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靶向小鼠 Tyr 基因的CRISPR/Cas9系统构建及打靶效力分析 被引量:1
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作者 岳鹏鹏 杨光宇 +3 位作者 王添贤 付灿 肖义然 于鸿浩 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期34-38,65,共6页
TYR基因编码酪氨酸酶,该基因变异影响黑色素的生成,是人类白化病的遗传学病因。研究利用OMIM、ExAC和ClinVar等数据库筛查人TYR基因的强致病突变位点,并通过蛋白序列比对分析将该位点定位于小鼠基因组上,然后基于定位位点的DNA序列和CRI... TYR基因编码酪氨酸酶,该基因变异影响黑色素的生成,是人类白化病的遗传学病因。研究利用OMIM、ExAC和ClinVar等数据库筛查人TYR基因的强致病突变位点,并通过蛋白序列比对分析将该位点定位于小鼠基因组上,然后基于定位位点的DNA序列和CRISPR/Cas9系统基因打靶的原理设计了3个向导RNA(small guide RNA,sgRNA)。通过sgRNA表达载体的构建、N2a细胞的共转染、药物筛选、PCR产物测序,以及TA克隆测序分析等实验步骤完成了3个sgRNA的打靶效力分析。TA克隆测序分析结果显示3个位点均发生了碱基的随机插入或缺失突变,突变效率均为100%,表明研究成功构建了高效的靶向小鼠Tyr基因,并可模拟人类白化病强致病突变的CRISPR/Cas9基因编辑系统,为进一步制备Tyr基因工程小鼠,深入研究Tyr基因变异的致病机制和探寻可靠治疗手段奠定了基础。 展开更多
关键词 白化病 Tyr基因 基因编辑 CRISPR/Cas9
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肝细胞癌中CBX2的免疫和预后意义的综合分析
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作者 宋鑫 王添贤 +1 位作者 朱小年 谭盛葵 《世界华人消化杂志》 CAS 2021年第19期1118-1129,共12页
背景肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC),是世界上第六大常见恶性肿瘤和第三大癌症死亡原因,在过去的30年里,全世界肝癌患者的发病率从每10万人1.6人上升到4.6人.广西是我国HCC的高发区,其死亡率居广西肿瘤死因谱首位,约占全部恶... 背景肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC),是世界上第六大常见恶性肿瘤和第三大癌症死亡原因,在过去的30年里,全世界肝癌患者的发病率从每10万人1.6人上升到4.6人.广西是我国HCC的高发区,其死亡率居广西肿瘤死因谱首位,约占全部恶性肿瘤的40%.因此探讨色素框同源物2(chromobox homolog 2,CBX2)在肝细胞癌免疫中的作用,将为HCC治疗提供潜在的价值.目的探讨CBX2基因在HCC组织中的表达及其免疫和预后意义.方法采用组织微阵列和免疫组织化学方法检测75例HCC及其对应癌旁非肿瘤组织中的CBX2的表达,分析CBX2与HCC的临床病理特征以及患者生存预后之间的关系.探讨CBX2与免疫调节因子之间的关系,并通过GO和KEGG通路富集分析确定CBX2与免疫事件有关.使用COX回归模型开发多基因风险预测模型,由此产生的风险评分是一个独立的预测因子.我们使用接受者操作特性(receiver operating characteristic,ROC)曲线方法评估风险评分的预测准确性.最后,构建了带有校准曲线的预后诺模图,以预测个体的3年和5年生存概率.结果CBX2在HCC组织中的阳性表达为66.7%(50/75),明显高于癌旁非肿瘤组织25.3%(19/75),差异有统计学意义(P<0.01).结合临床病理学特征分析发现,CBX2的表达与HCC患者的TNM分期和AFP具有相关性(P<0.05).进一步生存分析发现,CBX2阳性组患者的生存时间明显高于阴性组,提示CBX2阴性表达可能与HCC患者的不良预后相关;CBX2表达与辅助型T细胞2的浸润水平呈正相关;我们确定了CBX2与10个免疫抑制因子和23个免疫刺激因子之间的关系,相关的GO和KEGG通路富集分析表明CBX2与介导的免疫事件相关.结论CBX2阳性表达是HCC患者的预后危险因素;CBX2可能是HCC的潜在免疫预后标志物. 展开更多
关键词 肝细胞癌 CBX2 预后 免疫浸润
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基于CRISPR/Cas9系统高效编辑小鼠miR let-7a
