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赤羽病病毒单克隆抗体的制备及c-ELISA抗体检测方法建立
1
作者
胡世享
叶玲玲
+6 位作者
肖妍
卓娜
王滕芬
汪琳
蒲静
陈培富
艾军
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2023年第S01期452-456,共5页
为建立一种用于快速检测赤羽病病毒抗体的竞争ELISA法。用AKV病毒免疫Balb/C小鼠,将其脾细胞与SP2/0细胞进行免疫融合,以获得抗AKV的单克隆抗体;利用Bac-to-Bac杆状病毒表达的SBV N蛋白作为诊断特异性抗原,山羊抗鼠HRP-IgG为二抗,建立...
为建立一种用于快速检测赤羽病病毒抗体的竞争ELISA法。用AKV病毒免疫Balb/C小鼠,将其脾细胞与SP2/0细胞进行免疫融合,以获得抗AKV的单克隆抗体;利用Bac-to-Bac杆状病毒表达的SBV N蛋白作为诊断特异性抗原,山羊抗鼠HRP-IgG为二抗,建立并优化AKV抗体检测的竞争ELISA方法。得到一株持续稳定繁殖的能够分泌单抗AKV核蛋白抗体的杂交瘤细胞株,单抗亚型鉴定为:重链IgG1,轻链kappa,仅能与AKV病毒呈阳性反应,与BTV、FAMD、EHDV病毒等病毒抗原不发生特异性反应;建立的检测AKV抗体ELISA检测方法,诊断抗原最佳包被浓度为0.5μg/mL,1∶1000抗体稀释比,1∶50血清稀释比,1∶2000二抗稀释比,封闭条件为5%BSA,37℃封闭2 h,确定了血清抑制率大于等于44%时为阳性,小于44%为阴性;所建立的ELISA方法敏感性和特异性鉴定结果与ID Screen AKV Competition检测试剂盒一致。本试验成功制备出一株分泌针对AKV N蛋白的杂交瘤细胞系,建立的ELISA检测方法能够用于检测动物AKV抗体,为进一步开展AKV抗体诊断试剂工艺研究、产业化奠定了基础。
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关键词
赤羽病
单克隆抗体
竞争ELISA
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职称材料
题名
赤羽病病毒单克隆抗体的制备及c-ELISA抗体检测方法建立
1
作者
胡世享
叶玲玲
肖妍
卓娜
王滕芬
汪琳
蒲静
陈培富
艾军
机构
云南农业大学
昆明海关技术中心
天津海关动植物与食品检测中心
中国海关科学技术研究中心
出处
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2023年第S01期452-456,共5页
基金
国家重点研发计划课题(2022YFC2601605)。
文摘
为建立一种用于快速检测赤羽病病毒抗体的竞争ELISA法。用AKV病毒免疫Balb/C小鼠,将其脾细胞与SP2/0细胞进行免疫融合,以获得抗AKV的单克隆抗体;利用Bac-to-Bac杆状病毒表达的SBV N蛋白作为诊断特异性抗原,山羊抗鼠HRP-IgG为二抗,建立并优化AKV抗体检测的竞争ELISA方法。得到一株持续稳定繁殖的能够分泌单抗AKV核蛋白抗体的杂交瘤细胞株,单抗亚型鉴定为:重链IgG1,轻链kappa,仅能与AKV病毒呈阳性反应,与BTV、FAMD、EHDV病毒等病毒抗原不发生特异性反应;建立的检测AKV抗体ELISA检测方法,诊断抗原最佳包被浓度为0.5μg/mL,1∶1000抗体稀释比,1∶50血清稀释比,1∶2000二抗稀释比,封闭条件为5%BSA,37℃封闭2 h,确定了血清抑制率大于等于44%时为阳性,小于44%为阴性;所建立的ELISA方法敏感性和特异性鉴定结果与ID Screen AKV Competition检测试剂盒一致。本试验成功制备出一株分泌针对AKV N蛋白的杂交瘤细胞系,建立的ELISA检测方法能够用于检测动物AKV抗体,为进一步开展AKV抗体诊断试剂工艺研究、产业化奠定了基础。
关键词
赤羽病
单克隆抗体
竞争ELISA
Keywords
Akabane disease
Monoclonal antibodies
Competive ELISA
分类号
S436.34 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
赤羽病病毒单克隆抗体的制备及c-ELISA抗体检测方法建立
胡世享
叶玲玲
肖妍
卓娜
王滕芬
汪琳
蒲静
陈培富
艾军
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2023
0
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