放射治疗增生性瘢痕的分子生物学机制

目的利用基因芯片技术，筛选放射治疗后增生性瘢痕的基差异表达，探讨其分子生物学机制。方法选择两例增生性瘢痕，术前进行1疗程的放射治疗，并将治疗前后的瘢痕标本，制成cDNA探针，与含4 000个人类基因的芯片杂交，扫描分析比较治疗前后的差异表达。结果两例平均62个基因出现差异表达，上调约30个，下调约32个，其中凋亡基因、抑癌明显上调，而原癌、细胞周期、蛋白合成类下调明显。结论放射治疗增生性瘢痕是有多面作用，主要通过抑制增殖和生物合成，促进细胞凋亡而实现。

前纤维蛋白在增生性瘢痕收缩中的作用

目的探讨前纤维蛋白在增生性瘢痕形成与收缩中所起的作用及意义。方法收集患者不同时期增生与非增生瘢痕作为研究对象,利用前纤维蛋白的基因特异片段,制成寡核苷酸探针与瘢痕组织切片原位杂交,同时,将各标本进行组织块培养,制成成纤维细胞爬片,进行原位杂交,分析基因在组织与细胞中变化规律。结果前纤维蛋白基因在早期增生性瘢痕中表达均明显强于晚期增生及非增生瘢痕。结论瘢痕增生挛缩与细胞骨架运动的相关基因存在密切关系,而前纤维蛋白起到十分重要的作用。同时,如果抑制该基因的表达,可能实现减轻瘢痕挛缩。

重组正反义α-SMA逆转录病毒载体对瘢痕与皮肤成纤维细胞的影响

目的 利用α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA)基因重组反义和正义逆转录病毒载体 ,探讨α SMA逆转录病毒对瘢痕与皮肤成纤维细胞的影响。方法 用含α 平滑肌肌动蛋白cDNA ,重组反义和正义逆转录病毒载体 ,并感染培养的瘢痕和皮肤成纤维细胞 ,进行α SMA在蛋白水平表达等的研究 ,观察瘢痕与皮肤成纤维细胞形态学与功能的变化。结果 反义α SMA逆转录病毒抑制了瘢痕成纤维细胞的增殖 ,细胞形态变小 ;α SMA在瘢痕与皮肤成纤维细胞表达降低 ,并随着作用时间延长 ,效果更明显 ;正义α SMA逆转录病毒则具有相反的作用 ,促进α SMA的表达。结论 α SMA重组病毒对瘢痕与皮肤成纤维细胞的形态、生长。

肌钙蛋白在增生性瘢痕中作用的研究

目的:探讨肌钙蛋白在增生性瘢痕形成与发展中所起的作用及意义。方法:收集患者不同时期增生性与非增生性瘢痕作为研究对象,利用肌钙蛋白的基因特异片段,制成寡核苷酸探针与瘢痕组织切片原位杂交,同时,将各标本进行组织块培养。制成成纤维细胞爬片,进行原位杂交,分析其变化规律。结果:肌钙蛋白基因在早期增生性瘢痕中表达均明显强于晚期增生性及非增生性瘢痕。结论:瘢痕增生挛缩与细胞骨架运动的相关基因存在密切关系,而肌钙蛋白起到十分重要的作用。同时,抑制该基因的表达,可能实现减轻瘢痕增生与挛缩。

