数据库获得血糖相关靶点1618个。二者取交集即为青钱柳调节血糖作用靶点134个,经PPI结果筛选得治疗靶点24个。GO富集分析共得主要条目中生物过程20条,细胞组成7条,分子功能10条。KEGG通路分析共得到核心信号通路8条。将8条通路涉及靶点与药物成分-靶点网络merge取交集后可得核心靶点18个,靶点连接的核心治疗成分29个。分子对接结果表明山奈酚、咖啡酸、槲皮素等核心成分与血糖调节相关蛋白及作用靶点具有较强的结合活性,可能具备相应的调节效果。青钱柳多糖能明显降低实验性Ⅱ型糖尿病大鼠模型FBG、FIns、HbA1c水平,提高大鼠胰脏组织ESR2、PTPN1的表达。结论 青钱柳可能是通过调节雌激素受体2型(ESR2)、酪氨酸蛋白磷激酶1型(PTPN1)、基质金属蛋白酶2型(MMP2)、金属蛋白酶2型(MMP9)、糖酶合酶激酶3B(GSK3B)、胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)等靶点,在体内参与神经信号传导,发挥相关蛋白质合成,细胞间信号传递等功能来调节血糖。

芍甘附子汤配方颗粒抗炎、镇痛作用研究

目的:观察芍甘附子汤配方颗粒的抗炎、镇痛作用。方法:采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高实验观察芍甘附子汤配方颗粒的抗炎作用,50只昆明小鼠随机分为5组:模型组、地塞米松组(5 mg·kg^-1·d^-1)、芍甘附子汤配方颗粒高(6 g·kg^-1·d^-1,以生药计)、中(3 g·kg^-1·d^-1,以生药计)、低(1.5 g·kg^-1·d^-1,以生药计)剂量组,每组10只,各实验组连续灌胃给药3 d,2次/d,给药间隔不低于4 h,模型组给与等体积0.5%CMC-Na溶液;采用小鼠醋酸扭体实验、小鼠热刺激反应实验观察芍甘附子汤配方颗粒的镇痛作用,50只昆明小鼠随机分为5组:模型组、布洛芬组(250mg·kg^-1·d^-1)、芍甘附子汤配方颗粒高(6 g·kg^-1·d^-1,以生药计)、中(3 g·kg^-1·d^-1,以生药计)、低(1.5 g·kg^-1·d^-1,以生药计)剂量组,每组10只,给药方法同前。结果:与模型组相比,芍甘附子汤配方颗粒各剂量组可降低二甲苯所致小鼠耳廓肿胀度(P<0.01),抑制醋酸诱导的小鼠腹腔毛细血管通透性增高(P<0.05或P<0.01)。芍甘附子汤配方颗粒各剂量组可减少醋酸所致小鼠疼痛的扭体次数(P<0.01),高、中剂量组还可显著延长小鼠的扭体潜伏期(P<0.01)。芍甘附子汤配方颗粒高、中剂量组的热板痛阈值较模型组增加(P<0.05或P<0.01)。结论:芍甘附子汤配方颗粒具有一定的抗炎、镇痛作用。

中药治疗跖疣疗效与安全性的Meta分析

目的:通过对临床文献的研究,系统评价中药治疗跖疣的疗效和安全性。方法:采用主题词与自由词相结合的方式,检索The Cochrane Library、Clinical Trials.gov、Pubmed、Web of Science、Springer、CNKI、CBM、Wan Fang Data、VIP、ChiCTR数据库,收集中药治疗跖疣的随机对照试验,检索日期截至2020年4月15日。采用Cochrane Handbook 5.1(干预措施系统评价手册5.1版)评价纳入研究的方法学质量。采用RevMan5.3软件对结局指标(总有效率、复发率、不良事件发生率)进行meta分析。结果:共纳入51个随机对照试验作为研究对象,所涉及的患者总数为4844例。Meta分析显示:中药(单用或配合其他疗法)与其他疗法(化学药、免疫调节剂、物理疗法等)的疗效比较,临床总有效率高[OR=5.12,95%CI(3.95,6.63),Z=12.35,P<0.00001],复发率低[OR=0.20,95%CI(0.15,0.28),Z=9.73,P<0.00001],不良事件发生率低[OR=0.44,95%CI(0.33,0.60),Z=5.36,P<0.00001]。结论:中药治疗跖疣疗效较好,复发率较低,安全性较高。

速效平喘合剂对脂多糖诱导的支气管上皮细胞炎症反应和TGF-β1/Smad3通路的影响

目的探讨速效平喘合剂对脂多糖刺激支气管上皮细胞NCI-H292炎症反应和TGF-β1/Smad3通路的影响。方法采用脂多糖刺激NCI-H292细胞建立炎症模型,将细胞随机分为空白组、模型组、阳性组以及速效平喘合剂低、中、高剂量组;采用MTT法检测细胞活力和增殖率,ELISA法检测细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-8(IL-8)、转化生长因子β1(TGF-β1)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;免疫组化染色法检测细胞因子TGF-β1、Smad泛素调节因子(Smurf2)、Smad3的表达情况。结果与空白组相比,模型组细胞活力下降,细胞因子IL-1β、IL-8、TGF-β1、TNF-α的分泌量和TGF-β1、Smad3的蛋白表达量均显著升高,Smurf2蛋白表达显著降低。与模型组比较,阳性组、速效平喘合剂低、中、高剂量组可显著逆转上述指标,其中后3组数据指标呈药物浓度依赖性的特点。结论速效平喘合剂能显著促进气道上皮细胞活力和增殖,其可能通过调控TGF-β1/Smad3信号转导通路,抑制炎症反应水平,发挥其对脂多糖诱导NCI-H292细胞损伤的保护作用。