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作者 周岚 张生贵 +3 位作者 胡祖梁 王添贤 岳鹏鹏 于鸿浩 《基础医学与临床》 2022年第6期857-863,共7页
目的构建靶向小鼠miR let-7a的高效CRISPR/Cas9系统。方法根据小鼠miR let-7a的两个编码位点let-7a-1和let-7a-2的编码序列各设计了两对dual-sgRNAs导向序列,通过sgRNA表达载体的构建、小鼠N2a细胞的共转染、药物筛选、阳性细胞PCR产物... 目的构建靶向小鼠miR let-7a的高效CRISPR/Cas9系统。方法根据小鼠miR let-7a的两个编码位点let-7a-1和let-7a-2的编码序列各设计了两对dual-sgRNAs导向序列,通过sgRNA表达载体的构建、小鼠N2a细胞的共转染、药物筛选、阳性细胞PCR产物测序以及TA克隆测序分析等实验步骤完成了4对dual-sgRNAs导向序列的打靶效力分析。结果所构建的4对打靶载体在细胞中发挥了作用,打靶位点均出现了碱基插入或缺失,药物筛选阳性细胞打靶位点RCR产物Sanger法测序峰图在4个靶点位置均有套峰出现。TA克隆测序结果表明本研究设计的4对dual-sgRNAs导向序列的打靶效率分别为42.10%、62.50%、52.63%和47.37%。结论本研究所设计的4对dual-sgRNAs导向序列均可以有效介导Cas9蛋白切割小鼠miR let-7a,形成突变效应。为后续miR let-7a作用靶点的深入挖掘,阐明其发挥抑癌功能的作用机制提供了依据。 展开更多
关键词 MIRS let-7a CRISPR/Cas9 基因编辑 肿瘤发生
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“全面二孩”政策下桂林市育龄期妇女的生育意愿调查
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作者 陶光均 杜维维 +4 位作者 梁安华 陈明连 蒋楠 王添贤 张国栋 《沈阳医学院学报》 2021年第1期39-42,46,共5页
目的:调查在"全面二孩"政策下,桂林市育龄期妇女的生育意愿,为生育政策调整决策的制定提供一定的依据。方法:采用调查问卷收集1 800例调查对象的相关资料,对比不同特征调查对象的生育意愿、调查对象对于第二胎性别偏好的差异... 目的:调查在"全面二孩"政策下,桂林市育龄期妇女的生育意愿,为生育政策调整决策的制定提供一定的依据。方法:采用调查问卷收集1 800例调查对象的相关资料,对比不同特征调查对象的生育意愿、调查对象对于第二胎性别偏好的差异,分析调查对象的基本情况并分析调查对象愿意或者不愿意生育二孩的原因。结果:本次调查共回收有效问卷1 708份,其中814例(47.66%)调查对象近3年内有生育二孩的意愿。年龄≤40岁、双方或者一方为农业户口、其中现有孩子为男孩、文化程度高、家庭年收入高的调查对象具有更强的生育二孩意向(P<0.05)。不同年龄阶段、户籍性质、文化程度、家庭年收入的调查对象均偏向二胎性别为女孩(P<0.05);现有第一胎为女孩的调查对象,更希望第二胎是男孩,而现有孩子为男孩的调查对象,则希望第二胎性别为女孩(P<0.05)。49.75%(405/814)愿意生育二孩的调查对象原因为"两个小孩一起成长不孤独";28.25%(137/485)不愿意生育二孩的调查对象原因为"时间精力不足"。结论:在"全面二孩"政策下,桂林市育龄期妇女的生育意愿偏低,应加强宣传教育,强化相关影响因素的干预,以改善并调整育龄期妇女的生育意愿。 展开更多
关键词 全面二孩 育龄期妇女 生育意愿
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应用学习迁移规律构建人体解剖生理学综合课程体系的探讨
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作者 蒋常文 陆薇 +2 位作者 李健 黄宝娇 王添贤 《中文科技期刊数据库(全文版)医药卫生》 2022年第7期220-223,共4页
研究按照学习迁移理论人体解剖生理学综合课程体系的构建及其对学习迁移的促进作用。通过深入挖掘课程内容的共同要素,按照从一般到个别,从易到难,从已知到未知的原则,将人体解剖学、组织学和人体生理学融合为人体解剖生理学综合课程体... 研究按照学习迁移理论人体解剖生理学综合课程体系的构建及其对学习迁移的促进作用。通过深入挖掘课程内容的共同要素,按照从一般到个别,从易到难,从已知到未知的原则,将人体解剖学、组织学和人体生理学融合为人体解剖生理学综合课程体系一门课程,在2021级药学专业和中药学专业学生实施并进行分析与评价。结果显示人体解剖生理学综合课程体系可促进学习迁移和促进分析问题和解决问题能力培养。 展开更多
关键词 学习迁移 人体解剖生理学 共同要素
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