分泌的凋亡相关蛋白基因在增生性瘢痕中的分布与作用

目的探讨分泌的凋亡相关蛋白基因SARP1在增生性瘢痕形成与发展中基因分布特点与变化趋势以及在增生性瘢痕中所起的作用及意义。方法收集患者标本,增生性瘢痕12例,非增生瘢痕12例,按伤后3、6、9、12个月不同时间分组编号。另设正常皮肤对照12例,作为研究对象。利用SARP1的基因特异片段制成寡核苷酸探针,与瘢痕组织切片和成纤维细胞爬片原位杂交,统计学处理后分析其变化规律。结果早期增生性瘢痕中,SARP1基因的探针在组织细胞中有较强的阳性反应,而非增生瘢痕阳性反应较低,正常皮肤则更少。观察所有的标本,3～6个月增生性瘢痕中SARP1的表达,无论阳性细胞的数量,反应的着色程度,明显强于9～12个月增生性瘢痕、非增生瘢痕与正常皮肤。成纤维细胞玻片原位杂交结果存在相同的结果。结论瘢痕增生与分泌的凋亡相关蛋白基因之间,存在密切关系,而SARP1起到十分重要的作用。同时,调节该基因的表达,有望实现减轻瘢痕增生。

放射治疗瘢痕挛缩的生物学机制

目的利用基因芯片技术,筛选放射治疗挛缩性瘢痕的细胞骨架及运动基因差异表达,探讨其分子生物学机制。方法选择3例增生挛缩瘢痕,术前进行1个疗程的放射治疗,并取治疗前后的瘢痕组织,制成cDNA探针,与含4000个人类基因的芯片杂交,扫描分析治疗前后的差异表达。结果3例约15个相关基因均出现差异表达。结论放射治疗能明显抑制瘢痕挛缩,主要通过抑制细胞骨架运动,促进细胞凋亡而起作用。

CTLA4Ig表达质粒的基因枪转染皮肤及细胞的实验研究

目的 利用基因枪技术提高CTLA4Ig的cDNA的转染效率。 方法 设基因枪局部转染组 ,注射器局部注射组和肌肉注射组 ,并构建 pCTLA4Ig IRES2 EGFP表达载体 ,将质粒注射入皮肤 ,观察三种方法转移CTLA4Ig目的DNA的存留时间。同时 ,体外培养ECV、2 93细胞 ,用基因枪或逆转录病毒载体转染上述质粒 ,观察质粒的转染及表达情况。结果 基因枪转移基因至细胞、皮肤的效率明显好于其他方法 ,但对细胞 ,基因枪的初始压力不能太高 ,否则 ,细胞容易死亡。

原癌基因N33在增生性瘢痕中表达的研究

目的 探讨原癌基因N33在增生性瘢痕的形成与发展中基因分布特点与变化趋势。以及在增生性瘢痕中所起的作用及意义。方法 收集增生性瘢痕患者24例、非增生性瘢痕患者24例不同时期的标本，按伤后3、6、9、12个月分组编号。另设12例患者的正常皮肤作为对照组。利用原癌基因N33的基因特异片段制成寡核苷酸探针，与瘢痕组织切片和成纤维细胞爬片原位杂交。经统计学处理后，分析其变化规律。结果 早期增生性瘢痕中，N33基因的探针在组织细胞中有较强的阳性反应．而非增生瘢痕则阳性反应较低，正常皮肤组的阳性反应更少。经对所有标本的观察，增生性瘢痕3～6个月的N33表达，阳性细胞的数量、反应的着色程度，均明显强于9～12个月增生性瘢痕、非增生性瘢痕与正常皮肤组。将增生性瘢痕组与非增生性瘢痕组比较，两者差异有极显著意义。成纤维细胞爬片杂交结果与组织切片存在相同的结果。结论 瘢痕增生与细胞原癌基因及抑癌相关基因之间存在密切关系，而原癌基因N33起到十分重要的作用。同时，调节该基因的表达，有望减轻瘢痕的增生。

