基于雌激素应答元件转录调节的药物筛选模型的建立

目的 :建立靶向雌激素应答元件 (ERE)的药物筛选模型 ,为筛选雌激素受体 (ER)配体奠定基础。方法 :构建重组报告基因载体 pERE TAL SEAP ,与对照载体 pCMVβ瞬时共转染表达人ERα或ERβ的Hela细胞株 ,观察化合物对SEAP报告基因表达活性的影响。结果 :雌二醇 (E2 )诱导表达人ERα或ERβ的Hela细胞株SEAP的表达 ,EC50 分别为 (80 .5 8± 8.5 1) pmol·L-1和 (10 3.90± 5 .2 9) pmol·L-1,最大效应浓度为 10nmol·L-1;金雀黄素 (Gen)也诱导表达人ERα和ERβHela细胞株SEAP的表达 ,EC50 分别为 (39.38± 2 .2 6 )nmol·L-1和 (10 .86±0 .75 )nmol·L-1;最大效应浓度为 1μmol·L-1;E2 和Gen诱导SEAP表达的最大水平较对照孔细胞高 7～ 14倍。ER拮抗剂ICI182 ,780可完全抑制E2 和Gen对SEAP的诱导作用。结论 :利用此模型检测化合物诱导报告基因的表达水平可筛选和发现ER配体。

报道基因技术及其应用

报道基因技术被广泛用于监测与信号转导及基因表达有关的细胞内事件。将基因调控元件与报道基因相连并转染到细胞内 ,报道基因表达产物可以反映细胞内与基因表达有关的信号转导事件。本文主要综述了报道基因的种类及其检测方法。

红花等10种中药的植物雌激素活性研究

目的:评价红花、川牛膝、丹参、女贞子、枸杞、甘草、肉苁蓉、淫羊藿、补骨脂、菟丝子等10味中药的植物雌激素活性。方法:选用昆明种雌性乳鼠,随机分为A,B二组:A组又分为12组(溶剂对照组、己烯雌酚组和10个中药组);B组也分为12组(溶剂对照组、己烯雌酚组和10个中药拮抗组),其中中药拮抗组每天同时灌胃中药和己烯雌酚;各组给药4d后分离血清。利用雌激素受体(ER)阳性MCF-7细胞,以MTT法检测中药含药血清对细胞增殖的影响。结果:A组中,红花、川牛膝、丹参、枸杞、肉苁蓉、淫羊藿、补骨脂和菟丝子等中药含药血清可显著促进MCF-7细胞增殖;而女贞子组可见细胞增殖受到明显抑制。B组中,红花、川牛膝、丹参、甘草、淫羊藿、补骨脂和菟丝子组可见己烯雌酚促细胞增殖的作用受到了显著抑制;而肉苁蓉可协同并显著增强己烯雌酚促细胞增殖的作用。结论:红花、川牛膝、丹参、淫羊藿、补骨脂、菟丝子等6种中药在单独用药时具有拟雌激素作用,在与雌激素同时用药时具有抗雌激素作用,其双向调节效应依赖于体内雌激素水平的高低。

补骨脂素的植物雌激素作用及其机制探讨

目的：利用雌激素受体（ER）α,β阳性T47D细胞和子宫内膜癌Ishikawa细胞观察补骨脂素的雌激素样作用,并探讨其可能的作用机制。方法：以1×10^-8mol.L^-1雌二醇（E2）为阳性对照药,利用MTT细胞增殖试验观察1×10^-5~1×10^-9mol.L^-1补骨脂素对T47D增殖的影响,同时观察1×10^-6mol.L-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素对Ishikawa细胞增殖的影响;以半定量RT-PCR法检测1×10^-6mol.L-1和1×10-7mol.L-1补骨脂素对T47D细胞雌激素效应基因PR mRNA表达情况的影响;并以雌激素受体拮抗剂ICI 182,780为工具药进行干预。同时,通过流式细胞术检测1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素引起T47D细胞ER-α,ER-β含量的变化。结果：1×10^-5~1×10^-7mol.L^-1补骨脂素能够显著促进T47D细胞增殖;1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素对Ishikawa细胞增殖也有显著的促进作用;RT-PCR结果显示：1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素可使T47D细胞PR mRNA表达显著增加,表现出雌激素样作用,而且以上效应可被ICI 182,780拮抗。1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素还可诱导T47D细胞ER-α,ER-β表达明显增加。结论：补骨脂素具有植物雌激素作用,并且其作用是通过ER途径介导的。

