膜联蛋白A7与IGFBP2结合抑制肝癌细胞增殖

目的分析膜联蛋白A7(ANXA7)与肝癌发生的相关性及筛选、鉴定ANXA7的相互作用分子,探讨ANXA7在肝癌发生中的机制。方法通过实时定量PCR法检测48对肝癌与癌旁组织以及多种肝和肝癌细胞株中ANXA7表达量的差异,并通过肝癌细胞ANXA7过表达及特异性干扰抑制分析其对肝癌细胞增殖的影响。采用免疫共沉淀法筛选与ANXA7发生结合的蛋白,并以点突变法分析蛋白质相互作用的关键位点;用蛋白免疫印迹法分析了ANXA7对肝癌相关的重要信号通路中ERK1/2磷酸化水平的影响。结果 ANXA7在肝癌组织与肝癌细胞中均呈下调表达。胰岛素样生长因子结合蛋白2(insulin-like growth factor binding protein 2,IGFBP2)能与ANXA7蛋白发生特异性结合,且IGFBP2上的RGD序列是两者结合的关键位点。肝癌细胞中ANXA7表达上调能抑制肿瘤细胞增殖(P<0.05),并能使IGFBP2介导的ERK1/2的磷酸化水平降低。下调ANXA7的表达可促进肝癌细胞增殖(P<0.01),磷酸化ERK1/2的水平升高。结论 ANXA7可能作为一种抑癌基因,通过介导IGFBP2对ERK1/2磷酸化水平的影响参与对肝癌增殖的调控。

融合蛋白AnxB1-MLT的表达、纯化及其对肝癌细胞SMMC7721和HepG2增殖的抑制作用

目的以膜联蛋白B1（AnxBl）为导向分子，与蜂毒素（MLT）基因融合，制备AnxBl一MLT融合蛋白，探讨其对磷脂酰丝氨酸脂质体的结合活性及对肝癌细胞SMMC7721和HepG2增殖的抑制作用。方法利用重叠延伸PCR技术构建AnxBl和MLT的融合基因AnxBl-MLT，克隆至原核表达载体pGEX-5T，转化至宿主菌K802，用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导AnxBl-MLT融合蛋白表达，优化表达条件，用谷胱甘肽一孓转移酶（GST）亲和色谱纯化柱纯化融合蛋白。采用磷脂结合实验验证AnxBl-MLT融合蛋白的钙依赖性磷脂结合活性，采用CCK-8方法分别检测AnxBl-MLT融合蛋白对肝癌细胞系SMMC7721和HepG2细胞增殖的影响。结果AnxBl-MLT融合蛋白在宿主菌K802中能够表达，在菌液生长至D600为0．6时，加入诱导剂IPTG至终浓度0．2mmol／L，低温（22~24℃）诱导表达4h，可使蛋白表达量较高且在上清有表达。通过GST亲和色谱纯化柱纯化融合蛋白，SDS-PAGE结果显示在63000处可见单一目的条带，纯度〉95％。AnxBl-MLT融合蛋白保留了AnxBl的钙依赖性磷脂结合活性，并能显著抑制肝癌细胞系SMMC7721和HepG2的增殖。结论成功制备了AnxBl-MLT融合蛋白，该融合蛋白具有AnxBl的钙依赖性磷脂结合活性，可抑制肝癌细胞SMMC7721和HepG2的增殖，为进一步利用动物实验研究AnxBl-MLT的抗肿瘤效果奠定了基础。

基因工程综合性实验教学改革初探

传统的基因工程实验教学存在着资金投入少、知识结构老化、教学内容更新慢及学生学习被动等许多问题。因此,有必要通过教学改革来推动基因工程技术的实验教学,其主要措施有：加大资金投入、更新实验内容、加强师资培训、让学生参与实验教学的准备、实验教学与科研实践相结合等。根据在基因工程实验教学的实践中积累的经验和体会,对实验的内容、教学方法和手段进行了充实和改革,并取得了一定的成绩。

“中国新闻奖”获奖作品的定量研究

本文以1991年-2008年"中国新闻类"获奖作品为考察样本,分别对获奖数量趋势、体裁分布状况、获奖率以及作品题材比例、地域奖额差距、报道倾向权重等内容进行量化分析,从中可折射出新闻奖评奖制度的潜移默化影响。

粒状头样2(GRHL2)与肿瘤

粒状头样2(GRHL2)作为果蝇GRH(grainyhead)基因在哺乳动物中的同源基因之一,不仅参与调控胚胎发育、表皮屏障形成、表皮损伤修复以及中枢神经系统的发育等诸多生命活动过程,而且在乳腺癌、肝癌、口腔鳞状细胞癌等多种肿瘤的发生发展中发挥着重要作用。GRHL2在肝癌、乳腺癌、口腔鳞状细胞癌等肿瘤中表达升高,促进肿瘤细胞增殖,抑制细胞凋亡;而在上皮-间质转化(EMT)相关的乳腺癌中则下调表达,促进EMT的发生。GRHL2在肿瘤细胞中作用机制复杂而多样,既包括死亡受体相关的凋亡作用,人端粒反转录酶(hTERT)的活化,也涉及到EMT的发生、失巢凋亡敏感性增加。随着对GRHL2研究的深入,将有望为恶性肿瘤的临床诊断和治疗开辟新的方向。