反义及正义α-平滑肌肌动蛋白逆转录病毒载体的构建与表达

目的:将人的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)基因,与载体pLXSN质粒连接,重组反义和正义逆转录病毒载体,评价含α-SMA的逆转录病毒的转染能力,为瘢痕的基因治疗提供一种新的手段。方法:含人类α-SMA cDNA目的片段的pBS/SK质粒和载体pLXSN质粒连接分别酶切、再平末端化、酶连接反应,重组反义和正义α-SMA cDNA的质粒,构建逆转录病毒载体,并用DOTAP转染培养细胞,RT-PCR鉴定。结果:NIH3T3细胞被反义和正义重组逆转录病毒感染且携带目的基因的病毒基因组正确整合到NIH3T3细胞基因组中;pLXSN/as-SMA感染NIH3T3细胞后胞体逐渐失去典型的梭形,突起变短。与之相反,pLXSN/s-SMA感染NIH3T3细胞后细胞突起长,与相邻突起开始形成连接。辅助病毒检测没有发现抗性克隆出现。结论:反义和正义α-SMA重组逆转录病毒可以高效感染包装细胞,目的基因正确整合到细胞基因组中。

反义及正义α-SMA的表达对成纤维细胞与平滑肌细胞的影响

目的:利用α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)基因,重组反义和正义逆转录病毒载体,评价α-SMA逆转录病毒对NIH3T3细胞和血管平滑肌的影响。方法:用含全长α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)cDNA的质粒DNA的酶切、连接,重组反义和正义α-SMA的目的cDNA,构建逆转录病毒载体,并感染培养的NIH3T3细胞与平滑肌细胞,进行细胞形态学和基因表达的观察。结果:反义和正义重组逆转录病毒能够携带的目的基因并成功整合到NIH3T3细胞基因组中;利用两种逆转录病毒分别感染NIH3T3、血管平滑肌细胞,发现对细胞生长和形态有一定的影响,反义重组逆转录病毒使细胞活性下降、基因表达减弱,而正义重组逆转录病毒使细胞活性下降、基因表达增强明显。结论:α-SMA重组病毒对细胞的形态、突起的生长甚至细胞的生存均有影响。

SFRP2与Periostin的相互作用在瘢痕疙瘩形成机制中的研究

目的利用pull-down技术验证凋亡相关蛋白基因SFRP2(Secreted frizzled-related protein2)和骨母细胞特异性因子-2Periostin(Osteoblast-specific factor2)间的相互作用。方法构建能在哺乳动物细胞中表达带HA标签的Periostin融合蛋白(HA-Periostin)的重组载体pCMV-HA-Periostin,经酶切鉴定正确后,和表达带Myc标签的融合蛋白(Myc-SFRP2)的重组真核表达载体pCMV-HA-SFRP2,单独或共转染人293细胞,利用pull-down技术验证Periostin与SFRP2间的相互作用。结果成功构建重组载体pCMV-HA-Periostin,与抗Myc单克隆抗体沉淀Myc-SFRP2相互作用蛋白复合物后,可以检测到HA-Periostin的表达。通过体外蛋白质结合实验证实了Periostin与SFRP2间的相互作用。结论成功构建带HA标签的Periostin融合蛋白(HA-Periostin)的重组载体,利用pull-down技术证实了Periostin与SFRP2间的存在相互作用。

增生性瘢痕相关基因的筛选

目的 利用基因芯片技术寻找增生性瘢痕形成过程中的相关基因 ,并发现相关基因间的相互关系 ,探讨增生性瘢痕的机理。方法 选择 6例标本 ,3例增生性瘢痕与 3例正常皮肤 ,分成 3组 ,提取各个标本的总DNA ,制成荧光标记的cDNA探针 ,与含 4 0 0 0个人类靶基因的芯片 ( 15 0 0个为已知基因 ,2 5 0 0个为未报道或未知功能的基因 )杂交 ,经扫描、生物信息学分析比较两种组织间的差异表达。结果 增生性瘢痕与正常皮肤的差异表达基因在 3组间仅出现 1次的有 3 96个、重复 2次出现的有 186～ 2 4 2个、共同出现的有 116个 ,其中上调 10 8个、下调 8个 ,涉及 13大类基因 ,包括抑癌与原癌基因、细胞凋亡、细胞骨架与运动蛋白、细胞周期类蛋白等 ,有些为已知基因 ,有些仍未知其功能。结论 基因芯片扫描对研究增生性瘢痕有效可靠 。

