免疫组织化学切片行EBER原位杂交检测方法的建立及应用

目的在石蜡组织免疫组织化学(IHC)阴性切片上建立EBER原位杂交(ISH)检测方法,为EB病毒相关淋巴组织病变在组织资源不足的情况下提供及时有效的检测结果及诊断依据。方法回顾性收集首都医科大学附属北京友谊医院病理科2021年1月至2023年2月间EBER原位杂交检测阳性的病例23例,其中NK/T细胞淋巴瘤8例,弥漫大B细胞淋巴瘤6例,伯基特淋巴瘤2例,经典霍奇金淋巴瘤4例,传染性单核细胞增多症3例。先选取1例组织量充足的EB病毒阳性弥漫大B细胞淋巴瘤组织用于IHC后EBER ISH前组织预处理条件的摸索,然后使用最佳预处理条件建立本实验的检测流程并用于另外22例组织中。22个蜡块每例连续切片2张,1张进行常规的EBER原位杂交检测,归为对照组;另1张归为实验组,先进行IHC染色,再按最佳预处理条件进行EBER原位杂交。最后对两组切片杂交的成功率、阳性强度、阳性细胞比例及组织细胞结构进行观察对比。结果实验组EBER杂交的成功率为90.91%(20/22),与对照组[100%(22/22)]相比,差异无统计学意义(P>0.05),杂交成功的切片阳性着色位于细胞核,定位准确,背景干净。两组切片的阳性细胞比例差异无统计学意义(P>0.05)。染色强度上,对照组中8例评分为3分的组织在实验组评分为2分,使两组染色强度的对比差异有统计学意义(P<0.05),但杂交结果仍可清晰明确地判读。实验组与对照组切片均未出现组织脱片、细胞形态结构不完整的现象。结论本文建立的IHC-EBER原位杂交检测方法操作简单、定位准确、成功率高、结果准确,可有效解决患者因切片或组织资源不足而无法进行EBER原位杂交检测的难题,能够为EB病毒相关淋巴组织疾病提供及时有效的诊断依据,具有临床实用价值,值得推广。

ACE2在结肠癌中表达的临床意义及结肠癌细胞对以ACE2为受体的三种人冠状病毒的易感性分析

目的分析血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)在结肠癌中的表达及与结肠癌患者预后的关系,探讨结肠癌细胞对以ACE2为受体的三种人冠状病毒的易感性。方法利用实时荧光定量聚合酶链式反应、免疫组织化学和蛋白质免疫印迹,探究结肠癌组织和细胞中ACE2的表达,并结合数据库分析ACE2的表达与结肠癌患者预后的关系。借助人冠状病毒假病毒分析结肠癌细胞对人冠状病毒假病毒的易感性。结果结肠癌组织和细胞中ACE2的表达水平明显升高。且ACE2的表达水平与结肠癌患者预后无关。与结肠上皮细胞CCC-HIE-2相比,结肠癌细胞Caco2对重症急性呼吸综合征冠状病毒假病毒的易感性显著升高。除HCT-15细胞外,所有结肠癌细胞对新型冠状病毒假病毒的易感性明显升高。所有结肠癌细胞对人冠状病毒NL63假病毒的易感性明显升高。结论ACE2在结肠癌组织和结肠癌细胞中表达增加且其表达与结肠癌患者预后无关,大部分结肠癌细胞对三种人冠状病毒的易感性增加。

骨髓活检在EBER原位杂交检测中消化时间的优化

目的优化骨髓活检样本在EB病毒编码的小RNA(EBER)原位杂交检测中的消化时间。方法对20例EB病毒相关疾病的骨髓活检样本,连续切片3张,分为3组,使用同一浓度的蛋白酶K,对3组切片进行间隔5 min的梯度时间消化,然后继续进行EBER原位杂交的其它检测步骤,并对结果进行判读。结果消化时间为10 min组的切片,杂交效果最好,组织结构完整,阳性细胞着色深,定位准确,背景干净,结果清晰易辨。结论骨髓活检样本与其他活检组织相比,在EBER原位杂交检测中的消化时间要适当延长,以10 min最佳。

HE切片褪色后行EBER原位杂交检测方法的探讨

目的探讨将HE切片褪色后行EB病毒编码的小RNA(EBER)原位杂交检测的方法。方法收集40例EBER原位杂交检测阳性病例的HE切片作为实验组,相同蜡块的连续切片作为对照组,分别进行EBER原位杂交检测。结果实验组中,38张切片的组织结构全部完整,2张骨髓穿刺切片中的骨小梁脱片,但剩余组织组织结构保持完整。所有40张切片均杂交阳性,阳性信号位于细胞核,呈棕黄色,定位准确、清晰可读,杂交背景干净。阳性细胞数目及强度与对照组无差别。结论将HE切片褪色后行EBER原位杂交检测,方法简单、可靠,在病理诊断中有一定的应用价值。