应用网络药理学的方法探讨速效平喘合剂治疗支气管哮喘合并气道重塑的作用机制

目的应用网络药理学的方法探讨速效平喘合剂治疗支气管哮喘合并气道重塑的作用机制。方法搜索中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)及SwissADME平台筛选速效平喘合剂中的主要有效化合物及其靶点;运用Cytoscape 3.8绘制药物成分-靶点网络;通过Genecards、在线人类孟德尔遗传目录(OMIM)及Drugbank数据库检索支气管哮喘和气道重塑相关靶点;通过韦恩图得到速效平喘合剂、哮喘与气道重塑的共同靶点;使用String平台构建蛋白质-蛋白质相互作用网络;采用Metascape数据库分析基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路。采用动物实验对关键因子进行验证。结果共获得速效平喘合剂活性成分119个,速效平喘合剂调节支气管哮喘与气道重塑的心共同靶点32个;GO富集分析共得主要条目中涉及生物过程913条,细胞组成15条,分子功能48条。KEGG通路分析共得到核心信号通路78条。动物实验免疫组织化学结果显示,与模型组相比,阳性组以及速效平喘合剂低、中、高剂量组过氧化物酶体增殖物激活受体γ和转化生长因子-β1的表达呈剂量依赖性降低,与网络药理学结果相符。结论速效平喘合剂可能通过多种活性成分作用于促分裂原活化的蛋白激酶14、血红素加氧酶1、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白及信号转导及转录激活因子1等靶点,通过调节细胞迁移、细胞对激素及生长因子刺激等反应,干预缺氧诱导因子1及磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B等信号通路治疗支气管哮喘及气道重塑。

基于网络药理学探讨枳实薤白桂枝汤治疗肺栓塞的作用机制

目的:基于网络药理学方法对枳实薤白桂枝汤进行研究,探讨其治疗肺栓塞的作用机制。方法:根据药物成分的体内过程[吸收(absorption)、分布(distribution)、代谢(metabolism)及排泄(excretion),ADME]属性,通过中药系统药理学数据库和分析平台(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform,TCMSP)获取瓜蒌、薤白、枳实、桂枝及厚朴的主要化学成分,并借助中医百科全书(the encyclopedia of traditional Chinese medicine,ETCM)和中医药综合数据库(traditional Chinese medicine integrated database,TCMID)进行补充,筛选中药活性组分,利用Swiss Target Prediction获取活性成分作用靶点;通过Genecards、人类孟德尔遗传综合数据库(online mendelian inheritance in man,OMIM)及DRUGBANK数据库获取肺栓塞主要靶点,利用String平台进行蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)分析,构建PPI网络。采用Metascape平台分析"药物-成分-靶点"及其参与的生物过程及通路,运用Cytoscape 3.8.0软件构建"枳实薤白桂枝汤-肺栓塞-通路"网络。结果:枳实薤白桂枝汤治疗肺栓塞的核心活性成分为槲皮素、木犀草素、柚皮素及咖啡酸等,核心靶点为CYP1B1和DRD2等。枳实薤白桂枝汤治疗肺栓塞的生物学通路主要作用于血小板活化通路、神经活性配体-受体相互作用通路等,其功能主要为调节血红素结合、蛋白激酶活性等。结论:本研究初步揭示了枳实薤白桂枝汤治疗肺栓塞的可能的活性成分作用机制,可为后续的基础研究及临床研究提供线索及依据。

基于网络药理学探讨清咳平喘颗粒治疗急慢性支气管炎合并慢性阻塞性肺疾病的作用机制

目的:通过网络药理学的方法探讨清咳平喘颗粒治疗急慢性支气管炎合并慢性阻塞性肺疾病的潜在作用机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)对清咳平喘颗粒进行活性成分筛选以及作用靶点预测,运用Cytoscape 3.8构建药物成分-靶点网络;检索GeneCards,在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)以及DrugBank数据库获取疾病靶点;将靶点名输入到UniProt数据库进行标准化处理;通过韦恩图,得到清咳平喘颗粒治疗二病靶点;使用STRING平台构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络;使用MetaScape数据平台进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析;构建清咳平喘颗粒治疗急慢性支气管炎合并慢性阻塞性肺疾病活性成分-共同靶点-信号通路网络。并通过文献确认相关靶点的准确性。结果:共获得清咳平喘颗粒165个活性成分,374个相关靶点,疾病相关靶点512个,药物疾病共同靶点130个,其中核心治疗靶点14个。对14个核心靶点进行分析,其中GO富集分析共得生物过程390条,细胞组成9个,分子功能23个;KEGG通路分析共得到22条信号通路。结论:清咳平喘颗粒可能是通过调节血管内皮生长因子受体2(KDR),转化生长因子-β1(TGF-β1),基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1),细胞质膜微囊蛋白1(CAV1),低氧诱导因子-1α(HIF-1α),白细胞介素-2(IL-2)等靶点,在体内主要与细胞质内的调控因子的合成与转运有关,参与传递的细胞因子主要通过控制细胞增殖凋亡等功能来改善病情。