C-mer在增生性瘢痕中表达与意义

目的 原癌基因C mer与增生性病变关系密切。本研究探讨它在增生性瘢痕中所起的作用及意义。方法 收集瘢痕作为研究对象 ,利用原癌基因C mer的基因特异片段制成寡核苷酸探针 ,与瘢痕组织切片和成纤维细胞爬片原位杂交 ,统计学处理后分析其变化规律。结果 早期增生性瘢痕中C mer基因的探针在组织细胞中有较强阳性的反应 ,而非增生瘢痕则阳性反应较低 ,正常皮肤则更少。将增生性瘢痕与非增生瘢痕对比 ,二者差别特别显著。成纤维细胞爬片杂交结果存在相同的结果。结论 原癌基因C mer与瘢痕增生之间存在密切关系。同时 ,抑制该基因的表达 ,有望实现减轻瘢痕增生。

猴移植皮肤感觉再生的实验研究

目的移植皮肤的感觉再生缺乏深入的实验研究。通过恒河猴额部与手指掌侧无毛皮肤的相互移植,观察无毛皮肤移植后感觉小体再生过程与再生类别。方法实验用恒河猴2只,随机抽取前肢指4个,将指腹与额、臀部的无毛皮对换移植,在3,9个月时切取标本进行抗神经丝免疫组化与电镜观察。结果移植皮肤在3个月时神经末梢与触觉小体开始不典型再生;9个月的皮肤内已有典型的再生触觉小体,而上皮细胞—轴突复合体内有神经长入;移植皮肤内有较多的再生触觉小体,上皮细胞—轴突复合体有完整的再生结构。结论移植皮肤内存在感觉小体的再生,这些结构与移植后的功能需要有关。

细胞骨架及运动基因对瘢痕挛缩作用的实验研究

目的:探讨细胞骨架和运动相关基因与瘢痕挛缩的关系以及这些基因间的相互作用。方法:收集病人不同时期增生与扁平瘢痕作为研究标本,利用基因芯片筛选结果选择表达最强、涉及细胞结构主要方面的5个基因,制成寡核苷酸探针与瘢痕组织切片原位杂交。同时,将各标本进行组织块培养、成纤维细胞爬片、原位杂交。结果:各种基因在早期增生性瘢痕中表达均明显强于晚期增生及扁平瘢痕;其中,α-平滑肌肌动蛋白出现早、持续时间长、表达明显强于其他基因;更有意义的是,它在增生性瘢痕与扁平瘢痕之间表达差异显著大于其他。结论:瘢痕增生挛缩与细胞骨架运动的各方面相关基因存在密切关系,而平滑肌肌动蛋白起到关键与首要的作用。同时,各种基因参与其启动与形成,抑制该基因的表达,可能实现减轻瘢痕挛缩。

大脚骨,美丽背后的烦恼

两年前，红红感觉右脚有些疼痛，大脚趾旁边的骨头有点突出。由于痛得不明显，红红也没特别在意。一天，刚发了工资，红红准备给自己添置双新皮鞋，好不容易选中一双时尚新潮的高跟鞋。可没穿两天，问题出现了：新买的皮鞋被顶出两个包不说。右脚更是疼痛难忍，大脚趾关节又红又肿。医生告诉红红，她患拇外翻，也就是常说的大脚骨已经很长时间，病情已经严重到影响她的正常行走，建议手术治疗。

鼠咬伤后鼻缺损的分类及手术方式初探

目的探讨鼠咬伤后鼻缺损的分类标准,以指导临床修复方法的选择。方法回顾性分析1998年10月至2010年4月我院收治的26例鼠咬伤后鼻缺损患者。依据鼻缺损的部位及范围对其进行分类。采用"鼻唇沟皮瓣"、"耳廓复合组织瓣"、"上臂内侧管状皮瓣"、"前额扩张皮瓣"等术式修复鼻缺损。结果将本组26例鼠咬伤后鼻缺损分为四类:Ⅰ类,鼻尖缺损4例;Ⅱ类,单纯鼻翼缺损6例;Ⅲ类,鼻尖和部分鼻翼缺损2例;Ⅳ类,全鼻缺损14例。并根据分区修复的方法对其进行修复,经过临床6个月至3年随访,26例患者均获得满意修复效果。结论对鼠咬伤后鼻缺损进行科学分类有助于选择最佳手术方式,依据分区修复的方法对鼠咬伤后鼻缺损进行修复疗效较好。