HE染色切片行荧光原位杂交检测方法的探讨

目的建立HE染色切片上进行荧光原位杂交(FISH)检测的技术方法。方法 HE染色后的切片,轻轻揭掉其盖玻片,然后放在二甲苯中浸泡40 min,重复2次。接着按本实验室标准的FISH操作规程进行。结果用此方法进行FISH检测,组织无脱片,信号清楚,定位准确,背景干净。结论 HE染色切片行荧光原位杂交检测方法稳定,结果可靠,在病理诊断中有一定的应用价值。

骨髓活检HE染色时细胞核灰染的处理方法比较

目的探讨骨髓穿刺活检组织在HE染色时细胞核灰染的处理方法,以提高染色质量。方法收集HE染色时骨髓穿刺活检组织中细胞核灰染的病例15例,每例重新切片,通过延长苏木素染色时间、高压修复、微波修复及氨水浸泡等4种不同的处理方法,设对照组,比较各种处理方法的染色效果。结果高压法、微波法和氨水法均能明显改善骨髓腔内各细胞核的灰染现象,但高压法易使骨小梁脱片,微波法处理时间较长,氨水法既能保持组织结构的完整性,又用时较短。延长时间法改善细胞核灰染的效果不及前三种方法。结论氨水法是处理骨髓穿刺活检组织在HE染色时细胞核灰染的一种有效的方法,且操作简单、快速。

原位荧光杂交检测在骨髓活检切片中的方法建立及优化

目的建立及优化骨髓活检石蜡切片原位荧光杂交(FISH)检测流程。方法建立和优化骨髓活检石蜡切片FISH检测步骤和实验条件,在20例骨髓活检组织,其中5例诊断为套细胞淋巴瘤(MCL),应用FISH检测IGH/CCND1探针。结果建立骨髓活检石蜡切片的FISH检测步骤和实验条件,5例确诊MCL骨髓活检石蜡切片可检测到IGH/CCND1融合信号。证明本方法的可行性。结论骨髓活检石蜡切片FISH检测可以获得信号清晰、核形态较好、背景清晰的FISH染色结果,可以满足临床应用要求。

循环荧光原位杂交在淋巴瘤诊断中的价值研究

目的在单张淋巴瘤石蜡切片上建立循环荧光原位杂交检测的方法,为需要多基因检测的淋巴瘤患者在组织或切片不足的情况下提供及时有效的诊断。方法回顾性收集2020年1月至2021年5月首都医科大学附属北京友谊医院病理科(北京市临床医学研究所淋巴瘤诊断研究中心)和外院会诊的淋巴瘤病例共27例,其中本院10例,外院会诊17例。27例均进行过MYC、BCL2和BCL63种基因的FISH检测,每例切片3张。根据杂交的不同将实验分为3组:杂交1组(HG1):将3张切片分别滴加MYC、BCL2、BCL6探针并按我科室常规荧光原位杂交方法操作。杂交2组(HG2):将HG1组中杂交MYC探针的切片使用本文介绍的循环荧光原位杂交方法,滴加BCL2探针进行第2次杂交。杂交3组(HG3):将HG2组的切片用循环方法滴加BCL6探针进行第3次杂交。观察3组切片红、绿荧光信号的有无、信号模式及组织、细胞结构情况。结果HG2组和HG3组循环荧光原位杂交的成功率均为100%。循环杂交后,HG2组中BCL2基因和HG3组中BCL6基因断裂阳性、阴性及扩增病例与HG1组完全相符,每张切片上基因表达异常的细胞数目与HG1组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。HG2组和HG3组在循环杂交后,切片上的组织结构完整,细胞轮廓清晰,信号明亮清晰、定位准确。结论循环荧光原位杂交检测法可以在同一张切片上多次杂交不同的基因探针,方法简便,成功率高,结果准确,可有效解决淋巴瘤患者因组织或切片不足而无法进行多基因检测的问题,在淋巴瘤诊断中具有实用价值。

右颈部淋巴结肿大

1．病例简介：患者男，64岁。于2011年1月无意中发现右颈部包块，约黄豆大小。无压痛、盗汗、发热等不适。于当地医院行右侧颈部淋巴结针刺活检，病理诊断考虑为恶性淋巴瘤，建议切除活检明确诊断。