6种中药活性成分植物雌激素作用的比较研究

目的观察蜕皮甾酮等6种中药活性成分对MCF-7细胞增殖、细胞周期的影响,以探讨它们的植物雌激素样作用及其可能机制。方法采用MTT细胞增殖实验观察6种中药活性成分:蜕皮甾酮、红花黄色素A、丹参酮I、丹参酮ⅡA、补骨脂素、异补骨脂素对雌激素受体(ER)阳性细胞系MCF-7增殖的影响,并以雌激素受体拮抗剂IC I182,780干预,探讨其发挥雌激素样作用的可能机制。同时,通过流式细胞术检测这些活性成分对MCF-7细胞增殖周期的影响。结果蜕皮甾酮、红花黄色素A、补骨脂素、异补骨脂素能够促进ER阳性细胞系MCF-7增殖,并将细胞周期由G1期向S期推进,促进DNA合成,提高细胞分裂增殖指数。同时,加入ER拮抗剂IC I182,780可抑制其促增殖作用。丹参酮I和丹参酮ⅡA能够抑制ER阳性细胞系MCF-7增殖,但对其细胞周期影响不显著。同时,加入ER拮抗剂IC I182,780可减弱其对MCF-7增殖的抑制作用。结论蜕皮甾酮、红花黄色素A、补骨脂素、异补骨脂素能够促进MCF-7增殖,而丹参酮I和丹参酮ⅡA可抑制MCF-7细胞增殖,其作用均是通过ER介导的。

复方鳖甲软肝方对肺纤维化大鼠细胞外基质的影响

目的 :研究复方鳖甲软肝方对博莱霉素诱导大鼠肺纤维化细胞外基质的影响。方法 :SD雄性大鼠 54只 ,分为假手术对照组、模型对照组、复方鳖甲软肝方高剂量组、中、低剂量组、强的松组 ,每组 9只。除假手术对照组外其余各组大鼠气管内一次性滴注盐酸博莱霉素 ,假手术对照组大鼠气管内一次性滴注等体积的生理盐水。 2 8d后给药 ,复方鳖甲软肝方高、中、低剂量组 ,强的松组分别灌服复方鳖甲软肝方 1.4,0 .7,0 .3 5g·kg- 1及强的松 0 .56mg·kg- 1,假手术对照组、模型对照组分别灌服等体积的生理盐水。观察 80d时大鼠肺组织羟脯氨酸和血清中Ⅲ (Ⅲ C) ,Ⅳ (Ⅳ C)胶原及层粘连蛋白 (LN)和透明质酸 (HA)的含量 ,同时取肺组织行HE ,Masson染色。结果 :复方鳖甲软肝方可降低肺纤维化大鼠Ⅰ ,Ⅲ胶原 ,层粘连蛋白及透明质酸含量 ,减轻肺组织纤维性增生。结论

鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物的耐药机制研究

目的探讨鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物耐药机制。方法K-B法检测19株鲍曼不动杆菌对4种氨基糖苷类药物的敏感性,聚合酶链反应(PCR)检测氨基糖苷类修饰酶基因。结果14株鲍曼不动杆菌携带aacA4基因,检出率为74%。结论aacA4型氨基糖苷类修饰酶是鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物耐药的重要机制。

卷柏等5种中药植物雌激素活性筛选的实验研究

目的:对几种中药进行了植物雌激素的活性筛选。方法:采用动物实验结合报告基因技术,对5种中药进行了植物雌激素活性的研究。在体动物实验:采用出生21 d刚断乳昆明种雌性小鼠,随机分组,分别给予卷柏、松针、石胆草、贯众、益母草水提取物,阳性药为尼尔雌醇,持续给药7 d后处死小鼠,子宫称重,计算子宫系数;以雌激素应答元件(ERE)调控的报告基因瞬时表达检测,用荧光素酶检测试剂盒检测细胞上清液荧光素酶的活性,筛选出对α亚型雌激素受体(ERα)或β亚型雌激素受体(ERβ)有作用的中药。结果:卷柏提取物可使小鼠子宫重增加(P<0.01);且ERE调控的报告基因瞬时表达检测中,不论由ERα或ERβ介导均具有雌激素活性(P<0.01)。进一步子宫增重实验,对卷柏的有效部位进行了筛选,确定卷柏的有效部位为水部位和正丁醇部位。结论:卷柏及其水部位和正丁醇部位具有雌激素活性,且卷柏与ERβ的亲和力比与ERα的亲和力大,说明卷柏激活基因转录主要是通过ERβ介导的。