外用环孢素A联合CTLA4Ig延长异体移植鼠耳存活的研究

目的 探讨局部外用环孢素 A(Cs A)联合细胞毒性淋巴细胞相关抗原 4融合蛋白 (CTL A4 Ig)对异体复合组织移植的免疫抑制及诱导免疫耐受的作用。方法 建立吻合血管的同种异体大鼠耳廓移植模型 ,术后在移植耳皮肤表面外涂 Cs A并联合 CTL A4 Ig腹腔注射治疗 ,观察移植物的排斥反应及存活时间 ,检测移植后受体血清白细胞介素 - 2 (IL- 2 )含量变化。结果 对照组平均存活时间为 (7.8± 1.7)天 ;单纯用 Cs A治疗组为 (15 .2± 1.9)天 ,单纯CTL A4 Ig治疗组为 (16 .6± 2 .1)天 ;Cs A +CTL A4 Ig联合治疗组为 (2 8.8± 3.5 )天 ,与其它各组相比均有统计学意义 (P<0 .0 1) ;且联合治疗组的受体血清 IL - 2含量最低 ,尤以第 5、7天为著 ,与其它各组相比有统计学意义 (P<0 .0 1)。结论 局部外用 Cs A联合 CTL A4 Ig能有效抑制异体复合组织移植排斥反应 ,显著延长移植物存活时间。

改良三瓣法额肌瓣悬吊术治疗重度上睑下垂临床观察

目的探讨改良三瓣法额肌瓣悬吊术矫正重度上睑下垂的临床效果,恢复上睑功能和视功能,同时达到美容的目的。方法对36例(47只眼)重度上睑下垂患者行改良三瓣法额肌瓣悬吊的手术治疗。结果 36例(47眼)中,满意38眼,占80.85%,良好8眼,占17.02%,失败1眼,占2.13%。半年后对失败的上睑下垂患者予以2次手术,上睑下垂得到矫正。术后获随访6个月,均获得满意的效果,无并发症。结论改良三瓣法额肌瓣悬吊术治疗重度上睑下垂,力度分散,并发症少,效果良好,重睑自然,恢复快。

629例爱贝芙注射去除面颈部横纹的近期效果分析

目的观察爱贝芙药物注射对面部不同部位除皱的近期效果。方法收集2004年1月至2010年12月我院整形美容科收治行面部除皱患者629例,男性45例,女性584例,平均年龄43.5(28～64)岁。应用爱贝芙进行面部除皱的患者,根据药物注射部位分为:鼻唇沟皱纹305例、眉间川字皱纹182例、颈部横纹37例、额部抬头纹54例、眼角鱼尾纹32例、鼻梁横纹19例分组观察。在注射当日,注射后1、3、6、12个月分别比较不同组别之间除皱的效果,综合分析爱贝芙注射除皱的近期效果。结果注射爱贝芙除皱当日,各种面颈部皮肤皱纹均可以消失,或明显消失;注射后1个月,仍然维持在术后当日的效果;注射后3～6个月理想的效果逐渐减弱;12个月效果明显超过注射当日。鼻唇沟皱纹、眉间川字纹、鼻梁横纹、颈部横纹去除的近期效果好于额部抬头纹和眼角鱼尾纹。结论应用爱贝芙进行注射去除面颈部横纹是一项新兴的技术,经过几年我科广泛运用,术后患者满意度高,是目前值得推广的注射除皱方法之一。