基于电子鼻技术的太子参产地及产地加工方法鉴别

目的采用电子鼻技术,探讨建立适合太子参的电子鼻检测方法,分别对不同产地加工、不同产地的太子参气味进行检测。方法依据获得的客观化气味信息,结合多元统计分析方法对太子参进行产地加工方法和产地的区分判别。结果太子参烫干品与晒干品的气味差异较大,不同水烫时间的烫干品之间没有差异。主成分分析法(PCA)对不同产地的太子参区分能力较弱,山东、安徽、福建等3个产地的太子参区分结果不明显。判别因子分析法(DFA)对不同产地太子参区分效果显著,通过该方法建立的模型正确判别率能达到100%。结论研究表明,通过运用电子鼻技术对太子参气味特征的表征,并与多元统计分析方法结合,可实现利用太子参特殊气味对太子参不同产地加工、不同产地样品鉴别,且区分效果较为理想,为药材质量鉴定提供一种技术手段,为今后对中药的气味客观化表达及产地、加工区分提供思路和借鉴。

鹿茸多肽对鱼藤酮致SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其机制

目的:探讨鹿茸多肽对鱼藤酮诱导的神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞损伤的干预作用及相关机制。方法:用0.5μmol·L^-1的鱼藤酮作用于SH-SY5Y细胞建立帕金森病(PD)体外模型,设置空白组、模型组、鹿茸多肽高、中、低剂量(150,100,50 g·L^-1)组及雷帕霉素组。通过苏木精-伊红(HE)染色,罗丹明123(Rh123)染色,2’,7’-二氯荧光黄二乙酸酯(DCFH-DA)染色及免疫组织化学染色观察各组细胞中路易小体的数量、线粒体膜电位的变化、活性氧簇(ROS)含量及α-突触核蛋白(α-syn),蛋白激酶B(Akt),哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达情况。结果:HE染色结果显示,与空白组比较,模型组中细胞数目减少、触角结构变钝,形态变圆,胞质内可见嗜酸性路易小体。与模型组比较,雷帕霉素组及鹿茸多肽高、中、低剂量组中细胞形态并无明显差异,但是胞质中路易小体较少;罗丹明123染色结果显示,与空白组比较,模型组中细胞线粒体膜电位明显升高(P<0.05)。与模型组比较,雷帕霉素组及鹿茸多肽高、中、低剂量组中细胞线粒体膜电位均有所下降(P<0.05);DCFH-DA染色结果显示,与空白组比较,模型组细胞中活性氧(ROS)含量明显增多(P<0.05);与模型组比较,雷帕霉素组及鹿茸多肽高、中、低剂量组的活性氧(ROS)含量均下降(P<0.05)。免疫组织化学结果显示,与空白组比较,模型组α-syn,Akt,mTOR蛋白表达明显增多(P<0.05);与模型组比较,雷帕霉素组及鹿茸多肽高、中剂量组α-syn,mTOR蛋白表达均明显减少(P<0.05),雷帕霉素组及鹿茸多肽高剂量组中Akt表达明显减少(P<0.05)。结论:鹿茸多肽可能是通过抑制Akt/mTOR信号通路促进α-syn的降解,从而发挥神经元保护作用。

基于网络药理学的丹参治疗深静脉血栓作用机制探讨

目的基于网络药理学方法探讨丹参治疗深静脉血栓(DVT)的作用机制。方法通过中药系统药理学分析平台(TCMSP)和化学专业数据库筛选丹参的有效成分及相应的靶蛋白,通过TTD、DrugBank、OMIM、GAD、PharmGKB等数据库筛选出DVT的靶点,利用Venn在线软件获取药物与疾病的共同靶点,运用Cytoscape 3.7.2软件构建"化合物-靶点-疾病"网络图。使用STRING数据库绘制蛋白互作(PPI)网络,利用DAVID、Bioconductor数据库对有效作用靶点进行GO功能、KEGG通路富集分析。结果共筛选出丹参化合物36个,有效作用靶点70个。通过Venn图获得36个药物疾病共同靶点,PPI网络发现ESR1、APP、FOS、MMP9、NR3C1、CASP3、MYC等可能是丹参治疗DVT的关键靶点。利用DAVID数据库与Bioconductor数据库进行GO功能分析发现其结果不完全一致。KEGG通路分析发现其主要通路包括白细胞介素17(IL-17)、肿瘤坏死因子(TNF)及核因子kB(NF-kB)等经典信号通路。结论本研究初步揭示了丹参治疗DVT的关键靶点和涉及的生物学过程及信号通路,发现其作用是多靶点、多通路,为今后的分子生物学实验奠定了基础。