大豆异黄酮类成分对去卵巢大鼠脂质代谢的影响

目的 :观察大豆异黄酮中主要成分染料木素 (genistein ,G)、大豆苷元 (daidzein ,D)及其苷对于去卵巢大鼠脂质代谢的影响。方法 :Wistar雌性大鼠 ,双侧摘除卵巢 ,手术后 1周 ,分为假手术组、模型组、雌激素组 ,大豆苷元高、中、低剂量组 ,染料木素高、中、低剂量组和大豆总黄酮提取物 (T)高、中、低剂量组 ,灌胃给药 3个月。每天称进食量 ,每周称一次体重 ;实验结束后 ,取血和肝脏 ,进行血清和肝脏胆固醇 (TC)、甘油三酯 (TG)、血清低密度脂蛋白胆固醇 (LDL C)、高密度脂蛋白胆固醇 (HDL C)的测定。结果 :大豆苷元及大豆总黄酮提取物能明显抑制大鼠体重和进食量的增长 (P <0 0 1) ,抑制腹部脂肪的堆积 (P <0 0 0 1) ,染料木素无明显作用 ;大豆苷元降低血清中TC、LDL C的浓度 (P <0 0 5 ) ,对于血清中甘油三酯TG、HDL C没有明显的作用 ,而染料木素可以降低LDL C(P <0 0 1)且升高HDL C(P <0 0 5 ) ,但对于TC、TG无作用 ;大豆苷元、染料木素及大豆总黄酮均能降低肝脏中TC、TG的浓度 (P <0 0 0 1)。结论 :大豆苷元可以抑制去卵巢大鼠体重增长 ,减少腹部脂肪堆积 ,降低血浆胆固醇的升高。

葛根黄酮对去卵巢大鼠肝脏脂代谢的影响

目的 :研究葛根黄酮对去卵巢大鼠肝脏脂代谢的作用。方法 :用成年雌性去卵巢大鼠模型 ,以葛根黄酮灌胃 ,观察药物对大鼠体重、腹部脂肪量、子宫湿重及肝脏总胆固醇(TC)、甘油三酯 (TG)的影响。结果 :模型组大鼠去卵巢 6周后体重明显增加 ,腹部脂肪堆积 ,肝内甘油三酯及胆固醇水平提高 ,子宫萎缩。服葛根黄酮后 ,对上述指标均有不同程度的降低作用。结论 :葛根黄酮具有一定的雌激素样作用 。

金雀黄素对人乳腺癌细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的研究金雀黄素对人乳腺癌细胞血管内皮生长因子表达的影响。方法选用两种不同的人乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231体外培养,VEGF免疫组化及原位杂交染色,并用图像分析仪进行定量分析。结果两种人乳腺癌细胞均可转录VEGF-mRNA,并在细胞质中翻译合成相应的蛋白。经金雀黄素处理后两种细胞表达的VEGF都明显减少。结论金雀黄素能通过下调VEGF-mRNA水平,减少VEGF的蛋白表达。

大豆异黄酮与葛根黄酮的雌激素受体调节剂作用机理的研究

由于雌激素替代疗法治疗妇女更年期综合征的副作用日益突出，近年来寻找植物来源的替代物成为世界许多科学家共同关心的课题。本课题首次系统地研究了葛根与大豆异黄酮的雌激素受体调节剂作用。

补肾方药对氢醌诱发的背毛脱色小鼠酶活性的影响

氢醌(hydroquinone,HQ)是体内外有效的黑素生成抑制剂,对人的皮肤和毛发具有可逆性脱色素作用,是治疗皮肤色素过度沉着性疾病的脱色素制剂。本实验旨在通过研究 HQ 对酪氨酸酶及酪氨酸酶相关蛋白-2(tyrosinas related protein-2,TRP-2)活性的影响,进一步探讨 HQ 脱色素的酶学机制,并为筛选促进黑素合成的中药方剂提供初步的实验依据。材料与方法1 材料1.1 动物 6周龄健康雌性 C57BL 黑色小鼠30只,由中国医学科学院实验动物中心繁育场提供。常规喂养2周后随机均分为对照组、模型组和治疗组,每组10只。

博莱霉素对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞功能的损伤

目的探讨博莱霉素(BLM)对肺泡Ⅱ型上皮细胞(AT-Ⅱ)功能的损伤作用。方法向SD大鼠气管内一次性注入BLM复制肺纤维化模型,对照组注入生理盐水,分别于7、14和28d在1.5%戊巴比妥钠麻醉下行支气管肺泡灌洗,膜天平法测定肺表面物质(PS)活性。不同浓度博莱霉素直接刺激培养正常成年大鼠的AT-Ⅱ,荧光定量(FQ)PCR检测AT-Ⅱ表面活性物质蛋白(SP)A、B及水通道蛋白(AQP1)mRNA的表达。结果7d模型组动物出现低氧血症及PS活性明显降低;14d逐渐好转,但仍然低于正常;28d基本恢复正常。BLM刺激AT-Ⅱ组与空白对照组比较,SP-A、SP-B及AQP1mRNA表达均明显降低(P<0.001)。结论博莱霉素具有细胞毒性,可降低AT-Ⅱ分泌的SP-A、SP-B及AQP1mRNA的表达,使PS系统功能异常,从而导致低氧血症及肺水肿的发生。

胸腔镜下胸交感神经部分切断术治疗手汗症55例舒适护理

将106例行胸腔镜下胸交感神经部分切断术的手汗症患者,按手术日期单双号分为实验组55例与对照组51例,对照组行常规护理,实验组在此基础上由相对固定并经过培训的护士进行全程指导并实施舒适护理。结果两组患者术后疼痛、烦躁发生率及对护理工作的满意度比较差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。认为在常规护理的基础上实施舒适护理可降低患者术后不良反应发生率,提高其对护理工作的满意度。

3’取代吲哚类衍生物诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的 :研究 3 吲哚乙基 (3’ 甲基 2’ 酮 )戊酰胺诱导HL 6 0细胞凋亡的作用机制。方法 :用DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪分析 3 吲哚乙基 (3’ 甲基 2’ 酮 )戊酰胺对HL 6 0细胞的凋亡诱导作用 ,检测天冬酰胺特异酶切的半胱氨酸蛋白酶 (Caspase) 8和Caspase 3活性来研究其对HL 6 0细胞的凋亡诱导途径 ,并通过间接免疫荧光技术检测其对Bcl 2表达的影响。结果 :1 8%DNA琼脂糖凝胶电泳可观察到清晰的“DNAladder” ,流式细胞仪检测 3 吲哚乙基 (3’ 甲基 2’ 酮 )戊酰胺对HL 6 0细胞具有明显的凋亡诱导作用。Caspase活性检测表明 ,Csapase 3活性明显升高而Caspase 8活性无明显变化。流式细胞仪分析表明Bcl 2的表达随着受试物浓度的升高而下降。结论 :3 吲哚乙基 (3’ 甲基 2’ 酮 )戊酰胺可诱导HL 6 0细胞凋亡 ,其诱导凋亡与Bcl 2表达及Caspase 3活性有关。

温和通胀下的适度加息策略——央行加息的主要原因及影响

2004年10月28日,在一直为人民币升值和加息传闻辟谣的背景下,中国人民银行突然决定,从10月29日起,金融机构存贷款基准利率各上调0.27%.本文解析了2004年央行加息的主要影响,分析2005年利率与汇率的调整策略.

浙江省区域科普非均衡发展的实证分析及经济协调发展的对策

浙江省经济的非均衡性发展,从而导致北部科学技术普及与经济发展水平明显高于东南、西南地区。通过分析全省北部与东南、西南三大区域之间科普非均衡发展现状,指出区域科普发展与其经济水平之间存在的相互关系。同时,探讨科学技术普及与经济发展的互动机制,最后提出了促进我省区域科学技术普及与经济协调发展的对策。

新课标背景下的文本情与意品读探析

要读透文章、读懂作者、读懂人生,达到文道合一的境界,就要引导学生通过吟诵,感受文字之美;通过揣摩,研究语义之别;通过咀嚼,品味情感之真;通过体验,感受生活之美。

浅析个性化语文课堂的构建

不知不觉间,我们的语文课堂开始越来越重视学生内心的体验和复杂的心理,注意其情感、态度、价值观这些人性深层次的内容。我们的语文教师,也越来越重视自由地展现自己、丰富自己、创造自己。教学中不会挖掘、发展、张扬自己的个性,最终'泯然众人矣',丧失个性魅力,只会照本宣科,是语文教师最大的悲哀。每一个语文教师都应该寻找、发现自己的优势,并善于将这些闪光点与教学的各个环节契合起来,教出有别于他人、彰显自己个性的东西。笔者回顾个人发展的历程.